罗汉果皂甙类化合物的分离、纯化及其抗氧化活性研究

罗汉果皂甙类化合物的分离、纯化及其抗氧化活性研究

作者:师大云端图书馆 时间:2016-07-24 分类:硕士论文 喜欢:3321
师大云端图书馆

【摘要】罗汉果是我国特有的经济、药用植物。本文以罗汉果鲜果为原料,研究了罗汉果中皂甙成分的提取分离纯化工艺以及不同贮藏时间下罗汉果不同部位皂甙成分含量的变化,运用紫外光谱仪、高效液相色谱仪、液质联用仪、生物化学发光仪等仪器,对罗汉果中皂甙成分的含量测定、结构分析以及生物活性进行了初步的研究。主要研究结果如下:1、罗汉果皂甙提取、分离工艺的研究采用乙醇回流浸提法提取罗汉果中的皂甙。通过考察乙醇浓度、料液比、提取温度三个因素对罗汉果皂甙提取量的影响,结合旋转正交实验设计,最终确定提取罗汉果皂甙的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度71.16%(v/v),料液比1:34.65(g/mL),提取温度71.54℃,在该条件下,罗汉果皂甙的提取量为9.38%,其中总皂甙的得率为93.78%。考察了大孔树脂LXA-8对罗汉果乙醇提取物的分离情况,得到最佳柱分离条件为:在常温下依次用水、60%的乙醇溶液进行洗脱,收集60%的乙醇洗脱液,经浓缩冷冻干燥可得罗汉果皂甙粗提取,产品的得率为49.26%,其中罗汉果总皂甙的得率为73.21%。2、罗汉果中皂甙类化合物的分析与测定建立了罗汉果皂甙提取物的高效液相分析方法。色谱条件为:色谱柱,WatersSunfireTMC18(4.6mm×150mmI.D.5μm);柱温,25℃;流动相为0.1%(v/v)的磷酸水(A)和乙腈(B),梯度洗脱程序为:0~10min:10%-17%B;10~20min:17%B;20~30min:17%-20%B;30~40min:20%;40~50min:20%-23%B;50-60min:23%B;60~70min:23%-26%B;70~80min:26%B;流速,0.8mL/min;检测波长为203nnm。结果显示此方法可以用来同时分析罗汉果中皂甙IIA2、皂甙Ⅲ、甙Ⅳ、11-O-甙V、甙V和甙Ⅵ的含量,且线性关系、精密度和重复性好,回收率高。分析了室温下贮藏Od、7d和14d的60d日龄罗汉果鲜果种子、果皮和果肉中皂甙含量的变化,结果显示,罗汉果皂甙主要存在于果皮和果肉中,种子中含量很少,果肉中的含量大于果皮。罗汉果鲜果中皂甙IIA2含量极少,皂甙V含量最多。随着贮藏时间的延长,罗汉果中苦甙的含量逐渐减少,甜甙含量逐渐增加。贮藏7d后,罗汉果中皂甙ⅡA2逐渐消失,皂甙Ⅲ、甙Ⅳ、11-O-甙V、甙V和甙Ⅵ的含量增加。贮藏14d后,甙Ⅲ、甙Ⅳ的含量降低,11-O-皂甙V的含量几乎没有变化,甙V和甙Ⅵ的含量逐渐增加。3、罗汉果皂甙类化合物的制备和结构鉴定采用旋转正交法优化的工艺,大规模地提取罗汉果皂甙类化合物,将分离后的罗汉果粗提物粉末,通过大孔树脂LXA-8多级硅胶柱层析、凝胶柱(SephadexLH-20)层析以及HP-20SS柱层析后,所制备的5个级分经UV、HPLC和HPLC-ESI/MS/MS分析,初步推断可能为罗汉果皂甙ⅡA2、罗汉果皂甙Ⅲ、罗汉果皂甙Ⅳ、11-O-罗汉果皂甙Ⅴ、罗汉果皂甙Ⅵ,且纯度较高。4、罗汉果皂甙类化合物的抗氧化活性研究采用化学发光法研究了罗汉果甙类化合物对活性氧自由基(ROS)的清除能力,研究结果表明,在三个抗氧化体系中,罗汉果皂甙粗提物对三种自由基都表现了较高的清除能力,抗氧化效果几乎与Vc相同。其他六种罗汉果皂甙,在不同的体系清除自由基的能力不同。在超氧阴离子和过氧化氢体系中,六种罗汉果皂甙的清除能力由高到低依次为:罗汉果皂甙Ⅵ、罗汉果皂甙Ⅴ、罗汉果皂甙Ⅲ和罗汉果皂甙Ⅳ、11-O-皂甙V、罗汉果皂甙ⅡA2。在羟基自由基体系中,六种罗汉果皂甙的清除能力依次为:罗汉果皂甙ⅡA2>罗汉果皂甙Ⅵ>罗汉果皂甙Ⅴ>罗汉果皂甙Ⅲ>罗汉果皂甙Ⅳ>11-O-皂甙Ⅴ。
【作者】朱慧玲;
【导师】孙智达;
【作者基本信息】华中农业大学,食品科学,2014,硕士
【关键词】罗汉果;罗汉果皂甙;分离制备;分析鉴定;抗氧化活性;

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