周期蛋白依赖的激酶10、磷脂酶C伽马1及热休克蛋白90在昆虫蜕皮激素信号转导途径中的功能研究

周期蛋白依赖的激酶10、磷脂酶C伽马1及热休克蛋白90在昆虫蜕皮激素信号转导途径中的功能研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-07-01 分类:期刊论文 喜欢:2466
师大云端图书馆

【摘要】研究背景由于昆虫个体发育阶段明显分为蜕皮和变态,所以科学家将其作为研究多细胞生物发育转变分子机理的理想模式系统。自从StefanKopec对舞毒蛾变态发育的研究开始(Kopec,1926),近一个世纪以来,科学家一直对昆虫内分泌的研究保持着浓厚的兴趣。由于在舞毒蛾中的开拓性研究,导致了包括神经内分泌细胞(Kopec,1922)等一系列新颖概念的提出,从而大大促进了现代内分泌学的发展。近年来,由于分子生物学等各项技术的快速发展,科学家对昆虫蜕皮和变态这两个重要发育转变的分子机理有了更加深刻的认识。研究发现,这些发育转变受到昆虫内分泌系统严格的调控,而控制蜕皮和变态的激素主要是蜕皮激素(20-hydroxyecdysone,20E)和保幼激素(juvenilehormone,JH)。本领域存在的科学问题和研究意义在JH存在下,20E诱导昆虫在幼虫期的多次蜕皮;而当JH滴度下降时,20E促进昆虫从幼虫到蛹的变态发育。因此,20E和JH信号通路通过复杂的相互作用共同调控昆虫的发育,但是其分子机理还有待于进一步的研究。在20E信号通路中,20E诱导核受体EcR/USP的形成及共激活子的募集,从而形成具有DNA结合活性的转录复合体,最终调节基因转录。越来越多的研究表明,除了经典的核受体途径,在20E信号转导通路中还存在一种细胞膜介导的非基因组途径。但是,其机制还没有深入研究。在JH通路中,由于其受体Met的鉴定,JH信号通路的研究蔚然成风,但是关于20E和JH信号通路之间相互作用的机理还并不清楚。人类周期蛋白依赖的激酶10(cyclin-dependentkinase10,CDK10)可以与Hsp90发生相互作用,但是机理并不清楚。己知Hsp90参与调控EcR的DNA活性,并调节20E信号通路。另外,胰岛素可以有效诱导CDK10的快速磷酸化。这些现象暗示,CDK10可能通过与Hsp90的相互作用参与20E通路。同时,我们有必要探索20E能否诱导CDK10的快速磷酸化参与20E激活的非基因组途径。在家蚕和果蝇中的研究表明,20E可以通过细胞膜上的G蛋白偶联受体(G-protein-coupledreceptor,GPCR)诱导钙离子水平上调。果蝇中USP的磷酸化依赖于20E对PKC的激活。然而,20E诱导的钙信号与PKC激活的USP磷酸化之间的联系还没有报道。事实上,一种磷脂酶C(phospholipaseCgamma1,PLCG1)可以承接GPCR信号并通过上调钙信号而激活PKC。所以,20E诱导的细胞膜信号与核受体信号之间的联系是否依赖于PLCG1则需要深入的探讨。在20E信号通路中,Hsp90和Hsc70(Hsp70同源蛋白)通过与果蝇EcR相互作用调节受体的DNA结合活性,但是当受体装配成转录复合体后,热休克蛋白则解离下来而并不出现在启动子区域的复合体中。然而也有文章报道,Hsp90可以调控盐皮质激素受体结合于启动子的不同位置,这暗示它可能参与到转录复合体中。另外Hsc70对于受体的循环和降解也起着至关重要的作用。因此,Hsp90和Hsc70是否参与棉铃虫20E信号转录复合体并调节转录,需要更进一步的研究。鉴于20E和JH能通过复杂的调控网络精密有效地控制昆虫发育,所以阐明20E和JH信号通路不仅能为害虫防治提供策略,也能够为研究人类内分泌系统的调节机理提供参考,最终服务于人类健康。研究方法与取得成果1.20E通过诱导蛋白激酶CDK10的快速磷酸化调节蜕皮激素核受体在启动子上的装配利用RNA干扰技术下调幼虫和表皮细胞系中的CDK10阻碍了幼虫发育并抑制20E可诱导基因的转录。20E诱导CDK10的快速磷酸化,但是G蛋白偶联受体、磷脂酶C、钙离子通道等蛋白的抑制剂都能抑制此磷酸化。磷酸化的CDK10促进其与热休克蛋白(heatshockproteins,Hsps)Hsc70和Hsp90的相互作用,随后有助于更多的Hsc70和Hsp90与蜕皮激素受体EcRB1的相互作用,并最终促进Hsps-EcRB1复合体结合到20E应答元件上调控基因转录。