菊芋贮藏致病菌的拮抗菌株筛选及一株海洋假单胞菌拮抗特性的研究

菊芋贮藏致病菌的拮抗菌株筛选及一株海洋假单胞菌拮抗特性的研究

作者:师大云端图书馆 时间:2017-08-23 分类:硕士论文 喜欢:3221
师大云端图书馆

【摘要】菊芋(Helianthustuberosus)是菊科向日葵属多年生草本植物,具有很强的生态适应性,现广泛种植于世界各地。作为一种能源作物,菊芋已成为生物质领域的研究热点。同时它还被用作食品、发酵产乙醇和其他工业产品等。但是,受各种人为和自然因素影响,菊芋仓储期极易发生腐烂,进而成为阻碍菊芋产业规模化发展的制约因素。为了解决菊芋贮藏保鲜问题,本文从生物防治角度筛选分离菊芋贮藏腐烂微生物的拮抗菌株,并对其拮抗机理做了初步研究,为实际生产应用提供一定的理论基础。以自然贮藏条件下的“南芋1号”腐烂菊芋块茎为研究对象,分离鉴定出病原微生物,回接试验验证了致病菌类型;以致病菌为研究对象分离海洋源拮抗微生物,选择拮抗效果明显的JK2菌株作进一步研究,鉴定了其所属菌种;对JK2抗菌代谢产物和在菊芋块茎切片上对致病菌的防治效果做了初步的探究与分析。主要的研究结果如下:1.本研究从腐烂的菊芋块茎组织中分离出了14株病原菌株,其中10株属于真菌,4株属于细菌。通过对它们的形态学观察、生理生化特征分析和分子学鉴定(ITS序歹/16SrRNA序列),与NCBI上的序列进行比对获得最大相似性序列菌株、构建系统发育树综合分析可知,这10株病原真菌分别属于极细链格孢菌Alternariatenuissima(M1、M3、M4和M5),溜曲霉Aspergillustamarii(M2,M10),极细枝孢Cladosporiumtenuissimum(M6),烟曲霉Aspergillusfumigatus(M7),米曲霉Aspergillusoryzae(M8),镰刀菌Fusariumoxysporum(M9);分离到的病原细菌分别属于沙雷氏菌Serratiaplymuthica(B1),假单胞菌Pseudomonassp.(B2),芽孢杆菌Bacillusmethylotrophicus(B3)和芽孢杆菌Bacillussp.(B4).根据科赫原理,对菊芋块茎组织的回接试验发现病原真菌对菊芋块茎的致病率多数在50%以上,而病原细菌未能导致菊芋块茎明显的腐烂迹象,证明导致菊芋腐烂发生的主要致病菌是真菌类病原微生物,因此以这十株病原真菌为防治对象筛选拮抗菌株。2.从三亚采集的海水、海底底泥和红树林底泥等样品中分离到了331株菌株。以致病真菌为抑菌对象,利用平板对峙方法经过初筛和复筛获得29株分别对M1-M10中一个或者多个菊芋腐烂菌有拮抗效果的菌株。其中从海泥(海底底泥和红树林底泥)中共分离227株,占总菌株数量的68.58%,拮抗活性菌21株,占总活性菌株数量的72.41%;从海水样中分离菌株数量不到海泥中的一半,筛选到的有抑菌活性的菌株仅有8株,占其分离比的7.69%。表明分离菌株数量和具活性的菌株数量与样品来源密切相关。其中的拮抗菌株JK2因其对三种菊芋致病真菌(M2、M9和M10)均表现出显著的抑制效果,故对其作进一步的鉴定和拮抗机理的研究。3.对拮抗菌JK2的形态特征分析、生理生化鉴定和16SrRNA序列测定并与NCBI相似性序列比对和构建系统发育树,初步确定菌株JK2为假单胞菌Pseudomonasorientalis.抑菌谱测定结果显示其对玉米大斑病菌、稻瘟菌等植物病原真菌有较强的抑制作用,同时对辣椒疫霉菌和油菜菌核菌也有一定的拮抗效果。表明该菌具有抑制其他农作物病害菌的潜力。不同条件对JK2的生长量测定,发现JK2适宜的盐浓度范围为0-1.5%时,当盐度超过2.0%时生长缓慢。当培养温度范围为20-30℃时,JK2菌生长良好,但在低温下生长缓慢、高温时受到抑制。而当培养基的pH为6.0-9.0时适宜JK2菌生长,表明JK2对酸性和碱性环境敏感。综上结果得出,JK2可能为非严格意义上的海洋微生物,不耐受高温,对酸性和碱性环境敏感。4.为了进一步探究JK2菌的拮抗机理,取共培养对峙实验中JK2菌作用致病真菌的菌丝体部位,在透射电镜下观察发现处理组较对照组的致病真菌发生形变,菌丝细胞壁增厚或者不规则形变,而且细胞器解体甚至消失,细胞壁鞘变形。而对照组菌丝的形态正常,原生质分布均匀,细胞器和内含物无损伤泄露。对JK2菌发酵浓缩液和乙酸乙酯提取胞内代谢物的活性检测表明其并未有明显的抑菌特性,推测JK2菌株可能在液体培养基中不能产生抗菌类物质,在胞内的活性物质可能是小分子信号类物质,其提取方法有待进一步确认。而JK2菌株产挥发性的抗菌物质试验检测结果发现,处理组菌落生长缓慢,菌丝颜色变淡,抑菌率达到48.75%,表明其能产生一定的挥发性抗菌物质。同时JK2在菊芋块茎切片上可直接抑制病原真菌孢子的生长,有一定的生防效果。初步推测JK2是通过分泌挥发性代谢产物或者小分子信号类物质抑制病原菌的生长起到生防作用的。
【作者】金善钊;
【导师】刘兆普;隆小华;
【作者基本信息】南京农业大学,海洋生物学,2013,硕士
【关键词】菊芋;腐烂;致病菌;拮抗菌;海洋假单胞菌;

