苏州地区儿童肺炎支原体基因亚型及与疾病严重程度相关性研究

【摘要】目的：对苏州地区急性呼吸道肺炎支原体（Mycoplasmapenumoniae，MP）感染患儿呼吸道分泌物标本进行MPP1基因分型，并进行基因测序，探讨苏州地区肺炎支原体流行亚型，及其基因变异情况；同时收集不同型别MP感染患儿的临床资料，探讨MP亚型与疾病严重程度之间的相互关系。方法：选取2012年1月-2013年12月苏州大学附属儿童医院急性呼吸道MP感染患儿（共313例，包括门诊MP感染患儿49例，住院肺炎支原体肺炎患儿264例）的呼吸道分泌物为研究对象。1.MPDNA提取：收集门诊患儿咽试子及住院患儿鼻咽部分泌物；提取MPDNA，进行荧光定量PCR，选取经PCR荧光探针法测定浓度>2.5*10^3（包括2.5*10^3）的标本作为下一步MP分型标本。2.MP基因分型：通过聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（polymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism,PCR-RFLP）和巢式多重PCR对313株Mp临床分离株进行P1基因分型，并比较这2种方法在基因分型中的作用。3.MP基因测序：挑选部分P1-Ⅰ型及P1-Ⅱ型标本进行PCR反应，将其产物进行P1基因测序。4.临床资料收集：收集并比较不同型别MPP（Mycoplasmapenumoniaepenumoniae，MPP）住院患儿的下列临床资料：性别、年龄、临床表现、并发疾病，实验室及影像学检查结果及治疗情况等。结果：1.通过对313例临床标本进行P1基因分型发现，通过PCR-RPLF方法检出P1-Ⅰ型32例（10.22%），P1-Ⅱ型1例（0.32%），280例（89.46%）均无P1-Ⅰ及P1-Ⅱ型型别检出；巢式多重PCR方法检出P1-Ⅰ型304例（97.12%），P1-Ⅱ型8例（2.56%），V2型变异株1例（0.32%），提示研究期间，苏州地区发生的MP感染以P1-Ⅰ型为主。将PCR-RPLF方法与巢式多重PCR方法进行对比发现，巢式多重PCR方法对急性呼吸道MP感染患儿呼吸道分泌物标本提取的DNA进行P1基因分型明显优于PCR-RPLF方法（P<0.05）。2.将测序标本的核苷酸序列在Genebank中用BLAST与标准株M129的P1基因（SequenceID：NC000912.1）比较发现3株P1-Ⅰ型临床标本中有2株发生点突变，另1株P1-Ⅰ型临床标本与M129标准株基因序列一致。3株P1-Ⅱ型临床标本与MP-FH标准株基因序列一致。3.MPP住院患儿临床资料分析显示P1-Ⅰ型与P1-Ⅱ型MPP患儿在平均住院时间及发热时间无明显差异（P>0.05）。P1-Ⅰ型与P1-Ⅱ型MPP患儿在白细胞、CRP以及临床肺部感染评分（TheClinicalPulmonaryInfectionScore，CPIS）上无明显差异（P>0.05）。P1-Ⅱ型MPP患儿的血中性粒细胞比例高于P1-Ⅰ型MPP患儿。1例V2型MP感染患儿为非难治性肺炎支原体肺炎感染表现。结论：1.2012年1月—2013年12月苏州地区发生的MP感染以P1-Ⅰ型为主，发现1例V2变异株。2.巢式多重PCR方法能够直接有效的对MP感染患儿呼吸道分泌物进行P1基因分型。3.MPP1-Ⅰ型及P1-Ⅱ型与肺部感染严重程度可能无明显相关性。V2变异株与疾病严重程度相关性有待进一步研究。
【作者】李东；
【导师】范丽萍；
【作者基本信息】苏州大学，儿科学（专业学位），2014，硕士
【关键词】肺炎支原体；P1基因；基因分型；疾病严重程度；

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