以CLA-1为靶标的微生物来源抗动脉粥样硬化活性化合物的分离纯化、结构鉴定及分子机制研究

【摘要】心血管疾病在发达国家和大多数发展中国家是危害人类健康的主要杀手,而动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是多种严重心血管疾病的病理基础。目前临床上广泛应用的他汀类药物可以降低20%-40%的心血管事件。要进一步降低心血管疾病的危害,在降低低密度脂蛋白胆固醇的同时必须从预防和逆转动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的新的治疗靶点出发来寻找具有新型作用机制的药物。近十几年的来研究表明,高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein,HDL)的抗AS作用主要基于HDL参与的胆固醇逆转运(reversecholesteroltransport,RCT)过程,并确定清道夫受体BI(scavengerreceptorclassBtypeI,SR-BI)为功能性的HDL受体,人的高密度脂蛋白受体亦被称作CLA-1。SR-BI/CLA-1在RCT过程中起着关键作用,被认为是发现新型心血管药物潜在的新靶标。RCT的增强将有利于AS病灶积蓄的胆固醇减少和病变的逆转,因此可以通过升高SR-BI/CLA-1表达水平来加速RCT,促进机体富余胆固醇酯的清除;能升高SR-BI/CLA-1基因表达的化合物有可能成为有效治疗动脉粥样硬化性心血管疾病新型药物的先导物。为了寻找能够提高CLA-1表达水平的活性化合物,本工作选择一株阳性菌株链霉菌04-9179(鉴定为Streptomyceshygroscopicus),对其发酵液的活性成分进行了分离纯化,利用大孔树脂HP-20柱层析、ODS柱层析和HPLC制备柱层析等色谱方法分离得到的四个纯化合物9179B、9179D、9179E和9179F,利用ESI-MS、FAB-MS、1H-NMR、13C-NMR和二维NMR等波谱解析方法对四个化合物进行了结构鉴定,确证9179B为(S,2E,4E)-7-(4-(二甲氨基)苯基)-4,6-二甲基-7-氧代庚基-2,4-烯酰胺(FL657C),9179D为(2E,4E,6S)-7-(4-(二甲氨基)苯基)-4,6-二甲基-7-氧代-N-((2R,3R,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-氧基)庚基-2,4-烯酰胺(TrichostatinD),9179E为(S,2E,4E)-7-(4-(二甲氨基)苯基)-N,4,6-三甲基-7-氧代庚基-2,4-烯酰胺(TrichostatinRK),9179F为4,7-二羟基异黄酮(大豆苷元)。9179B、9179D和9179E均能在筛选模型中以微摩尔浓度上调CLA-1基因的转录活性,其活性活性作用在HepG2细胞利用RT-PCR和WesternBlotting在CLA-1转录和翻译水平上得到了证实。此外,通过对PPARγ的转录激活活性和对CLA-1基因上游启动子区不同反应元件的影响的研究,初步确定了三个活性化合物的可能作用位点。9179B、9179D和9179E能够增加RAW264.7细胞对DiI-HDL的摄取。另外,9179B也能在微摩尔浓度下上调ABCA1基因的转录活性及上调HepG2细胞中ABCA1的蛋白水平。本研究利用CLA-1表达上调剂筛选模型跟踪活性,从链霉菌04-9179发酵液中分离纯化获得了4个具有上调人高密度脂蛋白受体CLA-1表达活性的化合物,并在分子和细胞水平确证了其中3个化合物的生物学活性,为寻找新型抗动脉粥样硬化药物或候选物奠定了基础,同时使利用小分子化合物深入研究SR-BI/CLA-1基因的转录调节机制成为可能,具有重要的理论和实践意义。
【作者】徐扬；
【导师】司书毅；洪斌；
【作者基本信息】北京协和医学院，微生物与生化药学，2010，博士
【关键词】CLA-1/SR-BI；上调剂；微生物次级代谢产物；动脉粥样硬化；

【参考文献】
[1]杨宇辰.二十世纪前期买办经济状况研究[D].吉林大学,中国近现代史,2004,硕士.
[2]宝美荣.融入形态学分析的汉蒙统计机器翻译研究[D].内蒙古师范大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[3]李文凯.开放式基金绩效的评价与实证研究[D].吉林大学,金融,2014,硕士.
[4]高莹莹.三分频式压电骨传导听觉装置的研究[D].吉林大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[5]张婷.论《白鹿原》的地域文化内涵[D].河北师范大学,中国现当代文学,2012,硕士.
[6]占建青.大众文化与后现代主义哲学思维方式[D].浙江师范大学,马克思主义理论与思想政治教育,2004,硕士.
[7]魏大和.黔滇交界地区少数民族流动人口艾滋病高危性行为及影响因素研究[D].贵州财经大学,行政管理,2013,硕士.
[8]刘建.联想公司手机产品战略选择研究[D].北京交通大学,2014.
[9]刘洪波,穆钢,严干贵,黎平,徐兴伟.根据量测轨迹计算轨迹灵敏度的卷积法[J].电力系统自动化,2007,05:13-17.
[10]刘晴.文化反哺视角下的高校思想政治教育问题研究[D].东北石油大学,思想政治教育,2013,硕士.
