干扰DRAM1基因对肝癌HepG2细胞迁移侵袭能力的影响及与自噬之间关系研究

【摘要】目的：探讨干扰DRAM1基因在体外对肝癌HepG2细胞迁移侵袭能力的影响,并对自噬与干扰DRAM1基因造成的细胞迁移侵袭能力的影响之间关系进行初步研究。方法：选用人肝癌HepG2细胞进行试验。脂质体Lipofectamine2000与化学合成双链DRAM1siRNA1/2混合,瞬时转染干扰肝癌HepG2细胞DRAM1基因表达后48小时,Westernblot检测干扰DRAM1基因表达后DRAM1蛋白表达情况并检测其干扰效率；随后,Westernblot检测上皮间质转化(Epithelial-MesenchymalTransition,EMT)相关标记蛋白表达情况；应用transwell小室检测细胞迁移侵袭能力变化。为了进一步研究干扰DRAM1基因造成的细胞迁移侵袭能力的影响与自噬之间关系,干扰DRAM1基因表达后,用Westernblot及细胞免疫荧光法检测细胞内自噬相关蛋白水平变化；同上方法,利用化学合成的双链ATG5siRNA,转染干扰肝癌HepG2细胞自噬相关基因ATG5表达后48小时,Westernblot检测ATG5蛋白表达情况并检测其干扰效率.Westernb1ot及细胞免疫荧光法检测细胞内自噬相关蛋白水平变化；transwell小室检测干扰ATG5基因表达抑制自噬后肝癌HepG2细胞迁移侵袭能力变化。结果：干扰GDRAM1基因表达后48小时,Westernblot检测显示DRAM1siRNA1组和DRAM1siRNA2组DRAM1蛋白的表达水平均明显下调,干扰效率较高；随后应用Westernblot检测干扰DRAM1基因表达后EMT相关标记蛋白表达变化显示：E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin及Snail蛋白表达下调；应用Transwell小室检测各组细胞的迁移侵袭能力,实验结果显示,迁移和侵袭实验透膜细胞数均明显减少。干扰DRAM1基因表达后,利用WesternBlot及细胞免疫荧光法检测自噬相关蛋白表达变化显示,LC3(LC3-Ⅱ)蛋白表达下调,P62蛋白表达上调。干扰ATG5基因表达后ATG5蛋白的表达水平明显下调,进一步WesternBlot及细胞免疫荧光法检测自噬相关标记蛋白表达变化发现,LC3(LC3-Ⅱ)蛋白表达下调,P62蛋白表达上调,证明干扰ATG5后自噬被抑制,Transwell、室检测结果显示,干扰ATG5基因抑制自噬后,迁移和侵袭实验透膜细胞数亦均明显减少。以上各实验结果经统计学分析均有统计学意义。结论：干扰DRAM1基因表达能使肝癌HepG2细胞的上皮间质转化(EMT)能力下降,自噬水平显著下调,侵袭转移能力受到明显抑制。干扰抑制ATG5基因表达有效抑制HepG2细胞自噬后,亦能降低HepG2细胞的侵袭转移能力。本实验证明干扰DRAM1基因表达对HepG2细胞迁移侵袭能力有抑制作用,并与自噬水平下调存在一定的相关性。
【作者】梁庆余；
【导师】吴浩荣；
【作者基本信息】苏州大学，普通外科学，2014，硕士
【关键词】DRAM1；RNAi；自噬；迁移侵袭能力；肝癌；

【参考文献】
[1]苏勇军.苏南宗教旅游资源开发研究[D].苏州大学,2004.
[2]孔康.基于STM32的永磁同步电机的控制[D].苏州大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[3]刘毅.基于iTRAQ技术对HBV相关性肝癌血浆差异蛋白的鉴定及功能学研究[D].重庆医科大学,内科学,2014,博士.
[4]周梦婕.船舶交通风险识别与评估研究[D].浙江大学,控制科学与工程,2014,硕士.
[5]范亚芳,渠芳,张太洪,卞丽.“面向教学的数字化信息资源服务系统”的创建与实现[J].图书情报工作,2005,09:82-85.
[6]刘雪芬.北京公交车辆坐具系统设计适应性研究[D].北京建筑大学,设计学,2013,硕士.
[7]梁荣慧.基于资源的大学生自主学习能力培养研究[D].山西师范大学,现代教育技术（专业学位）,2013,硕士.
[8]崔冶华.MVC设计模式在BREW应用中的研究与实现[D].西安电子科技大学,计算机软件与理论,2011,硕士.
[9]周明.胸腔内药物注射对裸鼠恶性胸腔积液治疗作用的研究[D].中南大学,临床医学,2014,博士.
[10]宋建树.压砂地土壤特性及水分变异规律研究[D].兰州理工大学,水利工程,2014,硕士.
[11]荆树伟.快速城镇化背景下城市综合承灾能力评价研究[D].山西财经大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[12]普峰.基于金融危机防控的信用评级机构法律规制研究[D].天津财经大学,经济法学,2012,硕士.
[13]冀倩倩.糖原合成酶激酶-3α，β在糖尿病小鼠肾组织中的不同分布及表达[D].华中科技大学,内科学,2013,硕士.
