一起鸡痘病毒继发葡萄球菌感染病例的诊断

【摘要】鸡痘是由鸡痘病毒（fowlpoxvirus，FPV）感染引发的一种急性、接触传染性疾病，皮肤型、黏膜型和混合型是临床上常见的鸡痘的3种类型。鸡痘病毒被我国农业部列为三类动物病原微生物。通常情况下，感染FPV的鸡群呈皮肤型经过时，其死亡率并不是很高（约1%），但也有单纯皮肤型鸡痘呈现出100%死亡率的报道。因此，鸡痘的死亡率与鸡痘病毒株自身的特性有密切关系。鸡葡萄球菌病(StaphylococcalinChickens)是由葡萄球菌所引起的一种鸡的传染病。临床主要表现为雏鸡脐炎；中雏皮肤坏死和急性败血症；成年鸡骨膜炎和关节炎等几种类型。动物对葡萄球菌的易感性与多种因素有关，且极易与其他禽类疾病混合感染，如鸡痘、禽大肠杆菌病、马立克氏病等。2013年11月，内蒙古通辽市某大型肉种鸡场饲养的10万只肉种鸡，52日龄开始陆续发病，送检时已死亡5000多只，发病率约10%，死亡率为5%左右。其主要临床症状为病死鸡极度消瘦，多处可见大面积的痘疹、痘痂。此外，部分病死鸡胸腹部、大腿内外侧和翅下等处，潴留有大量的暗红色或紫红色血样液体；病情较轻者则局部皮肤糜烂，羽毛脱落。病理剖检可见肝脏、脾脏不同程度的肿大；肠黏膜呈点状或弥漫性充血，肠壁菲薄，弹性减退；其他脏器无明显病理变化；呼吸道和消化道黏膜亦未见纤维素性假膜。对病死鸡的多个组织器官进行组织采样后甲醛固定，制作的石蜡切片经HE染色后观察组织学病变特点。结果显示，该病例最明显的病变发生于皮肤和大脑，皮肤血管充血并伴有淋巴细胞、异嗜性粒细胞浸润；部分病变的皮肤切片可见大量的新生成纤维细胞和毛细血管，并有炎性细胞浸润。脑组织血管周围有炎性细胞浸润。其他组织器官也可见不同程度的病理变化，但均为一般性病变。为了进一步明确该病例的死亡原因，本研究对死亡鸡只进行了系统的实验室诊断分析。病料经研磨后提取总DNA，用实验室已有的整合有REV片段的FPV特异性引物进行PCR检测，扩增结果呈现阳性，证明是整合有REV片段的鸡痘病毒。用鸡胚绒毛尿囊膜接种法分离培养病毒，连续盲传3代后痘斑大小稳定，整合有REV片段的FPV特异性引物进行的PCR检测呈现阳性，EID50检测病毒滴度为10-5.57/0.1ml。将病毒感染原代鸡胚成纤维细胞（CEF），盲传5代后病变细胞出现典型的“拉网状”。最后对抽提的DNA质粒进行测序，测序结果表明，该分离株与中国分离株（Genbank登录号：GQ415646）的亲缘性最近，其氨基酸和核苷酸的同源性高达100%。确定该分离株为鸡痘病毒。从皮肤病变较严重的部位取样，触片、涂片，革兰氏染色后镜下观察，可见排列成葡萄串状的革兰氏阳性球菌（G+）。勾取病料划线接种于普通琼脂平板及5%兔血平板，37℃培养24h后，血平板菌落周围可见溶血环。对病原菌进行生化特性鉴定，细菌能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖及甘露醇；凝固酶试验、过氧化氢酶试验、MR为阳性；不产H2S，与质控菌株生化特性基本一致，确定该菌株为金黄色葡萄球菌。药敏试验发现其对万古霉素和氯霉素敏感。为了进一步验证所分离的病毒和细菌的致病性，将纯化的病原分别模拟临床易感途径接种于10日龄的雏鸡，逐日观察感染鸡的发病和死亡情况。结果，先接种病毒出现痘疹后再涂布金黄色葡萄球菌的感染组鸡只表现出与自然感染病例相似的临床症状和死亡情况；单独接种病毒组和同时接种病原菌和病毒的试验组鸡只仅仅表现出一过性的皮肤型痘疹，未出现死亡病例；其他试验组均未见有发病和死亡情况。因此，动物回归试验进一步确诊该起病例为鸡痘继发金黄色葡萄球菌感染。该论文的研究结果不仅可以为临床上确诊疑似病原感染病例的诊断提供参考依据，而且分离获得的鸡痘病毒为进一步开展鸡痘的流行病学调查提供了病毒资源，具有重要的理论和实践意义。
【作者】刘文峰；
【导师】贺文琦；
【作者基本信息】吉林大学，兽医，2014，硕士
【关键词】鸡痘病毒；葡萄球菌；病理学；病原学；诊断；

【参考文献】
[1]云美厚,张国富,张国才,易维启.温度与压力对注水地震监测的影响[J].石油地球物理勘探,2001,04:466-470+516.
