叶点霉发酵液中蒽醌类物质的分离提取及其生物活性的初步研究

【摘要】植物大黄的地上叶片部分中存在着一种内生真菌——叶点霉菌，该真菌的发酵产物中含有蒽醌类物质。蒽醌类物质具有一定的生物活性，如抗菌、抗炎、抗氧化和抗肿瘤活性等。蒽醌类物质在植物体中的存在形式主要分为两种，一是游离型的蒽醌类物质，二是游离型蒽醌类物质与葡萄糖等结合形成的苷类。本文主要对叶点霉发酵液中总蒽醌类物质的提取方法进行研究，并运用正交实验设计法对总蒽醌类物质的提取条件进行优化，确定的最佳工艺条件为：发酵天数为20d，有机萃取溶剂为氯仿，液料比为50:1，在此实验条件下进行提取，测得叶点霉发酵液中总蒽醌类物质的平均得率为23.96mg/g。采用醋酸镁显色法对氯仿提取物进行显色，并用分光光度计对其吸光度进行检测，叶点霉发酵液中总蒽醌类物质含量的标准曲线的线性回归方程为：y=23.00x+0.015，R2=0.997，总蒽醌类物质的含量在0.001-0.025mg/mL范围内呈良好的线性关系，从而建立了叶点霉发酵液中总蒽醌类物质的定量测量方法，该方法的验证实验结果显示，对于检测叶点霉发酵液中总蒽醌类物质含量，该方法具有良好的精密度、重现性和稳定性，且加样回收率高，检测结果准确，可以满足后续实验的需要。应用层析技术对氯仿提取物中的总蒽醌类物质进行分离纯化，采用红外光谱及核磁共振方法对纯化产物的结构进行确认，经解析，并结合文献数据，对该纯化产物的波谱数据进行了归属，确定了该纯化产物的结构，确定该纯化产物为大黄酸(1,8-二羟基-3-羧基蒽醌)。以实验中制得的大黄酸为对照品，采用高效液相色谱(HPLC)的方法，建立该大黄酸的标准工作曲线，从而建立一种检测叶点霉发酵液中生物活性物质的定性定量方法。研究了叶点霉发酵液中大黄酸的生物活性，分别对其抗菌活性、抗炎活性以及抗氧化活性进行了验证实验。抗菌实验结果显示，叶点霉发酵液的氯仿提取物对四种指示菌有明显的抑制效果，特别是对副伤寒杆菌的抑制作用最为明显。抗炎实验结果显示，选择浓度为15mg/L的大黄酸为安全剂量时，LPS能够诱导RAW264.7细胞释放NO，而大黄酸对LPS刺激下的RAW264.7细胞释放NO的功能由明显的抑制作用。通过DPPH自由基清除活性、还原力以及抑制脂质体过氧化活性实验，对大黄酸的抗氧化活性进行评价，实验结果显示，大黄酸具有一定的DPPH自由基清除能力和还原力，并具有很强的抑制脂质体过氧化活性，显示大黄酸具有一定的抗氧化活性。
【作者】王楠；
【导师】潘风光；
【作者基本信息】吉林大学，食品工程，2014，硕士
【关键词】叶点霉发酵液；蒽醌类物质；纯化；检测方法；大黄酸；生物活性；

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