ACTH和LPS对猪血液指标及肝脏胆固醇代谢的影响

ACTH和LPS对猪血液指标及肝脏胆固醇代谢的影响

作者:师大云端图书馆 时间:2017-10-12 分类:硕士论文 喜欢:3654
师大云端图书馆

【摘要】本试验旨在探索ACTH和LPS两种不同的刺激状态下猪血液及肝脏中的生理生化指标变化,以期能综合全面地评价动物的应激状态,并发现能灵敏反映应激状况的标记物,为动物福利健康养殖奠定理论基础。试验选取不同猪场不同品种的猪进行血液生化指标和血细胞常规数据的分析;研究肌肉注射ACTH对猪血液指标瞬时和短期的影响;检测LPS注射对猪血液指标的影响并对其肝脏中的胆固醇代谢相关基因及蛋白进行进一步的研究。1肌肉注射ACTH对猪血液指标瞬时和短期的影响选择15-20kg的杜洛克×长白×大白去势猪16头,随机分为2个处理组,ACTH组(ACTH)和对照组(Control)。每个处理设8个重复,每个重复1头猪。全部单独饲养。进行颈静脉瘘管手术,护理7天彻底恢复后,对猪进行ACTH注射实验。正式试验开始第一天,实验组每天9:00和16:00分两次肌肉注射ACTH1IU/KGBW(事先溶解于生理盐水中,使其终浓度为5IUACTH/ml),对照组注射等体积无菌生理盐水。连续注射7d。第5d注射后15,30,45,60,90,120min,由血管瘘管进行采血5ml,EDTA抗凝制血浆,-20℃冰箱中保存备用。连续注射7天后,于第8天上午8:00称重后屠宰。屠宰时取血液分离血浆,-20℃保存。采用放射免疫法分析注射后2小时血浆中皮质醇、ACTH、T3、T4、TNF-α的动态变化过程,采用气相色谱质谱系统(SHIMADZUGC/MSQP2010Ultra/SE,Kyoto,JAPAN)对血液中的氨基酸及其他代谢小分子物质进行检测。结果发现,ACTH注射后2h内,实验组血浆中的皮质醇、ACTH和T3水平均先显著上升,在30-45min时达到峰值,之后逐渐下降,直至恢复正常水平。连续注射一周后检测血浆中的皮质醇,实验组低于对照组,其血液中T3、T4、生化指标、度部分氨基酸均变化不明显,但血液中的苏氨酸水平比对照组显著降低。2ACTH与LPS注射对猪血液指标及肝脏胆固醇代谢的影响选取洋三元公猪24头,体重为12±0.5kg。按体重相近随机分为4组:对照组,ACTH注射组,LPS注射组,ACTH和LPS联合注射组。第一天上午9:00开始注射,每6h注射一次,注射前禁食。对照组和LPS组肌肉注射生理盐水,ACTH组与ACTH和LPS联合注射组肌肉注射ACTH1-39,剂量为2.25IU/KGBW,用前稀释为5IUACTH/ml。注射生理盐水的体积与ACTH体积相同。连续注射2天ACTH后,在第3天上午9:00对LPS组及ACTH和LPS联合注射组仔猪肌肉注射LPS,剂量为15μg/kg体重。对照组和ACTH组注射相同体积的生理盐水。注射LPS后6h屠宰采样。采血制得血浆。取肝脏相同部位进行肝脏石蜡组织切片制作。另取肝脏样品冻存并检测总胆固醇、总胆汁酸、胆固醇代谢相关基因和蛋白。结果发现ACTH注射对仔猪的肝脏形态影响不明显,虽然血液中总胆固醇和甘油三脂显著升高,但肝脏中与胆固醇代谢相关的基因表达未出现显著性变化。而LPS注射组的仔猪肝脏受损严重,炎症反应剧烈,血液中皮质醇和肿瘤坏死因子的水平显著升高,且肝脏胆固醇代谢相关的部分基因表达水平发生了极显著的下降,表明其胆固醇代谢模式发生了很大的改变。3不同猪场猪血液理化指标及猪场养殖健康状况分析选取5个猪场对不同品种和不同日龄的猪进行调查。并用颈静脉采血分离血清。采用自动生化分析仪(OLYMPUSAU2700)对血液常规生化指标进行检测,血细胞常规采用血球仪(HB7021,SINNOWA)进行检测。参照欧盟WelfareQualityTM中的评分规则对猪场的健康状况进行打分。研究结果表明良好的饲养条件与猪血液中的红细胞数目、HDL-C、淋巴细胞数目成正相关,与中性粒细胞数目、甘油三酯成负相关;良好的圈舍条件与总胆固醇、LDL-C成正相关;健康状况与红细胞数目、红细胞压积成正相关。红细胞中的血红蛋白具有携带氧气的功能,良好的饲养和圈舍环境中生长的猪,其血液中的红细胞数目和血红蛋白含量均较高。高密度脂蛋白所携带的胆固醇,即HDL-C是机体中的“好胆固醇”,它是逆向转运的内源性胆固醇酯,通过此途径,血液中的胆固醇被运输都肝脏内,转变为胆汁酸或通过其他途径排出体外。饲养状况良好的猪,其血液中的HDL-C含量与其成正相关。
【作者】刘为凤;
【导师】杨晓静;
【作者基本信息】南京农业大学,基础兽医学,2013,硕士
【关键词】猪;血常规;生化指标;ACTH;LPS;胆固醇代谢;

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