[11]张琼.基于Oracle的病案管理系统的研究与实现[D].天津工业大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[12]陈秋菊.2，3-烃基琥珀酸酯合成工艺研究[D].大连理工大学,有机化学,2013,硕士.
[13]金荣.中国律师刑事辩护制度与联合国刑事司法准则[D].苏州大学,法律,2003,硕士.
[14]李静.我国毒品犯罪综合治理研究[D].山东师范大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[15]谢敏.重组人角质细胞生长因子C40-C106二硫键异构体的制备、鉴定与功效相关性的研究[D].重庆理工大学,微生物与生化药学,2012,硕士.
[16]李枭.基于单目视觉的车辆检测与跟踪[D].杭州电子科技大学,计算机技术,2014,硕士.
[17]刘明艳.商业银行综合经营下关联交易合规风险管理研究[D].山东大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[18]高乐,周有庆,徐隆亚,管博.基于转子电流的双馈感应电机无速度传感器控制[J].电力系统自动化,2010,13:61-65.
[19]周军.基于声学传递向量的驾驶室噪声控制[D].合肥工业大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[20]武传龙.甲状腺功能与肥胖及代谢综合征的相关性研究[D].山东大学,内科学,2013,硕士.
[21]单晨伟.叶片类零件螺旋铣削切触点轨迹规划问题研究[D].西北工业大学,航空宇航制造工程,2004,硕士.
[22]刘吉洋,郭少军,翟月明,李丹,汪尔康.肉豆蔻酰磷脂酰甘油保护石墨烯的制备[A].中国化学会.中国化学会第27届学术年会第09分会场摘要集[C].中国化学会:,2010:1.
[23]倪博溢,萧德云.非均匀采样系统的一种递推辨识方法[J].自动化学报,2009,12:1520-1527.
[24]栾晨.高速公路不停车收费系统中车牌识别系统的研究[D].西安建筑科技大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[25]方勇杰.特约主编寄语[J].电力系统自动化,2013,21:1-2.
[26]李文丽.酪氨酸蛋白激酶抑制剂的设计、合成和筛选[D].吉林大学,药学,2014,硕士.
[27]张德楠.喀斯特地区两个重要造林树种的种子萌发和幼苗生长研究[D].广西师范大学,生态学,2013,硕士.
[28]欧阳宏雨.战术数据链网络资源动态管理技研究[D].北京交通大学,2014.
[29]付文秀,李冰,温翔.基于自适应耦合模型的运动目标跟踪方法[J].北京交通大学学报,2014,02:50-55.
[30]任思超.Ti-6Al-4V与Al合金超声波钎焊界面连接机理及工艺研究[D].哈尔滨工业大学,材料加工工程,2013,硕士.
[31]李婧楠.澳大利亚A项目风险管理研究[D].山东大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[32]李素娟.物流系统的信息支撑[J].网际商务,2002,06:76-77.
[33]李晓晴.枯草芽孢杆菌对花生镉积累的影响机制研究[D].山东师范大学,环境科学,2013,硕士.
[34]李聪.论基差交易在贸易中的运用[D].首都经济贸易大学,产业经济学,2013,硕士.
[35]陆斯.基于静态特征的高速公路停车识别与多路视频并行处理研究与实现[D].重庆大学,控制工程（专业学位）,2014,硕士.
[36]赵亚宁.音乐教育在大学生素质教育中的重要作用[J].经济研究导刊,2015,04:212-213.
[37]焦李.脱水污泥/生物质共热解特性研究[D].华中科技大学,环境工程,2013,硕士.
[38]陈明涛.著作权法立法体例修改之探讨[J].北京社会科学,2015,06:44-52.
[39]孙姗姗.安徽省泾县体育公共服务多元化供给研究[D].武汉纺织大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[40]王润.上市公司环境信息披露与企业价值相关性研究[D].北京交通大学,会计,2013,硕士.
[41]魏宏安,王蒂,连文香,邵世禄,杨小平,黄晓鹏.4UFD-1400型马铃薯联合收获机的研制[J].农业工程学报,2013,01:11-17.
[42]邓玮璍,费敏锐,杜大军,宋杨.基于信噪比受限通道的网络控制系统镇定[J].控制与决策,2012,01:58-64.
[43]武国睿.飞秒激光在石英玻璃内直写纳米光栅的三维调制[D].上海大学,光学,2013,硕士.
[44]陈惠卿.论恶意透支型信用卡诈骗犯罪的若干问题[D].华东政法大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[45]姜云飞.欧元区主权债务危机：最优货币区理论再思考与实证[D].上海社会科学院,世界经济,2014,博士.
[46]高昆.多目标炼钢-连铸计划编制问题研究[D].内蒙古工业大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[47]张晓凤.复杂产品项目中管理要素元数据的提取与管理研究[D].江苏科技大学,工业工程（专业学位）,2013,硕士.
[48]李宁.基于PNP配体铬系催化体系催化乙烯选择性四聚C_6环状副产物的形成机理研究[D].华东理工大学,化学工艺,2014,硕士.
[49]陈俊.论职务犯罪侦查规律及在渎职侵权案件侦查工作中的运用[D].华中科技大学,经济法学,2013,硕士.
[50]柴慈蕊.会计信息化标准的制定与实施研究[D].山西财经大学,会计学,2014,硕士.