下调CDK10可以抑制Hsps-EcRB1复合体在HR3启动子上的形成。以上结果说明,20E通过非基因组途径诱导CDK10磷酸化,并最终调控细胞核中的基因转录。2.PLCG1将ErGPCR介导的20E膜信号与核受体信号有效连接通过RNA干扰沉默PLCG1后,20E诱导的昆虫化蛹被显著抑制,并导致幼虫死亡和化蛹缺陷,同时20E可诱导基因的表达被下调。20E诱导PLCG1发生酪氨酸磷酸化并向细胞膜迁移。Src激酶家族抑制剂PP2、沉默ErGPCR和Gaq都能抑制PLCG1的酪氨酸磷酸化。PLCG1参与调节20E诱导的Ca2+内流。抑制GPCR、PLC、IP3受体(1,4,5-trisphosphatereceptor)或钙离子通道均有效抑制20E诱导的Ca2+内流和蜕皮激素应答元件EcRE激活的转录。通过PLCG1和钙离子信号途径,20E调控了PKC对USP1第21位丝氨酸(Ser21)磷酸化的催化,而这决定了USP1与EcRE的结合活性。这些结果说明,20E通过ErGPCR和Src激活PLCG1,从而诱导Ca2+内流和USP1的PKC磷酸化,最后调节基因转录。3.热休克蛋白Hsp90通过磷酸化状态的转换和蛋白质相互作用的改变调节20E和JH信号通路的相互作用激素诱导和免疫细胞化学实验显示,20E和JHⅢ以及JH类似物methoprene都能诱导Hsp90表达上调和向细胞核部分转移。qRT-PCR分析说明,干扰Hsp90后有效抑制了20E和JH信号通路中相关基因的表达。蛋白质免疫共沉淀结果显示,20E诱导Hsp90与USP1相互作用,而JH诱导Hsp90与Met1相互作用,20E和JH能互相拮抗各自诱导的相互作用。PKC磷酸化抗体分析说明,JH能诱导Hsp90发生PKC催化的磷酸化,而20E拮抗JH诱导的Hsp90磷酸化。因此,20E和JH通过调控Hsp90磷酸化状态的改变实现相互作用。所取得成果的创新点和意义本文的创新点主要表现在以下几个方面:(1)首次证明了Hsp90在JH信号通路中的功能,及其在20E和JH信号相互作用中的功能;(2)首次发现20E可以通过ErGPCR,PLCG1和钙信号诱导CDK10快速磷酸化,以及CDK10磷酸化对Hsp90和Hsc70介导的核受体装配的调节功能;(3)首次证明Hsp90和Hsc70可以定位于结合有蜕皮激素启动子的转录复合体中;(4)首次发现PLCG1通过激活PKC而磷酸化USP1,且这一过程依赖于ErGPCR和钙信号上调;(5)鉴定了棉铃虫USP1的PKC催化的磷酸化位点Ser21,及其对DNA结合的必要性。本研究将20E非基因组和基因组途径有效联系起来,并给出了理解20E和JH信号通路相互作用的新思路。
【作者】刘文;
【导师】赵小凡;
【作者基本信息】山东大学,生物化学与分子生物学,2014,博士
【关键词】棉铃虫;蜕皮与变态;蜕皮激素;磷酸化;非基因组途径;基因组途径;

【参考文献】
[1]黄丽娜.叶酸片剂的制备工艺和质量控制[D].吉林大学,生物工程,2013,硕士.
[2]曹莉莉.网络整合营销塑造B2B品牌研究[D].北京交通大学,2013.
[3]周敏.B2C模式下的品牌女装企业快速反应能力研究[D].南京大学,物流工程(专业学位),2013,硕士.
[4]郎平.基于嵌入式处理器的数控系统硬件设计与实现[D].杭州电子科技大学,电路与系统,2013,硕士.
[5]唐良文.优势视角下企业青年思想行为的引导方式研究[D].华中师范大学,社会工作,2013,硕士.
[6]尹向民.促进高一年级学生数学思维发展的理论和实践研究[D].云南师范大学,学科教学论,2003,硕士.
[7]胡亮华,王小琴,宁文生,刘化章.干燥温度对Co/SiO_2费托合成催化剂结构和性能的影响[J].工业催化,2011,10:14-18.
[8]谌青青.我国绿色专利发展的政策保障机制研究[D].中国矿业大学,行政管理,2014,硕士.
[9]李南君.雷锋精神对构建社会主义核心价值体系的作用[D].吉林大学,科学社会主义与国际共产主义运动,2013,硕士.
[10]周小莉.乳酸菌在燕麦基质中生长特性研究[D].江南大学,食品科学,2012,硕士.
