肝癌细胞特异性环状结合肽的筛选及鉴定

【摘要】肝细胞癌（HCC，肝癌）是世界上常见的恶性肿瘤之一，起病隐匿、进展快、转移早、恶性程度高、预后差、绝大部分发现时已属于中晚期。迫切需要用于早期诊断和有效治疗的新方法，越来越多的研究致力于寻找特异性肿瘤配体。肿瘤特异性结合因子可以作为体内成像因子用于肿瘤及微转移灶的早期诊断，也可以连接到抗癌药物研制专门针对肿瘤细胞而不损伤正常细胞的肿瘤导向药物。噬菌体展示技术能用于筛选特殊靶标的高亲和力和特异性的结合肽，与完整肿瘤细胞的淘洗过程可以用于筛选与肿瘤细胞表面生物标记结合的肽。本课题旨在利用噬菌体随机环七肽库对HepG2细胞进行全细胞消减筛选，寻找与肝癌细胞具有高亲和力的多肽，为进一步研制肝癌早期诊断、药物靶向治疗提供研究基础。本研究利用噬菌体环七肽库筛选与肝癌细胞特异性结合的多肽，并对其结合能力进行生物学鉴定。以HL-7702为阴性消减细胞，HepG2为筛选靶细胞，对噬菌体随机环七肽库进行四轮全细胞消减筛选，并随机挑取60个阳性噬菌体克隆，以ELISA法鉴定其与HepG2细胞的结合活性，取阳性克隆进行测序分析，合成多肽并进行免疫化学和免疫荧光鉴定。经四轮筛选，噬菌体在靶细胞HepG2上出现明显富集；利用ELISA和免疫细胞化学法从随机挑选的60个噬菌体克隆中得到18个与肝癌细胞具有高结合力的噬菌体阳性克隆，测序及免疫荧光鉴定后，发现2条多肽序列亲和力较高，氨基酸序列无同源性，得到2条特异性结合肝癌细胞的多肽序列，为进一步研制用于治疗肝癌的高靶向性药物及肝癌的早期诊断和靶向治疗奠定实验基础。
【作者】王兆永；
【导师】曹宏；
【作者基本信息】吉林大学，外科学，2014，硕士
【关键词】噬菌体随机环七库；肝癌细胞；消减筛选；短肽；

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