氧化型低密度脂蛋白通过肾素（前体）受体介导人主动脉平滑肌细胞迁移及其机制的研究

【摘要】肾素（前体）受体（renin/proreninreceptor,PRR）是肾素与肾素前体的共同受体，于2002年被首次发现。当肾素（前体）受体与其配体结合后，可以增强肾素及肾素前体的酶学激活，促进血管紧张素II（AngiotensinII,AngII）的产生，从而增强肾素-血管紧张素系统的活性，发挥升高血压、致炎、致动脉粥样硬化的作用。但近年的研究发现，肾素（前体）受体可以以一种非血管紧张素II依赖的方式被激活，从而触发细胞内信号转导机制，发挥致炎、致动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的作用。高肾素（前体）可通过肾素（前体）受体，促进血管内皮细胞、足细胞炎症因子的表达及细胞增殖。血管平滑肌细胞（VascularSmoothMuscleCells,VSMCs）主要位于血管中层，在动脉粥样硬化发病过程中亦发挥重要作用。如在致动脉粥样硬化条件下，可以由血管中层迁移至内皮下层，并进一步增殖，促进粥样硬化斑块纤维帽的形成；细胞表型转化为分泌型，促进炎症因子的释放，吸引炎性细胞的浸润，促进泡沫细胞的形成；同时，发生凋亡异常，导致凋亡/增殖比例失调，促进斑块的形成。上述变化伴随着动脉粥样硬化进展的全过程。我们的前期研究发现，高糖、脂蛋白A等，均可在人血管内皮细胞影响肾素（前体）受体的表达，并进一步诱发炎症反应、氧化应激的病理现象，提示肾素（前体）受体可能参与了动脉粥样硬化的形成与发展过程。但关于致动脉粥样硬化的核心因素——氧化型低密度脂蛋白（oxidativelow-densitylipoprotein，ox-LDL）在血管各种细胞中对肾素（前体）受体表达的影响，以及其后续的效应、在动脉粥样硬化中的作用尚不明确。因此，本研究通过体外培养的人主动脉平滑肌细胞（Humanaorticsmoothmusclecells，HASMCs），观察人氧化型低密度脂蛋白（oxidizedlow-densitylipoprotein，ox-LDL）对肾素（前体）受体表达的影响，同时探索肾素（前体）受体对人主动脉平滑肌细胞的功能的影响，以进一步探索肾素（前体）受体在动脉粥样硬化发生与发展中的作用。方法体外培养人主动脉平滑肌细胞，分别以缬沙坦（10-5M）及PD123319（10-5M）阻断血管紧张素II1型及2型受体。以100mg/L的氧化型低密度脂蛋白分别作用人主动脉平滑肌细胞0、1、2、4、6、12、24小时，通过实时定量PCR及Westernblot方法检测肾素（前体）受体的表达情况，以肾素（前体）受体表达最强的时间作为下一步实验的作用时间。分别以0、25、50、100、150、200、300μg/L的氧化型低密度脂蛋白作用于人主动脉平滑肌细胞上述时间，通过实时定量PCR及Westernblot方法检测肾素（前体）受体的表达情况，以肾素（前体）受体表达最强的时间作为下一步实验的作用浓度。根据上述实验结果，应用氧化型低密度脂蛋白作用于人主动脉平滑肌细胞。使用小RNA干扰（smallRNAinterference，siRNA）下调肾素（前体）受体表达；Boyden小室迁移实验，检测人主动脉平滑肌细胞迁移率；同时通过实时定量PCR及Westernblot方法检测p38MAPK磷酸化水平。结果1.肾素（前体）受体表达于人主动脉平滑肌细胞中，且量较丰富，主要分布于细胞膜和细胞质中。2.当以100μg/L的氧化型低密度脂蛋白作用于人主动脉平滑肌细胞后，肾素（前体）受体的表达随着时间逐渐增强，6小时达峰（P<0.05），随后轻度下降，呈现一定的时间依赖性。因此，以6小时作为下一步实验的干预条件。3.当分别以0、25、50、100、150、200、300μg/L的氧化型低密度脂蛋白作用于人主动脉平滑肌细胞6小时后，肾素（前体）受体的表达逐渐增强，在50μg/L时达峰（P<0.05），随后轻度下降，呈现一定的浓度依赖性。因此，以50μg/L作为下一步实验的干预条件。4.与对照组相比，50μg/L的氧化型低密度脂蛋白作用于人主动脉平滑肌细胞6小时后，人主动脉平滑肌细胞迁移数量明显增加（P<0.05）；当使用小RNA干扰下调肾素（前体）受体表达后，人主动脉平滑肌细胞的迁移数量明显减少（P<0.05），下降至对照组水平。5.与对照组相比，50μg/L的氧化型低密度脂蛋白作用于人主动脉平滑肌细胞6小时后，p38MAPK磷酸化水平无明显变化（P>0.05）；同时，小RNA干扰对p38MAPK水平无明显影响（P>0.05）。结论1.肾素（前体）受体表达于人主动脉平滑肌细胞中。2.氧化型低密度脂蛋白在人主动脉平滑肌细胞中，可上调肾素（前体）受体的表达，并呈现一定的时间依赖性及浓度依赖性。3.氧化型低密度脂蛋白可通过肾素（前体）受体诱导人主动脉平滑肌细胞迁移增加；氧化型低密度脂蛋白是人主动脉平滑肌细胞的趋化因子。4.氧化型低密度脂蛋白在人主动脉平滑肌细胞通过肾素（前体）受体介导的细胞迁移增加可能受p38MAPK通路的调控；且该通路位于整个生物学效应链的上游水平。
【作者】程云鹏；
【导师】姜一农；
【作者基本信息】大连医科大学，内科学，2014，博士
【关键词】氧化型低密度脂蛋白；肾素（前体）受体；人主动脉平滑肌细胞；细胞迁移；p38MAPK；动脉粥样硬化；

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