[11]庄作民.新式压磁式力传感器[J].冶金自动化,1976,01:113-116+109.
[12]李琛琛.董振华教授治疗干燥综合征合并肾小管酸中毒经验[D].北京中医药大学,中医内科学,2013,硕士.
[13]冯军.HIFU治疗肿瘤后树突状细胞疫苗诱导的特异性抗肿瘤效应[D].重庆医科大学,生物医学工程,2004,硕士.
[14]臧秦政.面向强流动性测试项目组的测试用例管理系统设计与实现[D].东华大学,软件工程(专业学位),2014,硕士.
[15]明雷.碳纤维设备的齿轮失效分析与预防措施研究[D].华东理工大学,动力工程,2014,硕士.
[16]曹彬.秦皇岛港口医院员工激励体系研究[D].燕山大学,工商管理,2013,硕士.
[17]刘连伟.基于Mini PCI数据采集接口电路的研究与设计[D].西安电子科技大学,电力电子与电力传动,2012,硕士.
[18]王峰.动态增强磁共振成像和眼外肌自身抗原的免疫学研究在甲状腺相关眼病中的临床应用[D].天津医科大学,眼科学(专业学位),2014,博士.
[19]蒋津君1,张 金2,万海波3.河北省中小型企业体育文化发展现状与管理机制创新[J].河北工业大学学报(社会科学版).
[20]徐秀泉.新型光催化剂降解盐酸莫西沙星及灭活病原微生物研究[D].江苏大学,2012.
[21]张艳.热熔釜感应加热控制系统设计与效率分析[D].西安工业大学,机械电子工程,2014,硕士.
[22]石汇淼.微博客中的知识条目发现方法研究[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[23]赵煌.近代社会观念冲突的透析[D].苏州大学,中国近现代史,2013,硕士.
[24]何仁,吴海啸,张涌,夏晶晶,牟正明.无级变速器用反比例溢流阀特性分析与试验[J].农业机械学报.2008(07)
[25]张蓓蕾.社会主义核心价值体系对高校校园文化引领作用研究[D].沈阳工业大学,马克思主义中国化研究,2013,硕士.
[26]刘远.知识产权海关保护问题研究[D].大连海事大学,国际法学,2004,硕士.
[27]时珊珊,鲁宗相,闵勇,王阳.无差调频过程中微电源功率分配策略设计[J].电力系统自动化,2011,19:23-27+32.
[28]肖峰.国家游泳中心室内装饰装修工程实践与总结[D].长安大学,建筑与土木工程(专业学位),2013,硕士.
[29]程盼盼.基于金属纳米颗粒调控的表面等离子增强有机太阳能电池研究[D].苏州大学,无机化学,2013,硕士.
[30]邢科义,胡保生,万百五.离散制造装配系统的活性控制[J].自动化学报,1999,02:36-43.
[31]曾建潮,吴聚华.模拟退火与摄动分析相结合的DEDS仿真优化方法[J].自动化学报,1993,06:728-731.
[32]穆双琴.压电涡街传感器特性参数分析仪器研究[D].东北大学,检测技术与自动化装置,2011,硕士.
[33]徐海滨.思想政治课教师人格魅力问题研究[D].东北师范大学,课程与教学论,2012,硕士.
[34]杨启文,杨远慧,薛云灿,曹国平.全局最优的邻域估计[J].控制与决策,2012,08:1269-1272.
[35]韩军.货币政策的房地产价格传导机制分析[D].山东财经大学,产业经济学,2013,硕士.
[36]王绍华.石墨烯基复合水凝胶的制备及性能研究[D].安徽大学,物理化学,2014,硕士.
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[39]吴秋实.大学新生人际交往能力的社会工作介入[D].长春工业大学,社会工作,2013,硕士.
[40]王红艺.我党关于社会主义社会基本矛盾的理论与实践探索[D].华东师范大学,马克思主义理论与思想政治教育,2002,硕士.
[41]樊琨.村镇砌体结构民居橡胶垫隔震技术试验研究[D].长安大学,结构工程,2013,硕士.
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[43]刘辉.焦化污水生化处理污泥解体控制技术的研究[D].辽宁科技大学,化学工程,2012,硕士.
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[45]肖忠纯.锦州师专热力管网地理信息系统的设计[D].辽宁工程技术大学,2004.
[46]韩东军,冯晓明,冯帅男,刘昌宏,关亚龙,宋肇群.数控行星铣圆锥螺纹软件的开发[J].一重技术.2002(Z1)
[47]朱树人.NF-MIS网络系统的建设[J].湖南商学院学报.1998(01)
[48]梁新华.论图书馆特色化建设[D].湘潭大学,图书馆学,2003,硕士.
[49]王瑶.管理层特征对财务重述的影响研究[D].南京航空航天大学,会计学,2013,硕士.
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