Toll样受体9基因多态性与182例儿童EB病毒感染相关性探讨

【摘要】目的：Toll样受体9（TLR9）是细胞表面的一类天然模式识别受体，在机体免疫应答中起着重要作用。本研究通过检测TLR9基因启动子、内含子及外显子不同区域4个SNP位点基因型分析其单核苷酸多态性与儿童EB病毒感染的相关性，拟从基因层面探讨儿童感染EB病毒后临床疾病类型及预后转归存在差异的原因。方法：收集无EBV感染及EBV感染后不同临床表现类型的患者临床病例资料及外周静脉血标本，其中EBV感染相关性嗜血细胞综合征患者3例，传染性单核细胞增多症患者56例，轻微临床症状型EBV活动性感染患者69例，EBV感染阴性者（EBV抗体检测均为阴性）54例。通过数据库查阅TLR9基因SNP位点相关信息，并结合相关文献，最终确定TLR9基因启动子区rs187084（T/C）、rs5743836（T/C），内含子区rs352139（A/G）,外显子区rs352140（G/A）四个位点作为研究对象。应用盐析法提取人外周血标本DNA，Primer5、Oligo2及NCBI数据库设计引物，聚合酶链反应(PCR)扩增包含有所选SNP位点的目的DNA片段，将PCR产物直接测序，通过测序峰图分析SNP位点基因型，比较不同组别间基因型及等位基因频率差异。结果:(1)在本实验人群中，对于所选SNP位点，位点rs187084基因型有TT、TC、CC三种，rs352139基因型有AA、AG、GG三种，rs352140基因型有GG、GA、AA三种，最小等位基因频率分别为39.7%，38.8%，41.9%。以上三位点在实验人群中具有多态性，且与NCBI（dbSNP）数据库及Ensembl（1000Genomes）数据库中公布的其在中国人群中分布状况相似。而位点rs5743836基因型有TT、TC两种，其中以TT基因型为主，TC基因型在所有样本中仅发现1例，表明此位点在实验人群中不存在多态性。（2）EBV相关性嗜血细胞综合症3例各位点基因型分布如下：位点rs187084：T/T2例，T/C1例；rs352139：A/A2例，A/G1例；rs352140：G/G2例，G/A1例。（3）在其余实验组别间，各位点基因型及等位基因分布情况如下表：三组间各位点基因型及等位基因频率分布差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：（1）盐析法可应用于多个外周血样本的DNA提取，操作方法简便，提取的DNA浓度及纯度均比较理想。（2）在纳入研究的182例儿童中，TLR9基因rs5743836位点不存在多态性，故研究基因多态性与疾病的相关性时此位点需要慎重选择。（3）在纳入研究的182例儿童中，TLR9基因rs187084、rs352139、rs352140三个位点存在多态性，且人群中的分布情况与相关数据库中类似，未发现此三个位点的基因多态性与儿童EB病毒感染具有相关性。
【作者】程瑞朵；
【导师】王朝霞；
【作者基本信息】吉林大学，儿科学，2014，硕士
【关键词】Toll样受体9（TLR9）；单核苷酸多态性（SNP）；儿童；EB病毒感染；

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