转基因大豆分子检测技术方法的建立与应用

【摘要】随着生物基因工程技术的发展,转基因技术在现代农业发展中起着不可替代的作用,越来越多转基因农作物,在全球范围内大面积种植。本文以转基因大豆为实验材料,对转基因的检测方法进行初步的研究。大豆是人类食品中主要的植物蛋白来源,是现代农业十分重要的农作物之一,但随着人们生活水平的提高,大豆的产量逐渐开始无法满足人们的生活需求,利用转基因技术是增加大豆产量最有效的途径之一。自首次报道大豆成功转化以来,很多研究人员相继进行大豆转化方面的成功报道。随着转基因作物商业化的种植,转基因作物的安全性,引起了人们的密切关注。因此,为了消费者的权益,转基因植物的检测是转基因研究的必须环节,只有准确地检测转基因含量以及成分,才能有效的对转基因作物进行实时监控。本文主要工作如下：1.用定性PCR方法检测了转基因大豆中CaMV35启动子,NOS终止子,NPTII基因等通用元件,初步判断是否为阳性转基因大豆,为后面特异性的定性检测奠定基础。2.根据转基因大豆目基因GmCBL和NAC5和CaMV35S启动子序列设计两个引物,建立了转基因大豆GmCBL和NAC5的品系特异定性PCR检测方法.这种方法所检测的PCR产物既包含了作物基因组序列,又包含了目的基因的序列,是高度特异的,并对其PCR产物检测测序验证,排除了由于植物花椰菜花叶病毒感染等因素所导致的假阳性结果。3.在定性检测的基础上,以转基因大豆Gm7α亚基为研究对象,利用绝对定量的实时荧光定量PCR法检测转基因大豆的拷贝数,以Tubulin作为大豆的内源参照基因,通过含BAR基因的阳性质粒构建标准曲线,获得了目的基因在转基因大豆中的拷贝数。
【作者】杨文明；
【导师】喻德跃；
【作者基本信息】南京农业大学，作物，2013，硕士
【关键词】转基因检测；定性PCR；荧光定量PCR；拷贝数；

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