柚皮素缓解小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的损伤作用及其机制的研究

【摘要】金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S.aureus，简称金葡菌）是一种共生的条件性致病菌，可以引起广泛的人类和动物的疾病，从特应性皮炎到软组织感染，甚至更为严重的侵袭性的疾病，如菌血症、肺炎和骨髓炎等，并且这些侵袭性疾病均具有较高的发病率和死亡率。1961年，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA）在英国首次被报道，MRSA成为第一个医院获得性病原体，此时仅为甲氧西林从推出到临床应用的一年以后。1990年代后期，一种新型的MRSA，社区相关性MRSA（CA-MRSA），首次在医疗机构以外被分离并广泛传播开来，其致病毒力因子高表达的特性使得不接触医疗设施的健康人群也可感染此病原菌，MRSA的抗感染治疗形势日益严峻。在众多严重的金葡菌侵袭性疾病中，金葡菌肺炎位居第二。超过50％的金葡菌肺炎是由MRSA感染引起的，即使在当今医疗条件发达的时代，过半的该病患者预后不良。近年来，由于人类和动物抗生素的过度使用和滥用，细菌耐药性的进化和发展进程加快，导致抗生素耐药性的日益严重。然而，人类对抗生素的研发进展十分缓慢，近三十年来仅有少数几种抗生素研发成功并投入到临床应用中。因此，在对抗金葡菌感染过程中，人们迫切需要寻找新型的抗菌药物。金葡菌的致病力主要取决于其分泌的多种外毒素，它们可以帮助金葡菌侵袭宿主、在宿主体内定殖或者辅助细菌营养物质的摄入。这些外毒素包括溶血素家族、超抗原家族和剥落毒素家族。α-溶血素是溶血素家族的成员之一，是分子量为的33.2kD的水溶性单体蛋白质，也是影响金葡菌致病性的主要外毒素之一。α-溶血素单体可在易感细胞的细胞膜上自组装成七聚体，形成一个稳定跨膜孔，导致易感细胞重要分子的迅速泄漏，从而引起细胞裂解和死亡。研究表明，α-溶血素是在金葡菌感染，特别是在葡萄球菌性肺炎的发病机理中必不可少的。在小鼠金葡菌肺炎模型中，α-溶血素突变株不能诱导中性粒细胞介导的炎症性肺损伤。金黄色葡萄球菌肠毒素（SEs）是导致人金葡菌胃肠炎和食物中毒的主要毒力因子。中毒性休克综合征毒素1（TSST-1）可引起严重的中毒性休克综合征（TSS）。SEs和TSST-1同属于超抗原家族，他们可以直接链接抗原递呈细胞表面的MHCII类分子和T细胞TCR的Vβ链，刺激T细胞活化，并促使T细胞释放细胞因子。这些外毒素的表达均受附属基因调控系统agr的正调控影响。本研究中，通过最小抑菌浓度的测定和生长曲线的监控可以确定柚皮素对金葡菌基本无抑菌作用。溶血活性测定、免疫印迹分析和荧光定量PCR等试验结果表明，柚皮素通过抑制α-溶血素编码基因hla的转录水平降低α-溶血素的表达量，从而抑制其溶血活性。随后，采用体外柚皮素对金葡菌α-溶血素介导的人肺泡上皮细胞A549损伤的保护性实验和体内建立小鼠金葡菌肺炎模型实验，进一步研究柚皮素对小鼠金葡菌肺炎损伤的保护作用。结果表明，柚皮素可以有效保护α-溶血素介导的肺泡上皮细胞损伤作用，并且降低小鼠金葡菌肺炎的死亡率、减轻肺脏损伤和炎症反应症状。此外，T细胞细胞因子释放量检测、T细胞增殖试验、免疫印迹分析和荧光定量PCR试验结果表明，柚皮素不仅能抑制α-溶血素的表达，还可以抑制其他外毒素的表达，包括肠毒素A（SEA）、肠毒素B（SEB）和TSST-1。而这种外毒素表达的抑制作用是通过柚皮素抑制其编码基因和相关调控系统agr中agrA的转录来完成的。这进一步阐释了柚皮素治疗小鼠金葡菌肺炎损伤作用的作用机制。这些结果提示柚皮素在应用于金葡菌感染中具有较好的研发潜力。
【作者】张雨；
【导师】邓旭明；
【作者基本信息】吉林大学，基础兽医学，2014，硕士
【关键词】金黄色葡萄球菌；α-溶血素；肺炎；外毒素；柚皮素；

【参考文献】
[1]于俊钊.孪生支持向量机及其优化方法研究[D].中国矿业大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[2]王国明.凯宝药业中高层绩效考核制度设计及实施研究[D].华东理工大学,高级工商管理（EMBA）（专业学位）,2014,硕士.
[3]屈博.基于WAMS的电力系统低频振荡在线辨识与抑制[D].北京交通大学,2014.
[4]董春林,赵双叶.“香药之路”的文化路径——宋代与东南亚交流路线再探讨[J].成都师范学院学报,2015,02:20-24.
[5]王治家.基于Linux的嵌入式网络控制系统设计与实现[D].厦门大学,软件工程,2014,硕士.
[6]孙玉敏.谁来掘金石墨烯?[J].上海国资,2011,09:20-21.
[7]李云飞.燃煤烟气细颗粒物湍流团聚的研究[D].哈尔滨工业大学,动力工程及工程热物理,2014,硕士.
