人参皂苷Rg1对人牙周膜干细胞体外增殖及成骨分化的影响

【摘要】目的：本实验旨在研究人参皂苷Rgl对人牙周膜干细胞增殖与成骨分化的影响。在体外成功原代培养人牙周膜干细胞(humanperiodontalligamentstemcells,hPDLSCs)的基础上,将含不同浓度人参皂苷Rg1(ginsenosideRg1)的矿化诱导培养液与其作用,检测细胞增殖、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性、矿化结节染色和成骨相关基因(Runx2,CollagenI,OPN,OCN)的表达情况,揭示其作用机制,以深入认识人参皂苷Rgl对人牙周膜干细胞的药理作用,并为人参皂苷Rg1用于牙周组织修复再生、治疗牙周疾病提供实验依据。方法：1.克隆形成实验检测其克隆形成率；2.通过检测相关免疫分子的表达情况鉴定人牙周膜干细胞表型；3.人牙周膜干细胞的多项诱导分化,包括成骨诱导分化和成脂诱导分化；4.在矿化诱导条件下将浓度为10-8,10-7,10-,104,10-4mol/L的人参皂苷Rg1与牙周膜干细胞作用1天,2天,3天,4天,5天,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)评价人参皂苷Rg1对人牙周膜干细胞增殖的影响；5.在矿化诱导条件下将浓度为10-8,10-,10-6,10-5mol/L的人参皂苷Rg1与牙周膜干细胞作用3天,5天,7天,检测其碱性磷酸酶活性；6.在成骨诱导条件下将浓度为10″8,10-,10-6,10-5mol/L的人参皂苷Rg1与牙周膜干细胞作用14天,茜素红S染色,观察矿化结节形成情况；7.实时荧光定量RT-PCR检测Runx2,CollagenI,OPN,OCN成骨基因表达。结果：1.牙周膜干细胞形态呈长梭形,具有较强的克隆形成能力。2.阳性表达间充质干细胞标志物Stro-1和CD146。3.成骨分化表明,培养14天后茜素红染色可见到显著的矿化结界;成脂诱导液培养14天后有脂滴形成,培养21天后细胞显示大量集群的脂质。4.第2到5天,浓度为10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L,10-5mol/L的人参皂苷Rgl的OD值均增高,且高于对照组(p<0.05),这说明Rgl有剂量依赖性；但浓度10-4mol/L的人参皂昔Rg1无细胞的增殖,并抑制细胞生长,说明此浓度对细胞生长有毒,因此,在接下的实验中,该组被取掉。5.牙周膜干细胞在10-8,10-7,10-6,10-5mol/L人参皂苷Rg1作用下分别培养3,5,7天,从3到7天,碱性磷酸酶活性(ALP)增加,且高于空白组(P<0.05)。碱性磷酸酶活性(ALP)随Rg1浓度增加而增加,并存在剂量依赖；另一方面在不同的时间点10-5mol/L人参皂苷Rg1表达的活性最高。6.人牙周膜干细胞通过成骨的分化培养基培养了14天后,采用染色茜素红S染色观察钙化结界,10-8-10-5mol/L有显著的钙结节形成。7.人牙周膜干细胞在加入浓度为10-8,10-7,10-6,10-5mol/L的人参皂苷Rg1培养14天后,实验组Runx2,CollagenI,OPN,OCN的表达显明高于对照组(p<0.05)。结论：1.体外分离了牙周膜干细胞,为下一步的研究奠定了良好基础；2.获得的人牙周膜干细胞具有较强的克隆形成能力,Stro-1及CD146高表达,说明其是间充质来源,成骨、成腊诱导实验证明细胞具有多向分化潜力；3.体外培养条件下,检测10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L,10-5mol/L组的人参皂苷Rg1均能促进人牙周膜干细胞的增值,且10-5mol/L组人参皂苷Rg1促进增殖最为显著,同时检测发现10-4mol/L组Rg1抑制人牙周膜干细胞的生长；4.浓度为10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L,10″5mol/L组的人参皂苷Rgl联合成骨诱导液对培养的人牙周膜干细胞均有诱导其成骨分化的作用,且10-5mol/L组作用最显著,对成骨基因Runx2,CollagenI,OPN,OCN的表达均有上调作用。
【作者】刘琪；
【导师】余占海；
【作者基本信息】兰州大学，口腔修复学，2014，硕士
【关键词】人参皂苷Rg1；人牙周膜干细胞；增殖；成骨分化；

【参考文献】
[1]张晓波.中国内地和日本青春纯爱电影比较研究[D].苏州大学,新闻与传播学（专业学位）,2013,硕士.
[2]马在田.三维地震波动方程偏移法[J].石油地球物理勘探,1978,01:17-26.
[3]王宗宗.基于可扩展商业报告语言的会计信息系统研究[D].湖南大学,软件工程,2011,硕士.
[4]袁海英,陈光,谢永乐,杜天军.基于非线性电路频域核估计和神经网络的故障诊断[J].控制与决策,2007,04:473-476.
[5]胡雄.地铁车辆车体吹扫除尘系统[D].重庆大学,机械工程（专业学位）,2014,硕士.
[6]秦全德,李荣钧.基于生物寄生行为的双种群粒子群算法[J].控制与决策,2011,04:548-552+557.
