胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白的筛选与鉴定

胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白的筛选与鉴定

作者:师大云端图书馆 时间:2016-11-10 分类:硕士论文 喜欢:2430
师大云端图书馆

【摘要】奶牛胎衣不下(Retainedfetalmembranes,RFM)是一种常见危害奶牛健康的繁殖障碍性疾病,引起该病的病因复杂,影响因素较多,但其发生的关键机制,特别是疾病发生的分子基础至今尚不明确,直接影响该病的防治效果。比较蛋白质组学和生物信息学技术为全面系统的研究奶牛胎衣不下发生过程中靶器官胎盘组织差异表达蛋白质,发现致病的主要分子提供了方法学保障。本项目用以上技术对健康及胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白质进行筛选、鉴定与验证,寻找引起该病发生发展的关键蛋白质,揭示其致病作用和途径,为阐明奶牛胎衣不下发病分子机制和筛选早期临床诊断标志物提供理论依据。本实验收集胎衣不下奶牛及胎衣正常脱落奶牛胎盘组织各3份,应用双向凝胶电泳技术对胎盘组织中蛋白进行分离,银染显色获得差异表达蛋白点,并用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对其进行鉴定。同时对所得到的的差异表达蛋白进行生物信息学分析及荧光定量验证。本实验获得胎衣不下奶牛胎盘组织的双向电泳图谱,在胎儿胎盘中筛选出240个差异表达蛋白点,其中表达上调蛋白点数为212个,表达下调蛋白点数为28个;母体胎盘中差异表达蛋白点数共有214个,其中表达上调蛋白点数为134个,表达下调蛋白点数为80个。通过差异蛋白质组学及生物信息学技术鉴定出10种胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白。在胎衣不下组奶牛胎儿胎盘中,载脂蛋白A-I,膜联蛋白A8,丝氨酸蛋白酶抑制剂,谷胱甘肽转移酶,转酮醇酶表达量均提高,牛血清白蛋白,α-烯醇化酶表达量则降低。母体胎盘中鉴定的差异表达蛋白中,丝氨酸蛋白酶抑制剂,α-烯醇化酶,膜联蛋白A2表达量增加,醛糖还原酶,热休克蛋白表达量降低。生物信息学分析结果显示胎衣不下与机体的血凝反应、营养代谢、炎症反应、氧化应激有关。荧光定量验证结果显示:与胎衣正常脱落组奶牛相比,胎衣不下奶牛胎儿胎盘中,载脂蛋白A-I、丝氨酸蛋白酶抑制剂、谷胱甘肽转移酶mRNA的表达量显著提高(p<0.01),载脂蛋白A8mRNA的表达量提高(p<0.05),转酮醇酶mRNA的表达量降低(p<0.05);胎衣不下奶牛母体胎盘中丝氨酸蛋白酶抑制剂、载脂蛋白A2mRNA的表达量显著提高(p<0.01),热休克蛋白27mRNA的表达量显著降低(p<0.01)。本实验筛选并鉴定出10种在胎衣不下奶牛胎盘组织中差异表达的蛋白,通过生物信息学分析,它们参与物质代谢,炎性反应,氧化应激,血凝反应等多种路径。提示差异表达蛋白可能通过这些途径参与奶牛胎衣不下的发生发展,但仍需进一步对这些蛋白进行研究,以验证这10种蛋白与奶牛胎衣不下的联系,从而为奶牛胎衣不下的发生机制,早期诊断以及治疗提供依据。
【作者】聂甜甜;
【导师】付世新;
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学,临床兽医学,2014,硕士
【关键词】奶牛;胎衣不下;蛋白组学;荧光定量PCR;生物信息学;

【参考文献】
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