过表达TIPE2基因诱导大鼠心脏移植免疫耐受

过表达TIPE2基因诱导大鼠心脏移植免疫耐受

作者:师大云端图书馆 时间:2022-06-19 分类:参考文献 喜欢:2947
师大云端图书馆

【摘要】目的:构建一株能稳定过表达TIPE2(Tumornecrosisfactor-α-inducedprotein-8like-2,TNFAIP8L2)基因的重组腺病毒。使用重组腺病毒过表达TIPE2基因预处理大鼠同种异体心脏腹腔异位移植的模型(OnO,s模型),研究过表达TIPE2基因能否影响受体自身免疫调节和移植免疫排斥反应,并探索该基因诱导受体大鼠产生免疫耐受的可能性以及其具体作用机理。方法:将TIPE2基因的CDS区装载于人工合成的重组腺病毒载体AdC68上,包装成能在体内、外稳定地过表达TIPE2蛋白的重组腺病毒。分别将供体和受体大鼠随机分成五组:A组(空白组):仅行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植术,手术成功后不作任何处理;B组(FK506处理组):行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植,手术成功后连续给免疫抑制剂FK5060.5mg/Kg.d;C组(重组腺病毒处理组):行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植,手术成功后尾静脉注入1×1011VPs重组腺病毒;D组(FK506联合重组腺病毒处理组):行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植,手术成功后连续给半量免疫抑制剂FK5060.25mg/Kg.d,同时经尾静脉注入1×1011VPs重组腺病毒;E组(非相关重组腺病毒处理组):行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔异位心脏移植,手术成功后经尾静脉注入1×1011VPs非相关重组腺病毒;检测指标:供心的存活时间及其病理变化;分别移植成功后第7天检测各组移植受体大鼠外周血单个核细胞中CD4+CD25+Treg细胞百分比;外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10等细胞因子浓度的变化;蛋白印迹法检测脾组织、下腹部引流淋巴结中TIPE2蛋白的表达率以及real-timePCR法检测下腹部引流淋巴结中FoxP3的mRNA表达情况。结果:(1)TIPE2基因CDS区成功构建至人工合成的重组腺病毒载体AdC68上,并且能在体内、外稳定过表达TIPE2蛋白。(2)平均存活时间(MST):A组:9±1.6天;B组:26.3±3.8天;C组:33.4±3.5天;D组:48±6.6天;E组:28.8±6.1天。与A组相比,B、C、D、E组受体大鼠的供心存活时间明显延长,P均<0.05,数据有统计学差异;与B组相比,C组受体大鼠供心平均存活时间明显延长,P<0.05,数据有统计学差异;与A、B、C、E组相比,D组受体大鼠供心存活时间明显延长,P均<0.05;数据有统计学意义;B与E相比,受体大鼠供心存活时间无明显延长,P>0.05,数据无统计学差异。(3)受体外周血单个核细胞中CD4+CD25+Treg细胞比例检测结果:A组:1.70±0.66%;B组:6.42±1.17%;C组:9.38±1.13%;D组:31.34±2.23;E组:1.70±0.72%;与A、B、C、E组相比,D组CD4+CD25+Treg细胞比例显著增高,P<0.05,结果有统计学意义;与B组相比,C组CD4+CD25+Treg细胞比例显著增高,P<0.05;数据有统计学差异,与A组相比,B、C、D组CD4+CD25+Treg细胞比例均明显增高,P<0.05,结果均有统计学差异;(4)外周血IL-2(pg/ml):A组:2007.32±464.67;B组:1142.64±83.09;C组:735.59±194.55;D组:515.38±50.60;E组:915.76±180.60。A、B、E组相比,D组受体大鼠外周血中IL-2表达量明显降低,P<0.05,数据有统计学意义;C组受体大鼠外周血中IL-2表达量较B组明显降低,P<0.05,数据有统计学差异;B、C、D、E组受体大鼠外周血中IL-2表达量较A组明显降低,P<0.05,数据有统计学意义;B与C相比,受体大鼠外周血中IL-2表达量有明显差异,P<0.05,数据有统计学意义;D与C相比,IL-2表达量无明显差异,P>0.05,数据无统计学差异。