盐酸吗啡对肿瘤生长增殖的影响及其分子机制的研究

【摘要】第一部分盐酸吗啡对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞生长的影响目的：本研究通过观察不同剂量盐酸吗啡对人乳腺癌MCF-7细胞生长增殖的影响，以期为吗啡在癌痛治疗中的应用提供临床指导。方法：人乳腺癌MCF-7细胞培养至对数生长期，随机分为7组：空白对照组（C组），0.01μmol/L吗啡组（M1组）、0.1μmol/L吗啡组（M2组）、1μmol/L吗啡组（M3组）、0.1mmol/L吗啡组（M4组），0.01mmol/L纳络酮组（N组）及0.1mmol/L吗啡组+0.01mmol/L纳络酮（MN组）。M1组、M2组、M3组、M4组分别在培养液中加入吗啡，使吗啡的终浓度分别为0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、0.1mmol/L吗啡；N组在培养液中加入纳洛酮使其浓度为0.01mmol/L；MN组则先在培养液加入纳洛酮，使其浓度为0.01mmol/L，孵育30min后再将吗啡加入培养液中使其终浓度为0.1mmol/L继续孵育，对照组（C组）不加入任何药物。四唑盐（MTT）法和克隆形成实验观察细胞生长增殖的变化，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果：M1组、M2组、M3组、M4组及MN组人乳腺癌MCF-7细胞的生长速度均慢于C组（P<0.05）；M1组、M2组、M3组、M4组及MN组MCF-7细胞的克隆形成率低于C组（P<0.05）；0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、0.1mmol/L吗啡使人乳腺癌MCF-7细胞停滞在G2/M期的比例均增加，S期比例减少；M1组、M2组、M3组、M4组及MN组人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡率明显高于C组（P<0.05）；上述各项检测结果中，N组与C组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：盐酸吗啡促进人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡，使细胞周期停滞于G2/M期，降低MCF-7细胞的增殖能力，从而抑制人乳腺癌MCF-7细胞的生长增殖。第二部分盐酸吗啡对体外培养的人胃癌MGC-803细胞生长的影响目的：本研究通过观察不同剂量盐酸吗啡对人胃癌MGC-803细胞生长增殖的影响，探索吗啡成为在癌症治疗药物中的潜力。方法：人胃癌MGC-803细胞培养至对数生长期，随机分为7组：空白对照组（C组），0.01μmol/L吗啡组（M1组）、0.1μmol/L吗啡组（M2组）、1μmol/L吗啡组（M3组）、0.1mmol/L吗啡组（M4组），0.01mmol/L纳络酮组（N组）及0.1mmol/L吗啡组+0.01mmol/L纳络酮（MN组）。M1组、M2组、M3组、M4组分别在培养液中加入吗啡，使吗啡的终浓度分别为0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、0.1mmol/L吗啡；N组在培养液中加入纳洛酮使其浓度为0.01mmol/L；MN组则先在培养液加入纳洛酮，使其终浓度为0.01mmol/L，孵育30min后再将吗啡加入培养液中使其浓度为0.1mmol/L，继续孵育；对照组（C组）不加入任何药物。四唑盐（MTT）法和克隆形成实验观察细胞活性及增殖力的变化，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果：M1组、M2组、M3组、M4组人胃癌MGC-803细胞的各时点的生长速度均慢于C组；M1组、M2组、M3组、M4组细胞的克隆形成率也明显低于C组（P<0.05）；0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、0.1mmol/L吗啡使人胃癌MGC-803细胞停滞在G2/M期的比例均增加，S期比例减少；0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、0.1mmol/L吗啡均可促进人胃癌MGC-803细胞凋亡，其凋亡率明显高于C组（P<0.05）；纳洛酮本身对人胃癌MGC-803细胞的生长无显著影响，但可拮抗吗啡对MGC-803细胞的生长抑制作用。结论：盐酸吗啡促进人胃癌MGC-803细胞的凋亡，使细胞周期停滞于G2/M期，降低人胃癌细胞的增殖能力，从而抑制人胃癌MGC-803细胞的生长增殖。第三部分盐酸吗啡对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响及其分子机制的探讨目的：观察盐酸吗啡对肿瘤体内生长的影响，并探讨其可能的机制，进一步探索吗啡对肿瘤进展的影响，方法：建立裸鼠人胃癌皮下瘤模型，待皮下瘤生长至直径≥1cm时，将40只裸鼠，采用随机数字表法，分为8组：对照组(C组)、生理盐水组（NS组）、5mg/kg吗啡组（M1组）、10mg/kg吗啡组（M2组）、20mg/kg吗啡组（M3组）、40mg/kg吗啡组（M4组）、1mg/kg纳洛酮组（N组）、20mg/kg吗啡组+1mg/kg纳洛酮组(MN组)，每组5只。M1组、M2组、M3组、M4组裸鼠每天在右下腹分别腹腔注射5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg吗啡，N组和NS组裸鼠分别注射1mg/kg纳洛酮或1.5ml/kg生理盐水，MN组裸鼠则先腹腔注射1mg/kg纳洛酮，30min后再给予20mg/kg吗啡；C组不做任何处理，每天1次，连续注射14d;绘制皮下瘤生长曲线观察肿瘤生长速度；透射电镜观察裸鼠人胃癌皮下瘤组织细胞的超微结构；RT-PCR、免疫组织化学染色法和Westernblot技术检测胃癌皮下瘤组织内NF-κB、Cyclind1、Bcl-2、Bax、VEGF、MMP-9mRNA和蛋白质的表达。结果：M1组、M2组、M3组、M4组胃癌皮下瘤生长速度减慢；透射电镜下吗啡组细胞发生明显的凋亡形态学改变；吗啡可使胃癌皮下瘤组织内NF-κB、Cyclind1、Bcl-2、VEGF、MMP-9表达下降，而Bax表达则升高。纳洛酮可拮抗吗啡对胃癌皮下瘤生长的抑制作用。结论：盐酸吗啡可抑制裸鼠人胃癌皮下瘤的生长增殖，纳洛酮可拮抗吗啡对胃癌皮下瘤生长的抑制作用；其机制可能与抑制NF-κB的活性，从而调节其下游各基因的表达有关。
【作者】覃怡；
【导师】谢玉波；
【作者基本信息】广西医科大学，麻醉学，2014，博士
【关键词】吗啡；MCF-7；细胞；增殖；细胞周期；凋亡；胃癌；皮下瘤；生长；

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