【参考文献】
[1]耿松松.中国残疾人康复现状与问题研究[D].兰州大学,人口学,2013,硕士.
[2]赵靖英.电子式过载保护继电器的智能化技术与可靠性分析[D].河北工业大学,2004.
[3]朱逸.基于自适应编码调制技术AD HOC物理层设计实现[D].厦门大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[4]潘晓新.色谱—质谱联用技术在纺织品安全和环境激素光降解方面的应用[D].北京化工大学,化学,2013,硕士.
[5]田少卿.林火稳像与识别定位算法研究[D].东北林业大学,林业信息工程,2014,博士.
[6]马超.北京市环境空气中苯系物污染特征的研究及VOCs污染控制对策[D].河北工程大学,环境工程,2012,硕士.
[7]万娟旭.XX银行不良贷款处置研究[D].郑州大学,金融(专业学位),2013,硕士.
[8]李淑阔.淤泥层空间分布与水下淤积测定[D].山东大学,道路与铁道工程(专业学位),2013,硕士.
[9]黄光浩.苏木乙酸乙酯提取物对动脉粥样硬化模型大鼠血清白细胞介素6(IL-6)的影响[D].黑龙江中医药大学,中医内科学,2013,硕士.
[10]周阳.银铜合金团簇的形成、相变与光学性质[D].南京大学,材料物理与化学,2010,硕士.
[11]陈燕.脑源性神经营养因子基因多态性及单体型与多囊卵巢综合征的相关性研究[D].广州医科大学,妇产科学,2014,硕士.
[12]曹弘志.酰氨基取代靛苯胺类蓝色染料的合成[D].大连理工大学,应用化学,2013,硕士.
[13]冯素春,任文华,陈曼雅,彭万敬.基于双芯光纤滤波器和非线性偏振旋转效应的多波长光纤激光器[J].中国激光,2014,06:141-146.
[14]孔磊.分子印迹电聚合膜的研究及其在烟碱类农药特异性检测中的应用[D].华东师范大学,2014.
[15]王娅楠.论网络小说电影改编的特色和文化意义[D].华中师范大学,影视文学,2014,硕士.
[16]黄少珠.高中英语文学阅读“持续默读”教学模式建构[D].福建师范大学,学科教学(专业学位),2012,硕士.
[17]王俭,张朝星,于英谭,李法云,马放.城市水资源生态足迹核算模型及应用——以沈阳市为例[J].应用生态学报,2012,08:2257-2262.
[18]刘斌.椎体结核与椎体恶性肿瘤的氢质子磁共振波谱的对比研究[D].川北医学院,影像医学与核医学,2013,硕士.
[19]李景群.湖南慈利三合口话量词研究[D].河北师范大学,汉语言文字学,2012,硕士.
[20]刘超.渔政船快速性优化设计研究[D].大连理工大学,船舶与海洋结构物设计制造,2013,硕士.
[21]乔俊芳.基于用户视角的《现代汉语词典》名词释义元语言研究[D].四川外国语大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[22]朱晓蕾.嘧啶酮类/7-氮杂吲哚类/呔嗪酮类PARP1抑制剂的设计、合成与抗肿瘤活性研究[D].浙江大学,药学,2013,硕士.
[23]鲍荣.高效增量模型预测控制算法、实现与应用[D].浙江工业大学,2013.
[24]詹琼.参与式教学在高中物理部分实验中的探索[D].贵州师范大学,2005.
[25]张华桁.工作流关键技术研究及轻量级引擎构件建构[D].东华大学,电力电子与电力传动,2004,硕士.
