醋酸甲地孕酮单药或联合NVP-BEZ235对孕激素敏感及耐药子宫内膜癌细胞PI3K/Akt信号通路的影响

【摘要】目的：研究孕激素对子宫内膜癌Ishikawa细胞和孕激素耐药Ishikawa细胞PI3K/Akt信号通路的影响,探讨孕激素治疗子宫内膜癌的机制；研究PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235对子宫内膜癌Ishikawa细胞及孕激素耐药Ishikawa细胞体外增殖能力的抑制作用,探讨NVP-BEZ235能否增强孕激素对Ishikawa细胞的抑制作用,能否改善或逆转孕激素耐药Ishikawa细胞的耐药性。方法：WesternBlot方法检测孕激素处理前后Ishikawa细胞和孕激素耐药Ishikawa细胞中Akt蛋白磷酸化水平(p-Akt/Akt)的改变；NVP-BEZ235和醋酸甲地孕酮联合应用对Ishikawa细胞及孕激素耐药Ishikawa细胞Akt蛋白磷酸化水平的影响；CCK-8、MTT法检测醋酸甲地孕酮单药或联合NVP-BEZ235对两株细胞体外增殖能力的影响；流式细胞仪检测醋酸甲地孕酮单药或联合NVP-BEZ235对两株细胞细胞周期分布及凋亡情况的影响。结果：醋酸甲地孕酮作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞可使Akt磷酸化水平下调,药物作用15min、30min、1h、2h、24h后Akt磷酸化水平分别下调25.90%、47.02%、53.89%、55.02%、85.48%(与空白对照组相比均有P<0.05)。醋酸甲地孕酮作用于孕激素耐药Ishikawa细胞可使Akt磷酸化水平上调,药物作用15min、30min、1h、2h、24h后Akt磷酸化水平分别上调67.77%、9.60%、252.85%、514.99%、604.14%(与空白对照组相比均有P<0.05)；醋酸甲地孕酮和NVP-BEZ235联合作用于Ishikawa细胞2h、6h、12h、24h、48h后可使Akt磷酸化水平分别下调83.39%、85.25%、85.94%、90.33%、87.80%(与空白对照相比均有P<0.05)。两药联合作用于孕激素耐药Ishikawa细胞使Akt磷酸化水平下调,药物作用2h、6h、12h、24h、48h后Akt磷酸化水平分别下调93.20%、88.17%、85.84%、67.02%、73.75%(与空白对照组相比均有P<0.05)。NVP-BEZ235对Ishikawa细胞和孕激素耐药Ishikawa细胞体外增殖能力均有明显抑制作用；随NVP-BEZ235浓度增加,两药联合应用对两株细胞增殖抑制作用明显强于单独使用醋酸甲地孕酮,且差异有统计学意义(P<0.05)。NVP-BEZ235序贯两种浓度(1μM、1OμM)醋酸甲地孕酮对Ishikawa细胞的抑制作用显著强于单独使用醋酸甲地孕酮(P<0.05)。NVP-BEZ235序贯1μM醋酸甲地孕酮对孕激素耐药Ishikawa细胞的抑制作用显著强于单独使用醋酸甲地孕酮(P<0.05)。NVP-BEZ235与醋酸甲地孕酮联合应用时Ishikawa细胞的S期比例下降显著低于醋酸甲地孕酮单独用药(P<0.05)。醋酸甲地孕酮和NVP-BEZ235联合作用可促进Ishikawa细胞和孕激素耐药Ishikawa细胞的凋亡。结论：醋酸甲地孕酮可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞PI3K/Akt通路的激活,但可激活孕激素耐药Ishikawa细胞的PI3K/Akt通路,说明孕激素治疗子宫内膜癌可能是通过PI3K/Akt通路实现的；PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235联合醋酸甲地孕酮可有效抑制Ishikawa细胞PI3K/Akt通路的激活；NVP-BEZ235可有效抑制耐药Ishikawa细胞由孕激素介导的PI3K/Akt通路的激活。NVP-BEZ235联合醋酸甲地孕酮能有效抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞和孕激素耐药Ishikawa细胞的体外增殖能力；说明NVP-BEZ235可能会增强孕激素治疗子宫内膜癌的作用,并逆转孕激素耐药。
【作者】刘倩；
【导师】郎景和；
【作者基本信息】北京协和医学院，妇产科，2014，博士
【关键词】子宫内膜癌；PI3K/mTOR抑制剂；PI3K/Akt通路；孕激素；

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