[8]林芳.天津碱厂档案管理系统的设计与实现[D].天津大学,计算机技术,2013,硕士.
[9]王宏超.论网络环境下商业秘密的法律保护[D].河北经贸大学,法律,2014,硕士.
[10]叶璐.H银行国际业务客户维护体系研究[D].西北大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[11]孙琳琳.《蓝花王国》翻译报告[D].山东财经大学,英语笔译（专业学位）,2014,硕士.
[12]宋雪萍.浙江省理工科院校公共艺术教育现状调查研究[J].浙江科技学院学报,2012,02:168-173.
[13]任冬妮.瓦格纳歌剧序曲中的音高组织关系[D].沈阳音乐学院,音乐学,2013,硕士.
[14]许月丽.我国茶业国际竞争力研究[D].浙江大学,2003.
[15]耿雪.COP中教师线上活动的交互质量分析与改进[D].首都师范大学,教育技术学,2014,硕士.
[16]李果.我国司法鉴定人助理制度构建研究[D].安徽大学,法律,2012,硕士.
[17]田稷.挖掘高校图书馆Web日志数据库的意义和方法[J].情报理论与实践,2002,04:307-308.
[18]苏明如.锂离子电池硅/碳复合负极材料的制备及性能研究[D].中南大学,冶金工程,2014,博士.
[19]焦湘恒,王成礼,卢春喜,李秉富.斜井VSP波场特征及其分离方法[J].石油地球物理勘探,1994,S1:1-9+173.
[20]崔铭香.我国成人高教“普教化”问题的反思与改革[D].曲阜师范大学,成人教育学,2004,硕士.
[21]唐宗美.CAN总线实时性研究[D].湖北工业大学,机械电子工程,2013,硕士.
[22]李皓.大学生微博使用与满足研究[D].上海外国语大学,新闻学,2012,硕士.
[23]师艳宁.苯并咪唑衍生物金属配合物的合成及其催化合成碳酸二甲酯研究[D].西北大学,有机化学,2013,硕士.
[24]李建军.开放式SCARA型机器人控制器的研究[D].天津大学,机械设计及理论,2004,硕士.
[25]李泽.温州市农村社区建设研究[D].浙江海洋学院,农村与区域发展（专业学位）,2014,硕士.
[26]万青.离婚损害赔偿制度研究[D].兰州大学,民法,2012,硕士.
[27]杨丽华.我国银行个人业务营销策略的探讨[D].中南林学院,林业经济管理,2004,硕士.
[28]徐东海.水电机组状态监测及故障诊断研究[D].清华大学,动力工程及工程热物理,2003,硕士.
[29]曹嘉俊.论劳务派遣的司法规制[D].华东政法大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[30]丁红娟.松江区社区卫生服务模式研究[D].上海工程技术大学,社会保障,2010,硕士.
[31]王璨.胡锦涛执政伦理思想研究[D].华中师范大学,马克思主义中国化研究,2013,硕士.
[32]张晓栋.基于大数据分析方法的铁路重车车流推算系统研究[D].北京交通大学,2014.
[33]王洪浩.高陡度共形光学头罩子孔径拼接干涉测试方法研究[D].哈尔滨工业大学,光学工程,2014,硕士.
[34]韩艳.滇西北地区天才湖沉积记录揭示的12cal.ka B.P.以来的环境变迁[D].南京师范大学,自然地理学,2012,硕士.
[35]刘士龙.不同目标结构对大学生网球运动员习得性无助感的影响[D].吉林大学,体育人文社会学,2014,硕士.
[36]孙冉.非手术治疗食管癌临床分期研究[D].河北医科大学,肿瘤学,2013,硕士.
[37]苑东林.国际工程项目风险防范机制的研究[D].北京交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[38]李志磊.超长框架结构温度应力的三维有限元分析与研究[D].浙江大学,结构工程,2004,硕士.
[39]司冠华.我国金融结构与经济增长关系实证研究[D].山东财经大学,统计学,2013,硕士.
[40]何智文.小檗胺诱导白血病细胞株NB4细胞凋亡及其机制的研究[D].浙江大学,2004.
[41]刘函.不同职级交际中的称谓语[D].四川外国语大学,英语语言文学,2013,硕士.
[42]黄彬文.大庆发展替代产业的设想[J].大庆社会科学.1988(02)
[43]江玲.作为反叛的叙述者[D].西南大学,英语语言文学,2014,硕士.
[44]解红永.计及风功率扰动的电力系统强迫功率振荡研究[D].东北电力大学,电气工程,2013,硕士.
[45]肖海波.新型煮茧助剂的研制及其应用研究[D].广西科技大学,生物化工,2013,硕士.
[46]付玉红.小功率宽调速范围开关磁阻电机驱动系统研究与设计[D].华中科技大学,电气工程,2013,硕士.
[47]王旭.面向展览建筑的旧工业建筑适应性改造研究[D].浙江大学,建筑设计及其理论,2013,硕士.
[48]高秀丽.融合深度信息的视觉注意模型研究及其应用[D].杭州电子科技大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[49]孙北辰.油画创作中符号化的探索与研究[D].沈阳师范大学,美术,2013,硕士.
[50]孙向伟.基于空间计量经济视角的中国区域经济增长特征与地区比较[D].南昌大学,数量经济学,2012,硕士.