富血小板血浆通过TGF-β1延缓椎间盘退变的初步研究

【摘要】研究目的：探讨富血小板血浆（platelet-richplasma,PRP）在延缓椎间盘退变（intervertebraldiscdegeneration,IDD）中的作用，及可能存在的相关机制，为临床治疗椎间盘退变性疾病提供可靠的实验基础和理论保障。研究方法：实验分为体外和体内实验两部分。体外实验：分别采用显微镜下直接计数法和ELISA法测定PRP中血小板数量和TGF-β1的含量；将体积分数为10%、5%、2.5%、1%的PRP加入兔髓核细胞，CCK-8法于培养后1～7天测定细胞活性，评价不同体积分数PRP对兔髓核细胞增殖的影响；选用最佳体积分数的PRP及TGF-β1抑制剂处理兔髓核细胞，用实时荧光定量PCR检测兔髓核细胞TGF-β1、II型胶原（collagenII）基因和聚集蛋白聚糖（aggrecan）基因mRNA表达水平的变化。体内实验：选取正常体重成年新西兰白兔12只，随机分为造模组、PRP注射组及PRP+TGF-β1抑制剂注射组，使用18G套管针针刺椎间盘造模，造模后4周行核磁共振检查，证实椎间盘退变后，向PRP注射组退变椎间盘内注射自体PRP，向PRP+TGF-β1抑制剂注射组退变椎间盘内注射PRP和TGF-β1抑制剂的混合溶液，分别于注射后4周、8周行核磁共振检查观察椎间盘信号变化，其后处死实验动物，取出椎间盘并行组织学分析。实验结果：PRP中的血小板数量为（1170.25±56.08）×109/L，是全血中的（4.15±0.28）倍；TGF-β1的含量为（1180.13±45.88）pg/mL，是全血中的（3.65±0.60）倍。PRP加入兔髓核细胞4天后，细胞活力最强，后逐渐减弱，其中2.5%体积分数的PRP对兔髓核细胞的促增殖作用最强。PRP处理兔髓核细胞后，TGF-β1、collagenII和aggrecan基因mRNA的表达分别为作用前的（19.38±1.52）倍、（4.43±0.35）倍和（11.81±1.87）倍，明显高于未处理组（P＜0.05），而加入TGF-β1抑制剂后，TGF-β1、collagenII和aggrecan基因mRNA的表达分别为作用前的（5.59±0.34）倍、（2.43±0.39）倍和（4.19±0.50）倍，明显低于PRP处理组（P＜0.05）。向兔的退变椎间盘内注射PRP后，核磁共振显示椎间盘信号强度明显改善（P＜0.05），而同时注射PRP和TGF-β1抑制剂后改善作用不明显。免疫组化结果分析也表明与对照组相比，注射PRP后髓核细胞外基质内II型胶原含量明显增加，TGF-β1阳性细胞数量明显增加（P＜0.05）。结论：PRP可改善兔髓核细胞增殖能力及生物学功能，而TGF-β1抑制剂可以明显减弱这种作用。自体PRP注射到兔的椎间盘内可以延缓兔椎间盘退变的发展，甚至具有一定的逆转作用。TGF-β1是PRP发挥作用的重要因素之一。
【作者】袁晨曦；
【导师】杨惠林；
【作者基本信息】苏州大学，骨外科学，2014，硕士
【关键词】富血小板血浆；TGF-β1；椎间盘；退变；

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