大鼠脐带间充质干细胞对肝细胞增殖、凋亡及功能的影响

【摘要】目的探讨肝衰竭大鼠血清对脐带间充质干细胞（UMSCs）表面免疫学标记CD86的影响。了解UMSCs对大鼠原代肝细胞增殖、凋亡与功能的影响。方法采用胶原酶和胰酶两步法分离UMSCs，采用贴壁法培养、纯化；观察细胞形态特征及生长状态；流式细胞仪检测UMSCs细胞表面分子标记CD90、CD105；将达70%～80%融合的第3代UMSCs随机分为正常培养基组，正常血清组（含10%正常大鼠血清培养基），肝衰竭血清组（含10%肝衰竭大鼠血清培养基）。以上措施干预培养24h后用流式细胞仪定量监测细胞表面免疫学标记CD86的变化。用胶原酶灌注法分离大鼠肝细胞，肝细胞与UMSCs应用Transwell共培养。原代大鼠肝细胞分为三组：UMSCs组、大鼠原代肝细胞组及UMSCs与大鼠原代肝细胞共培养组，分别于共培养第1d、3d、5d、7d通过MTT法检测各组细胞增殖能力；UMSCs与肝细胞共培养组、肝细胞组，采用脂多糖（LPS）诱导肝细胞凋亡，于共培养24h后采用流式细胞仪检测细胞凋亡率；收集各组细胞共培养第1d、3d、5d培养上清液，ELISA法检测上清液中白蛋白含量。结果1．采用胶原酶和胰酶两步酶法能获得大量的单个UMSCs，在体外可以稳定的生长、扩增。流式细胞仪检测结果显示，分离得到的细胞稳定表达相关抗原标记CD90、CD105，表达率为99.7%、99.5%。2．不同组诱导培养UMSCs24小时后，正常培养基组、正常血清组，肝衰竭血清组细胞表面CD86表达率为0.5%，0.6%，0.4%。相比差异无统计学意义（P＞0.05）。3．（1）UMSCs与原代大鼠肝细胞共培养组在第1d、3d、5d、7d的OD值大于相应时间点的UMSCs组OD值与原代大鼠肝细胞组OD值之和（P＜0.05）。（2）诱导肝细胞凋亡后，流式细胞仪检测阳性对照组、阴性对照组及UMSCs密度为1*104/ml、1*106/ml与肝细胞共培养组凋亡率分别为93.3%、54.2%、59.7%、72.9%，相比差异有统计学意义（P<0.05）。（3）UMSCs无白蛋白分泌能力，UMSCs与大鼠原代肝细胞共培养组培养上清液中白蛋白水平第1d、3d、5d均较原代大鼠肝细胞组明显升高（P<0.05）。结论胶原酶和胰酶两步消化法是一种简单、可靠的分离UMSCs的方法；大鼠UMSCs稳定表达相关抗原标记CD90、CD105。经肝衰竭大鼠血清干预培养UMSCs后CD86仍不表达。UMSCs在体外可以促进肝细胞增殖，抑制其凋亡，并具有增强白蛋白分泌的功能。
【作者】张晓培；
【导师】秦爱兰；
【作者基本信息】苏州大学，感染科（专业学位），2014，硕士
【关键词】脐带间充质干细胞；原代肝细胞；增殖；凋亡；白蛋白；

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