[26]王华玉.我国商业银行客户经理制再造研究[D].首都经济贸易大学,金融学,2004,硕士.
[27]符磊.感应式空心线圈传感器关键技术研究[D].吉林大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[28]王超.大粗隆钢板结合异体皮质骨板治疗Vancouver B3型股骨假体周围骨折[D].山东大学,外科学,2013,硕士.
[29]宋秀明.全国住房公积金监督管理信息系统网络安全体系设计[D].四川大学,电子与通信工程,2003,硕士.
[30]苏得权.海洛因戒断者相关线索诱发作用下的镜像神经活动[D].南京师范大学,基础心理学,2014,博士.
[31]李陶.碳青霉烯类药物联合舒巴坦或头孢哌酮对铜绿假单胞菌的药敏对比研究[D].山东大学,内科学,2013,硕士.
[32]胡明祥.石油井下射孔压力采集传输系统设计[D].中北大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[33]汪迅宝.合肥市大型百货零售业薪酬激励研究[D].安徽大学,工商管理,2012,硕士.
[34]田黎.小学高年级英语写作教学问题与对策研究[D].山东师范大学,教育(专业学位),2013,硕士.
[35]张莉,王元元,高素青.数据挖掘技术在IDS中的应用[J].军事通信技术,2003,03:33-36.
[36]崔书娟.轨道交通沿线土地利用变迁及预测研究[D].北京交通大学,2013.
[37]潘帅.流化冰制取设备数据采集系统与设备创新研究[D].浙江海洋学院,农业推广(专业学位),2014,硕士.
[38]张学凤.纳米复合材料化学修饰电极的制备及其对小分子电催化研究[D].西北师范大学,2012.
[39]郭姿含.李嗣真的“逸品”观[D].山东大学,美术学,2013,硕士.
[40]张亚辉.无线传感器网络在汽车综合性能测试系统中的应用研究[D].河南科技大学,机械电子工程,2013,硕士.
[41]王瑞霞.时滞边界反馈控制弹性梁系统的适定性和稳定性研究[D].山西大学,基础数学,2004,硕士.
[42]谢言.湿式摩擦离合器热流耦合动态仿真及带排转矩预测[D].重庆大学,机械工程(专业学位),2014,硕士.
[43]邢瀚.商业银行中型企业信用评级研究[D].东北财经大学,金融学,2012,硕士.
[44]唐振国.非象即象深藏内蕴—巴赫《哥德堡变奏曲》的和声结构动力性问题分析探究[D].江苏师范大学,音乐学,2013,硕士.
[45]马兆标.钢骨超高强混凝土短柱抗剪承载力的试验研究[D].大连理工大学,结构工程,2004,硕士.
[46]殷祥刚.基于智能预报模型的精毛纺织品全程虚拟加工技术[D].东华大学,2006.
[47]金鑫.基于朴素贝叶斯的文档级情感分析[D].大连理工大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[48]肖云辉.中级汉语水平蒙古国留学生篇章偏误分析[D].内蒙古师范大学,汉语国际教育(专业学位),2012,硕士.
[49]颜芳玉.自组织理论视野下的教师学习共同体建构研究[D].渤海大学,课程与教学论,2013,硕士.
[50]王钊.视频会议系统中对象分割的研究与实现[D].大连海事大学,信号与信息处理,2004,硕士.

相关推荐
更多