[2]李根,巩曰情.浅谈设计的意境取向——以福建大用生态茶园会议中心室内外设计为例[J].美术教育研究,2014,19:97.
[3]牛聪,刘春成,刘志斌,张益明,何峰,王志红,解吉高.扩展弹性阻抗反演在储层预测中的应用[J].石油地球物理勘探,2011,S1:67-71+163+169.
[4]蒋盈盈.阴极极化对BDD电极表面性质的影响及在Pb~(2+)检测中的应用[D].西南交通大学,环境工程,2014,硕士.
[5]秦　毅１ａ,乔凯平１ｂ,赫荣富１ｃ,辛　颖２.装备制造产业集群公共实训体系的构建———以沈阳铁西装备制造业公共实训体系建设为例[J].沈阳工业大学学报(社会科学版).
[6]刘刚.小麦—叶锈菌互作过程中[Ca～（2+）]_（cyt）的动态变化研究[D].河北农业大学,植物学,2004,硕士.
[7]陈可晓.我国行政诉讼调解制度构建研究[D].广西民族大学,诉讼法学,2013,硕士.
[8]陈虹,宫洵,胡云峰,刘奇芳,高炳钊,郭洪艳.汽车控制的研究现状与展望[J].自动化学报,2013,04:322-346.
[9]朱士华.短间隙SF_6、N_2及其混合气体放电过程分析[D].哈尔滨理工大学,高电压与绝缘技术,2012,硕士.
[10]金艳娓.重组高温β-葡萄糖苷酶的酶学性质及协同作用研究[D].吉林大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[11]鲍婧.“非遗”生产性保护政策研究[D].中国艺术研究院,艺术学,2014,硕士.
[12]钱奕榕.多元文化对主流宗教的挑战[D].华东师范大学,世界史,2004,硕士.
[13]邱会芸.金属镍、钴分枝结构状的合成表征和其性能研究[D].北京化工大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[14]王稳.轻质及含镁高熵合金的设计、微观组织及储氢性能研究[D].兰州理工大学,材料加工工程,2014,硕士.
[15]明敏.论中国近现代新闻立法及其对当今立法中新闻自由问题的启示[D].湖北大学,新闻学,2011,硕士.
[16]吕书允.OFDM信道系统下数字信号调制识别研究[D].郑州大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[17]记者郭成林.石墨烯项目频频“撩拨”资金冲动华丽家族两成股权转让引发猜想[N].上海证券报,2013-01-23A03.
[18]刘倩.解构主义思潮对思想政治教育的影响及对策探析[D].吉林大学,思想政治教育,2014,硕士.
[19]李骏.昆明市农村公众科学素养状况分析及改进研究[D].浙江大学,2008.
[20]石天然.阎宗临及其中西交通史研究[D].中国艺术研究院,艺术学,2013,硕士.
[21]孟雅冰,李新蓉.蒺藜集合繁殖体形态及间歇性萌发特性[J].植物生态学报,2015,05:508-516.
[22]高永生,李忠芹,张胤,孙海港,张铭.济钢信息主干网系统的建设[J].冶金自动化,2004,03:57-59.