(5)外周IL-4(pg/ml):A组:27.26±21.29;B组:136.53±55.54;C组:213.25±89.48;D组:444.37±36.73;E组:166.84±58.16。D组受体大鼠外周血中IL-4表达量较A、B、E组明显升高,P<0.05,数据有统计学意义;D组受体大鼠外周血中IL-4表达量较B组明显升高,P<0.05,数据有统计学差异;与A组相比,B、C、D、E组受体大鼠外周血中IL-4表达量明显升高,P<0.05,数据有统计学意义;B组受体大鼠外周血中IL-4表达量与C、E组无明显差别,P>0.05,数据无统计学差异;(6)外周血IL-10(pg/ml):A组:13.92±4.17;B组:14.75±9.17;C组:32.70±10.01;D组:78.18±13.31;E组:33.95±14.50;D组受体大鼠外周血中IL-10表达量较A、B、C、E组明显升高,P<0.05,数据有统计学意义;与B组相比,C组受体大鼠外周血中IL-10表达量明显升高,P<0.05,数据有统计学差异;C、D、E组受体大鼠外周血中IL-10表达量较A组明显升高,P<0.05,数据有统计学意义;C与E、A与B相比,受体大鼠外周血中IL-10表达量无明显差异,P均>0.05,数据无统计学差异。(7)外周血TNF-α(pg/ml):A组:1665.43±209.06;B组:821.97±271.40;C组:369.33±122.58;D组:214.80±35.84;E组:1148.99±140.63。D组受体大鼠外周血中TNF-α表达量较A、B、E三组明显降低,P<0.05,数据有统计学意义;C组受体大鼠外周血中TNF-α表达量较B组明显降低,P<0.05,数据有统计学差异;B、C、D、E组受体大鼠外周血中TNF-α表达量较A组明显降低,P<0.05,数据有统计学意义;D与C相比,受体大鼠外周血中TNF-α表达量无明显差异,P>0.05,数据无统计学意义。(8)外周血IFN-γ(pg/ml):A组:6769.31±1659.95;B组:6290.93±1124.97;C组:3739.59±493.21;D组:2840.97±444.67;E组:5367.94±183.96。D组受体大鼠外周血中IFN-γ表达量较A、B、E三组明显降低,P<0.05,数据有统计学意义;C组受体大鼠外周血中IFN-γ表达量较B组明显降低,P<0.05,数据有统计学差异;B、C、D、E组受体大鼠外周血中IFN-γ表达量较A组明显降低,P<0.05,数据有统计学意义;D与C相比,受体大鼠外周血中IFN-γ表达量无明显差异,P>0.05,数据无统计学意义。(9)下腹部引流淋巴结中FoxP3的mRNA表达情况:D组FoxP3的mRNA表达量较A、B、C、E明显升高,P<0.05,有统计学意义;A、B、C、E组间相互比较,FoxP3的mRNA表达量无明显差异,P>0.05,无统计学差异。(10)受体脾脏组织及下腹部引流淋巴结中TIPE2蛋白表达情况:C组与D组TIPE2蛋白表达较A、B、E组明显升高。C组与D组之间TIPE2蛋白表达量无明显差异。结论:(1)TIPE2基因能够成功构建于人工合成的重组腺病毒载体AdC68上;应用该腺病毒载体,能在体内、外稳定过表达TIPE2基因。(2)应用重组腺病毒载体在心脏移植受体大鼠体内过表达TIPE2基因,能下调TNF-α、IFN-γ、IL-2表达水平,上调IL-4、IL-10的表达水平,减轻急性排斥反应,延长供心在受体内的存活时间。(3)过表达TIPE2基因的受体大鼠,增加CD4+CD25+Treg细胞比例,减轻移植排斥反应。(4)我们可以从大鼠同种异体异位腹腔心脏移植模型中观察到,重组腺病毒诱导大鼠心脏移植免疫耐受的效果优于FK506,其能更加有效的减轻排斥反应的严重程度,延长心脏移植供心的存活时间。(5)重组腺病毒和FK506联合处理大鼠心脏移植模型,与单用重组腺病毒载体处理大鼠心脏移植模型,都可使心脏移植物的存活时间明显延长,明显减轻急性血管性排斥反应的严重程度,然而其仍然不能完全克服心脏移植急性排斥反应的发生。
【作者】张有斌;
【导师】余云生;
【作者基本信息】苏州大学,胸心血管外科,2014,硕士
【关键词】重组腺病毒;TIPE2基因;同种异体心脏移植;免疫耐受;

