电针对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞分化与BMP-2表达的实验研究

【摘要】[目的]：1.建立可靠的急性脑动脉瘤夹钳夹型大鼠脊髓损伤模型；2.探讨电针对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞的分化影响；3.探讨电针治疗脊髓损伤后局部脊髓BMP-2的表达变化；4.为电针治疗脊髓损伤提供实验依据。[方法]：将SD大鼠随机分成假手术组、脊髓损伤组、电针组,动物模型采用医用脑动脉瘤临时夹钳夹的急性钳夹型大鼠脊髓损伤模型,分别于损伤后1d、3d、7d、14d、21d、28d进行取材。1.通过BBB评分、光镜、电镜病理学检查,SEP电生理检测、MRI影像学客观完整监测,对急性钳夹型大鼠脊髓损伤模型的稳定性进行评估；2.电针后采用BBB行为学评分进行损伤后的功能评定；3.取各组受损脊髓的组织行冰冻切片、染色后行病理分析、测定损伤后局部脊髓组织的内源性神经干细胞、少突胶质细胞及其前体细胞、星形胶质细胞的表达；4.取各时间段各组损伤局部脊髓组织,提取蛋白经电泳成像与数据分析,测定损伤后局部脊髓组织内的BMP-2的表达变化。[结果]：1.经两组数据纵向比较,BBB评分结果提示,假手术组明显高于损伤组；每组数据随着术后时间的增长逐渐增高；同一组内不同时间点差异有统计学意义(P<0.05)。同一时间点不同组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。2.假手术组SEP的波形正常,术后潜伏期略延长,波幅略降低,随后恢复正常。脊髓损伤组SEP测定：术后短期(7d内)未引出波形,7d以后SEP的潜伏期长,波幅低；随着时间的增长,潜伏期缓慢下降,波幅逐渐增高。假手术组各时间段的潜伏期、波幅对比差异无统计学意义(P>0.05)；脊髓损伤组各时间段的潜伏期、波幅对比差异有统计学意义(P<0.05)。3.MRI结果：术后6h胸段脊髓创伤部位呈局限性点状T2WI高信号影；术后1d-3d,胸段脊髓肿胀,损伤处及尾端脊髓呈大片状T2高信号改变；术后7d-14d,胸段脊髓内片状T2WI高信号区范围缩小；术后21d-28d,胸段脊髓内仅有小片T2WI高信号影,脊髓远端直径较正常明显缩小。假手术组在各时间点脊髓MRI均无明显改变。4.HE染色病理结果：损伤后6h-1d脊髓灰白质出血水肿、结构紊乱、灰质板层消失,3d-7d神经元结构逐渐破坏,神经细胞肿胀,核固缩；7d-14d炎性细胞大量浸润,神经细胞水肿减轻；21d-28d可见神经细胞水肿逐渐减轻,炎性细胞开始消退,胶质细胞增生；假手术组组织结构清晰。5.电针治疗可提高BBB行为学评分,随电针治疗时间延长BBB评分逐渐升高。6.同一时间点不同组之间,内源性神经干细胞数目比较,电针组高于其他组；组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。电针组之间不同时间点对比,随着电针时间的增长,细胞数不断增长；不同时间点之间的差异有统计学意义(P<0.05)。7.同一时间点不同组之间,少突胶质细胞数目比较,电针组明显高于其他组；组之间的对比有显著差异。电针组之间不同时间点对比,随着电针时间的增长,细胞数不断增长；不同时间点之间的差异有统计学意义(P<0.05)。8.同一时间点不同组之间,OPCs数目比较,电针组明显高于其他组；组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。电针组之间不同时间点对比,随着电针时间的增长,细胞数不断增多；不同时间点之间的差异有统计学意义(P<0.05)。电针组Brdu阳性细胞与NG2阳性细胞免疫荧光共表达细胞增多(P<0.05)。9.同一时间点不同组之间,星形胶质细胞数目比较,电针组明显低于其他组；组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。电针组之间不同时间点对比,随着电针时间的增长,细胞数不断减少；不同时间点之间的差异有统计学意义(P<0.05)。电针组Brdu阳性细胞与GFAP阳性细胞共免疫荧光共表达细胞减少(P<0.05)。10.BMP-2的表达在大鼠脊髓损伤后7d-14d出现明显增强,高表达持续至28d以后,电针组BMP-2的表达低于脊髓损伤组,差异有统计学意义(P<0.05),这种差异随时间推移更加明显,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]：1.急性钳夹型大鼠脊髓损伤模型制作简单,具有稳定性、可重复性和可控性；2.电针治疗可提高大鼠脊髓损伤后BBB行为学评分,从行为学角度上提示电针治疗对大鼠脊髓损伤有明确治疗效果。电针刺激对大鼠脊髓损伤后损伤远端脊髓内源性神经干细胞增殖,分化为少突胶质前体细胞、少突胶质细胞有促进作用,而对分化为胶质细胞有抑制作用；3.电针治疗脊髓损伤,促进脊髓功能恢复与抑制BMP-2有关；4.电针刺激治疗脊髓损伤有实验依据。
【作者】李经辉；
【导师】余化霖；
【作者基本信息】昆明医科大学，外科学，2013，博士
【关键词】钳夹型脊髓损伤模型；电针；内源性神经干细胞；少突胶质细胞；骨形态发生蛋白；

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