[23]韩啸.工业园区循环经济建设研究[D].湖南师范大学,人文地理学,2014,硕士.
[24]郑杰.江西地区公共租赁住房套型空间设计研究[D].南昌大学,建筑设计及其理论,2012,硕士.
[25]陈琳.焦虑症患者情绪图片信息内隐认知特征的事件相关电位研究[D].南京医科大学,精神病与精神卫生学,2013,硕士.
[26]李凤杰.中学生时间管理倾向在应激交互作用模型中的调节作用[D].内蒙古师范大学,心理健康教育（专业学位）,2012,硕士.
[27]俞奕.激光气体监测仪的数据采集与处理逻辑设计[D].内蒙古科技大学,计算机技术,2014,硕士.
[28]曲波.基于克隆选择计算的入侵检测方法研究[D].西安电子科技大学,2005.
[29]武艺.我国沪深上市公司被外资并购后绩效的实证研究[D].首都经济贸易大学,企业管理,2013,硕士.
[30]孙志林,倪晓静,许丹,聂会.河口泥沙数学模型的若干问题[J].浙江大学学报(工学版),2015,02:232-237.
[31]杜成杰.在“原始”和“文明”中徘徊[D].华中科技大学,比较文学与世界文学,2013,硕士.
[32]郭其一,卢桂章,黄亚楼.一种实现故障定位技术的研究[J].自动化学报,2000,02:282-285.
[33]江柯成,张娟,辛森,肖小玲,郭玉国.石墨烯网络改性的LiNi_(1/3)Mn_(1/3)Co_(1/3)O_2正极材料研究[A].中国硅酸盐学会固态离子学分会.第16届全国固态离子学学术会议暨下一代能源材料与技术国际研讨会论文摘要集[C].中国硅酸盐学会固态离子学分会:,2012:1.
[34]鹿媛媛.基于市场法的企业估值影响因素研究[D].南京财经大学,会计学,2013,硕士.
[35]唐若念.委托代理理论视角下的我国政务公开研究[D].南京航空航天大学,行政管理,2013,硕士.
[36]王浩强.对外汉语教学中的非典型形声字研究[D].安徽大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[37]王学军.岩溶地区公路桥梁深水桩基础施工技术研究[D].重庆大学,建筑与土木工程,2003,硕士.
[38]韩军.双向式CBR算法研究[D].昆明理工大学,2002.
[39]杨阳.阻燃Lyocell纤维的制备及其结构与性能的研究[D].东华大学,材料工程（专业学位）,2014,硕士.
[40]张希法.LYS摩托车公司营销策略研究[D].河南科技大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[41]迟婷玉,李涵,王庚超.用于锂离子电池正极材料的分级孔碳/2,5-二巯基-1,3,4-噻二唑/聚噻吩三元复合物[J].物理化学学报,2013,09:1981-1988.
[42]谢诗雨.论环境艺术设计在长株潭“环境友好型社会”建设中的运用与价值[D].湖南师范大学,美术学,2013,硕士.
[43]高金玲.基于Logistic回归的中小型企业信用评估模型研究[D].西北师范大学,概率论与数理统计,2014,硕士.
[44]刘畅.钢琴演奏中音乐表现的分寸感之研究[D].华南师范大学,音乐学,2004,硕士.
[45]徐光,陈和铁,杨节.冷连轧机计算机控制系统[J].冶金自动化,1999,02:38-40+55.
[46]贾京龙.缸内直喷点燃式甲醇发动机燃烧及排放仿真研究[D].吉林大学,动力机械及工程,2013,硕士.
[47]李莉.数据仓库技术在路政管理系统中的研究与应用[D].南京理工大学,2004.
[48]王麒舒.问题与对策：我国院校研究数据系统建设研究[D].沈阳师范大学,高等教育学,2014,硕士.
[49]周萍.基于神经网络和遗传算法的岩体参数反分析研究[D].河海大学,地质工程,2004,硕士.
[50]曹寿刚.基于李群论和动态纹理的视频分类技术研究[D].华中科技大学,计算机应用技术,2013,硕士.