【参考文献】
[1]董新怀.审前程序改革与完善[D].安徽大学,诉讼法学,2003,硕士.
[2]廖涛,艾兴政,唐小我.基于成本差异与产品替代的链与链竞争纵向结构[J].控制与决策,2009,07:1110-1113.
[3]王雪燕.青岛市崂山区农村妇女宫颈癌普查及Id1蛋白检测分析[D].青岛大学,病理学与病理生理学,2012,硕士.
[4]徐英凯.蜂窝网无线定位方法研究[D].兰州理工大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[5]白海锋.渭河流域浮游动物群落结构时空格局的研究[D].大连海洋大学,水生生物学,2014,硕士.
[6]郭靖.生态马克思主义的历史考察及理论认识[D].东北师范大学,马克思主义发展史,2012,硕士.
[7]毕海珊.H19通过干扰hnRNPU-actin复合物抑制RNA聚合酶介导的转录[D].第二军医大学,遗传学,2013,硕士.
[8]姜云国.基于EOC的嵌入式SNMP网管代理系统的设计与实现[D].长安大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[9]申洋.河北省女子手枪运动员持枪状态肌电特征分析研究[D].河北师范大学,运动人体科学,2014,硕士.
[10]吴阳.于永正小学语文课堂教学艺术研究[D].苏州大学,教育(专业学位),2014,硕士.
[11]郭建伟.《四库全书总目》史部本体库的设计与构建[D].河北大学,情报学,2014,硕士.
[12]刘立.配电网经济性和可靠性的综合评估[D].浙江大学,2007.
[13]于海波,高倩.建设双向全业务无源光网络打造数字电视新生活[J].广播与电视技术.2007(02)
[14]刘铄军.《信仰不朽与死亡崇拜》(第一讲)翻译报告[D].中南民族大学,翻译(专业学位),2013,硕士.
[15]于鹏飞.课堂教学仪式的社会学分析[D].曲阜师范大学,教育学原理,2004,硕士.
[16]陈维强,高文.MPEG-2视频编码的运动估计与实现[J].自动化学报,1998,05:116-120.
[17]詹雪莹.低维ZnO纳米材料的合成及其器件研究[D].华中科技大学,光电信息工程,2013,硕士.
[18]程润芬.Wnt5a信号通路在结肠癌血管生成拟态及EMT中的作用[D].天津医科大学,肿瘤学,2014,博士.
[19]吕斌,付跃进,吴盛富,杨帆.室内型胶合板天然耐久性的初步研究[J].林产工业.2004(04)
[20]沈德福.江苏省1:20万土壤数据库的建立及其应用研究[D].安徽师范大学,自然地理学,2004,硕士.
[21]刘世才.盐藻淀粉磷酸化酶基因DsSP的克隆和原核表达[D].大连海洋大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[22]郭辉.儿童孤独症的全基因组关联研究[D].中南大学,遗传学,2013,博士.
[23]王嵩.对外汉语初级阶段副词习得考察与教学设计[D].厦门大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[24]王笑见.抗倒伏和抗稻瘟病或抗褐飞虱水稻恢复系的创建[D].华中农业大学,作物遗传育种,2014,硕士.
[25]关学丰.铝牙膏管毛坯的生产工艺[J].轻合金加工技术.1990(12)
[26]江彪.层状沉积地基对移动荷载的动力响应分析[D].天津大学,结构工程,2004,硕士.
[27]王娟.成吉思汗八白宫圣物西迁研究[D].内蒙古大学,专门史,2014,硕士.
[28]袁舒雯.中小学教师教学生活体验研究[D].宁波大学,课程与教学论,2014,硕士.
[29]孙华贞.厦门高星级酒店空间集聚特征及机理研究[D].华侨大学,旅游管理,2013,硕士.
[30]沈洁.中国人日语学习者复合动词使用现状及其处理过程—从中译日的角度来考察[D].宁波大学,日语语言文学,2013,硕士.
[31]周港.时序电路单粒子加固方法和技术研究[D].西安电子科技大学,软件工程,2012,硕士.
[32]李宇峰.基于现场监测的高速铁路陡坡地基桩板墙填方路基变形特性分析[D].西南交通大学,建筑与土木工程,2014,硕士.
[33]李建江.掺杂及碳包覆型二氧化钛纳米材料光催化及锂电性能研究[D].青岛大学,材料学,2014,博士.
[34]范春沧.现代汉语“吃”与越南语“ǎn”对比研究[D].广西民族大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[35]钟锦源,张岩,文福拴,朱海兵,李虎成,樊海锋.基于时间序列相似性匹配的输电系统故障诊断方法[J].电力系统自动化,2015,06:60-67.
[36]毛建忠,吴智铭.基于准时生产制的Job—Shop成组调度方法[J].控制与决策,1995,05:411-416.
[37]毛科技.政府网站日志挖掘的研究与实践[D].浙江工业大学,2005.
[38]缪钱江.二氧化硅负载Karstedt催化剂催化硅氢化反应的研究[D].浙江大学,材料学,2004,硕士.
[39]曾科.税款核定法律问题研究[D].四川大学,法律,2003,硕士.
[40]容以珍.德莱赛《珍妮姑娘》中的二元对立[D].广西师范大学,英语语言文学,2013,硕士.
[41]初莹莹.模糊时间序列的多尺度算法[D].大连海事大学,应用数学,2013,硕士.
[42]范晓梅.民意对刑事司法的影响研究[D].山东大学,诉讼法学,2013,硕士.
[43]DennisOverbye,徐嘉文.诺贝尔物理学奖表彰超薄碳研究成果[J].英语文摘,2010,12:39-42.
[44]伍夏.“西湖”文化的历史发展及美学解读[D].重庆大学,景观建筑学,2014,硕士.
[45]张然.新能源风电企业价值评估收益法应用研究[D].首都经济贸易大学,资产评估(专业学位),2014,硕士.
[46]管露.花生过敏原的DNA生物传感检测方法的建立[D].江南大学,2013.
[47]孟茁.合成孔径雷达通信控制接口板的设计[D].西安电子科技大学,信号与信息处理,2010,硕士.
[48]袁桦,史永哲,赵军红,刘加.基于JSM和MLP改进发音错误检测的方法[J].自动化学报,2014,12:2815-2823.
[49]王宜贤.我国花样跳绳“双人车轮跳”成套动作编排的现状及对策研究[D].沈阳体育学院,体育教育学,2014,硕士.
[50]胡淼.船舶电力推进永磁同步电机控制系统的研究[D].大连海事大学,轮机工程,2013,硕士.

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