外源性IL-17对胃癌细胞生物学特性的影响及其机制研究

【摘要】目的：采用重组人IL-17作用于IL-17R阳性胃癌细胞，检测外源性IL-17对胃癌细胞生物学特性的影响，探讨IL-17在胃癌进展中的作用及其机制。方法：1采用RT-PCR法检测胃癌细胞株SGC7901、MKN-28和BGC-823细胞中IL-17R的表达。2采用MTT法，检测不同浓度外源性IL-17（5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）作用不同时间（24h、48h、72h）对SGC7901细胞的增殖活性的影响。3采用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验，分别检测IL-17对SGC7901细胞迁移能力和侵袭能力的影响。4采用ELISA法，检测50ng/mlIL-17作用SGC7901细胞后，培养上清中IL-6、IL-8和TNF-α的含量。5采用Westernblot技术，从蛋白水平检测外源性IL-17对SGC7901细胞信号通路蛋白Akt和NF-κB表达水平的影响。结果：1RT-PCR实验结果显示，三种胃癌细胞株SGC7901、MKN-28和BGC-823细胞均表达IL-17R，并且，SGC7901细胞表达IL-17R的水平明显高于MKN-28和BGC-823细胞（P<0.05）。2MTT实验结果显示，不同浓度外源性IL-17作用于SGC7901细胞24h、48h、72h后，细胞相对增殖率无明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）。3细胞划痕实验结果显示，50ng/mlIL-17作用于SGC7901细胞24h后，与对照组相比，实验组细胞向划痕中间迁移的距离明显增大，差异有统计学意义（P<0.01）；Transwell侵袭实验结果显示，50ng/mlIL-17作用于SGC7901细胞48h后，与对照组相比，实验组穿膜细胞数明显增多（P<0.01）。4ELISA实验结果显示，50ng/mlIL-17作用SGC7901细胞48h后：细胞培养上清中IL-6和IL-8的分泌水平（分别为160.5725±37.95；70.1413±16.65）显著高于对照组（分别为106.7082±66.74；62.8905±18.39）（P<0.05）；而TNF-α的分泌水平两组间无显著差异（分别为39.4688±25.28；48.4688±24.36）（P>0.05）。5Westernblot实验结果显示，50ng/mlIL-17作用SGC7901细胞48h后，细胞内Akt和NF-κB蛋白表达水平（分别为0.52±0.13；0.55±0.10）均显著高于对照组（分别为0.33±0.11；0.32±0.07）（P<0.05）。结论：1外源性IL-17作用SGC7901细胞后，对细胞的生长增殖活性无显著影响，但可明显促进其迁移和侵袭。2外源性IL-17作用SGC7901细胞后，培养上清中IL-8和IL-6含量明显增高，且与其相关的信号通路蛋白Akt和NF-κB表达明显增高，提示IL-17可能通过调节PI3K-Akt信号通路上调IL-8和IL-6的分泌，改变肿瘤炎性微环境促进肿瘤进展。
【作者】宋静静；
【导师】单保恩；艾军；
【作者基本信息】河北医科大学，临床检验诊断学，2014，硕士
【关键词】IL-17；SGC7901；Akt；NF-κB；胃癌；

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