[14]窦亚丽.乳化液膜技术处理含镍废水[D].沈阳理工大学,环境工程,2013,硕士.
[15]贺琼.基于顾客体验的品牌传播研究[D].贵州财经大学,企业管理,2013,硕士.
[16]李永福.不同氮源对瘤胃发酵和可利用粗蛋白影响的研究[D].中国农业大学,动物营养与饲料科学,2004,硕士.
[17]丁剑,白晓民,赵伟,李再华,周子冠,许婧,李晓珺.基于二维平面拟合的电网脆弱性分析[J].电力系统自动化,2008,08:1-4.
[18]黄国威.溶胶—凝胶法制备TiO_2-SiO_2复合减反自洁膜[D].山东建筑大学,材料学,2013,硕士.
[19]陶飞飞.城镇居民基本医疗保筹资模式研究[D].上海工程技术大学,社会保障,2012,硕士.
[20]王震.山东省高校网球教师现状研究[D].华中师范大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[21]程芸.休宁电视台对地方形象的构建研究[D].安徽大学,新闻学,2013,硕士.
[22]本报记者刘霞.百年诺奖的争议与遗憾[N].科技日报,2013-10-10002.
[23]梁永新.主动脉内球囊反搏在心肌血管重建治疗中的临床应用与其研究进展[D].青岛大学,外科学,2004,硕士.
[24]胡庆艳.安德瑞·高兹的“经济理性批判”理论探微[D].哈尔滨工业大学,马克思主义理论与思想政治教育,2013,硕士.
[25]任江涛,何武,印鉴,张毅.一种时间序列快速分段及符号化方法[J].计算机科学,2005,09:166-169.
[26]袁斌.中学物理教学中的人文教育[D].江西师范大学,教育,2003,硕士.
[27]杨萍,宋振超.FP-growth算法的一种改进[J].安徽工程科技学院学报,2002,03:8-13.
[28]王晓娟.我国基层信访制度改革研究[D].南京师范大学,中外政治制度,2012,硕士.
[29]郭祥胜.安徽省退耕还林工程科技支撑方案设计[J].林业经济.2003(09)
[30]王旭禛.褪黑素对慢性间歇性缺氧心肺保护作用[D].桂林医学院,外科学,2012,硕士.
[31]刘建明.金融产业支持蓝黄经济区建设实证研究[D].山东大学,工业工程（专业学位）,2012,硕士.
[32]胡安琪.再售期权理论与我国认沽权证泡沫[D].复旦大学,金融学,2012,硕士.
[33]罗应娜,黄皞磊.机械搅拌对Mg-Al-Sn-Y镁合金铸锭组织与电磁屏蔽性能的影响[J].热加工工艺,2015,07:105-107.
[34]魏铁,于世东,于敏杰,吴迪.可控震源噪声分析[J].石油地球物理勘探,2008,S2:38-43+177+8.
[35]唐海英.聚众斗殴罪司法认定探究[D].广西民族大学,刑法学,2013,硕士.
[36]孙洁.中职学校思想政治教育与职业生涯规划研究[D].山西师范大学,思想政治教育,2014,硕士.
[37]徐伟锋.中国南车融资策略研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[38]李春.我国高等教育管理体制改革中的利益关系分析[D].东北大学,教育经济与管理,2010,硕士.
[39]欧阳赛.MOTOmed智能运动训练结合头皮针运动疗法对脑卒中患者下肢功能的影响[D].湖北中医药大学,针灸推拿学（专业学位）,2013,硕士.
[40]翟晓江.当代中国拜金主义泛滥的根源及对策研究[D].河南科技大学,思想政治教育,2013,硕士.
[41]原阳.归经理论选药组方与耐力训练对保护力竭大鼠心肌损伤的研究[D].曲阜师范大学,运动人体科学,2013,硕士.
[42]王玮.银基复合纳米膜的合成及其在表面增强拉曼散射基底方面应用的研究[D].山东大学,2013.
[43]尹鹏.苎麻纤维增强树脂基复合材料的耐湿热老化性能研究[D].哈尔滨工业大学,结构工程,2013,硕士.
[44]刘平.梁式结构转换层高大模板支撑体系安全性研究[D].安徽建筑工业学院,工程力学,2012,硕士.
[45]王万良,陶砾,姚信威,岑跃峰.面向QoS区分的自适应状态转移概率动态更新算法[J].小型微型计算机系统,2013,03:540-544.
[46]王雪.我国审查起诉阶段程序分流研究[D].黑龙江大学,诉讼法学,2013,硕士.
[47]姚晓凤.现代中国丁克家庭人口效应与社会经济的可持续发展[D].江西师范大学,中国近现代史,2004,硕士.
[48]陈亮.发电竞价策略研究与火电厂MIS成本分析系统的开发[D].湖南大学,2003.
[49]李斯诚.二元铍铜团簇的理论研究[D].吉林大学,物理化学,2013,硕士.
[50]梁伟玲.广西地区FⅧ基因突变谱及4种新型突变与临床表型关系研究[D].广西医科大学,儿科学,2013,硕士.