[7]何维明.水分因素对沙地柏实生苗水分和生长特征的影响[J].植物生态学报,2001,01:11-16.
[8]郭瑞.5-羟色胺对蟋蟀视觉学习记忆的影响研究[D].沈阳师范大学,神经生物学,2014,硕士.
[9]陈茗.庐城镇社区网格化管理研究[D].安徽大学,行政管理,2013,硕士.
[10]王春来.和谐社会建设下的农民工体面劳动问题[D].东北师范大学,中共党史,2012,硕士.
[11]舒明明.复发性流产绒毛组织中细胞凋亡信号通路的研究[D].河北医科大学,人体解剖与组织胚胎学,2014,硕士.
[12]董兆斌.一种估计信噪比的方法[J].石油地球物理勘探,1981,02:70-75.
[13]韩晓伟.内蒙古承接发达地区产业转移能力研究[D].内蒙古师范大学,区域经济学,2013,硕士.
[14]毛长城.Fe-基非晶软磁性能的研究[D].郑州大学,材料加工工程,2013,硕士.
[15]谢锴.当代建筑砌体及其构造案例研究[D].西安建筑科技大学,建筑学,2013,硕士.
[16]耿若楠.金庸武侠剧的审美特征分析[D].河北大学,艺术学,2014,硕士.
[17]张红.民营企业组织文化与组织绩效关系的实证研究[D].哈尔滨工业大学,企业管理,2014,硕士.
[18]任浩.广东电信3G发展战略研究[D].华中科技大学,2004.
[19]卢悦.从C-R-A模式角度分析言语幽默[D].中南民族大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[20]李明富.“黑色遭遇”不再来[J].金融电子化,2004,07:34-37.
[21]王丹.公共治理视角下我国社会救助制度研究[D].内蒙古大学,公共管理,2014,硕士.
[22]陈倩倩.两套英语专业听力教材的分析与评估[D].浙江大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[23]但晨.小尺寸试样材料断裂性能测试方法与应用[D].西南交通大学,固体力学,2014,硕士.
[24]陈大毅.我国新型城镇化趋势下的保障房建设研究[D].太原科技大学,产业经济学,2014,硕士.
[25]周长信.地方政府融资平台债务风险分析[J].企业改革与管理,2014,20:100-102.
[26]齐秀波.英语交互式语言教学研究[D].吉林大学,外国语言学及应用语言学,2004,硕士.
[27]马健.中职古诗文教学中的人格教育研究[D].鲁东大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[28]王少辉.中国贸易便利化与通关管理问题研究[D].首都经济贸易大学,国际贸易学,2014,硕士.
[29]刘熠.上市公司内部治理与财务舞弊研究[D].西南交通大学,会计学,2014,硕士.
[30]金柏娇.中学物理教学中学生自然观的培养研究[D].东北师范大学,课程与教学论,2012,硕士.
[31]张阅欣.稻草组分的分离及高附加值产品的工艺研究[D].吉林大学,物理化学,2014,硕士.
[32]秦悦.BTM测试管理系统与测试关键技术的研究[D].北京交通大学,控制工程（专业学位）,2013,硕士.
[33]韩毅,蔡建湖,李延来,叶许红,林华珍,王炜.基于折扣产品供应商选择问题的随机蛙跳算法[J].上海交通大学学报,2012,04:567-572.
[34]洪豪.复合Web服务匹配方法的研究[D].重庆大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[35]陈帅.电磁式桥梁振动能获取的研究[D].燕山大学,电路与系统,2014,硕士.
[36]郑国良.永磁同步电动机的全范围无传感器控制研究[D].郑州大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[37]杨鹏生,吴晓军,张玉梅.改进扩展卡尔曼滤波算法的目标跟踪算法[J].计算机工程与应用.
[38]陈静.生产性服务业市场导向执行模式与绩效相关性研究[D].沈阳工业大学,工商管理,2012,硕士.
[39]梁戈玉.汉族人群肺癌易感基因及其快速检测技术的研究[D].东南大学,2005.
[40]本报记者杜铭.LED照明：照亮世界的“绿光”[N].经济日报,2014-09-15015.
[41]王晨.影响乳腺癌预后相关因素的多元分析[D].山西医科大学,病理学,2002,硕士.
[42]朱敬华.数字图书馆中查询结果处理和参考文献超链接方法的研究[D].黑龙江大学,2002.
[43]李浸之.周口移动传输网规划[D].北京邮电大学,电子与通信工程（专业学位）,2011,硕士.
[44]何辉.昆明“湖畔之梦”商品住宅项目开发策划阶段规划设计研究[D].清华大学,2004.
[45]迟吉娜.陆地棉体细胞胚胎发生和植株再生体系优化[D].河北农业大学,作物遗传育种,2004,硕士.
[46]欧阳纯方.二维蜂窝光子晶体边缘态的色散及效应研究[D].复旦大学,2011.
[47]彭莉.印度卡塔克舞蹈音乐初探[D].中央音乐学院,世界民族音乐,2012,硕士.
[48]封卫强.以价值创造为导向的现代产业价值链重构[J].商业经济研究,2015,08:127-128.
[49]苏洵.国际中小学技术教育的学科转型研究[D].首都师范大学,比较教育学,2013,硕士.
[50]SilviaYang.印尼华族同化进程的分析：从新秩序时代到改革时代[D].厦门大学,国际关系,2014,硕士.