小鼠不同组织中HOXB4基因的表达及启动子区CpG岛甲基化状态的研究

【摘要】目前临床上造血干细胞移植已经成为癌症、造血系统疾病、难治性自身免疫性疾病和部分遗传性疾病的重要治疗手段。HOX家族基因编码一类转录因子，参与造血干/祖细胞的发育调控。其家族成员hoxb4是首个被证实既可以促进造血干细胞的增殖和自我更新，而又不影响髓系、淋巴系的分化的因子。人们对hoxb4基因进行了广泛的研究，主要研究hoxb4基因在CD34+细胞中的表达情况，或者是hoxb4在肿瘤细胞中的异常表达情况，但很少有人检测hoxb4基因在正常组织中的表达情况，同时对hoxb4基因在的转录调控机制也了解不多。另外，在支气管哮喘患者吸入变应原后，骨髓中CD34+细胞增多，是否和hoxb4基因有关，有待于我们进一步研究。目的：本实验探讨了正常小鼠不同组织中hoxb4基因、蛋白表达的水平以及其启动子区CpG岛甲基化状态，初步检测hoxb4基因与支气管哮喘疾病的相关性。方法：（1）利用正常小鼠和哮喘小鼠不同组织提取RNA，逆转录成cDNA，采用半定量RT-PCR的方法检测hoxb4基因在不同组织中的表达情况。（2）利用小鼠不同组织提取蛋白质，采用WesternBlot的方法检测小鼠不同组织hoxb4蛋白的表达情况。（3）选取正常小鼠和哮喘小鼠不同组织提取DNA，利用亚硫酸氢盐测序法检测正常小鼠和哮喘小鼠不同组织中hoxb4基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果：（1）正常小鼠胎儿成纤维、骨髓细胞、肾、肺、肝、脑、胎鼠组织以及哮喘小鼠的肺组织、血液中采用RT-PCR方法扩增出362bp片段的hoxb4基因。（2）用WesternBlot方法检测出小鼠各组织hoxb4蛋白。（3）正常小鼠不同组织和哮喘小鼠肺组织、血液中hoxb4基因启动子区CpG岛呈现去甲基化状态。结论：（1）正常小鼠的不同组织和哮喘小鼠的肺组织、血液中hoxb4基因mRNA水平和蛋白水平呈一致性表达，基于这个基础，可进一步对进行hoxb4基因的功能研究（2）正常小鼠的不同组织和哮喘小鼠肺组织、血液中hoxb4基因启动子区CpG岛呈现去甲基化状态，初步研究了hoxb4基因的表达与其启动子区CpG岛甲基化状态的相关性以及hoxb4基因和哮喘疾病的关联。
【作者】金美玉；
【导师】李善玉；
【作者基本信息】吉林大学，儿科学，2014，硕士
【关键词】hoxb4基因；CpG岛；甲基化；小鼠；

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