双抗CD34、VEGFR-2支架联合内皮祖细胞局部移植防治支架内晚期再狭窄的实验研究

【摘要】第一部分兔内皮祖细胞的分离、培养、鉴定以及双抗CD34、VEGFR-2生物工程支架的体外构建目的：探索兔外周血体外分离、培养和诱导扩增血管内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)以及双抗CD34、VEGFR-2生物工程支架体外制备的方法。材料及方法：(一)取兔外周血，应用密度梯度离心法获取单个核细胞（monocytes,MNCs）层，通过贴壁筛选得到EPCs，进行诱导、分化、培养和体外扩增，进行细胞形态学和超微结构观察；免疫组化染色显示CD34和VEGFR-2（Vascularendothelialgrowthfactorreceptor-2）的表达；测定其内吞Dil标记乙酰低密度脂蛋白（Dil-ac-LDL）与结合FITC标记荆豆凝集素-1（FITC-UEA-1）的功能。细胞荧光标记物CM-Dil标记移植EPCs，示踪移植后的EPCs靶向归巢情况。(二)以纤维连接蛋白（fibronectin,FN）为载体，反复浸泡吹干法体外构建双抗CD34、VEGFR-2生物工程支架。结果:新西兰兔外周血MNCs经体外培养，光镜下可见从类圆形-多角形-梭形演变，表达祖细胞的表面标志物CD34和内皮细胞系标志VEGFR-2，具有内吞Dil-ac-LDL和结合FITC-UEA-1的功能特性，从形态学、免疫学和功能学提示这些培养细胞就是EPCs。制备的双抗CD34、VEGFR-2生物工程支架表面覆盖有一层生物膜，可吸附EPCs，洗脱膜状物继续培养，这些细胞具有EPCs的功能特性。结论:兔外周血中存在具有分化增殖能力的EPCs，可通过分离MNCs联合体外诱导培养获得，具有干细胞和内皮细胞特性，可经体外扩增和收集。以FN作为载体，可将anti-CD34、VEGFR-2粘附到金属支架丝表面，增效EPCs的靶向归巢。第二部分双抗CD34、VEGFR-2生物工程支架联合内皮祖细胞局部移植防治血管支架内晚期再狭窄的实验研究目的：建立兔动脉粥样硬化血管模型，置入双抗CD34、VEGFR-2生物工程支架,并在支架局部移植EPCs，评价其预防血管内支架晚期再狭窄的疗效。材料及方法：16只雄性新西兰兔，建立兔动脉粥样硬化模型。随机分为实验组（n=8）和对照组（n=8），对照组于髂总或腹主动脉内置入药物涂层支架（雷帕霉素）支架，实验组置入双抗CD34、VEGFR-2生物工程支架，并经球囊导管在支架局部移植EPCs，同时阻断下肢血流使支架置入处EPCs浓聚。术后随访2月。行CT血管造影了解血管通畅情况，动脉造影（DSA）评估支架内再狭窄程度。取含支架动脉血管段进行大体标本及病理检查，作硬组织切片，进行HE染色，专业图像分析软件作图像分析，定量分析再狭窄程度。结果:16例兔动脉支架置入手术均获成功。实验组支架内腔大部分通畅或支架壁轻度增厚，1例再狭窄，再狭窄率为1/7。对照组除1例支架完全闭塞外，余支架内腔基本通畅，支架壁增厚较实验组明显，1例再狭窄，再狭窄率为2/7。实验组管腔最狭窄百分比为（11±5.5）%，明显低于对照组（31.2±16.7）%，经卡方检验，两组比较差异有显著性意义（x2＝18.6，P<0.05）。双抗支架组新生内膜面积、最大内膜厚度及面积狭窄百分比明显小于对照组，管腔面积明显大于对照组，两组比较差异均有显著性意义（P<0.05）。结论:双特异性抗体CD34、VEGFR-2生物工程支架提高了局部种植的EPCs的靶向归巢数量和归巢率，促使支架快速再内皮化，减少内膜增生，降低支架内晚期再狭窄率，在预防再狭窄上具有较好的有效性和安全性。
【作者】盛静宇；
【导师】孙建辉；
【作者基本信息】苏州大学，内科学，2014，硕士
【关键词】内皮祖细胞；动脉粥样硬化；双特异性抗体；支架；细胞移植；再狭窄；

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