紫云英苷抗LPS诱发的小鼠乳腺炎作用及机制研究

紫云英苷抗LPS诱发的小鼠乳腺炎作用及机制研究

作者:师大云端图书馆 时间:2019-09-10 分类:参考文献 喜欢:1527
师大云端图书馆

【摘要】乳腺炎是影响牛、羊等反刍类动物的一种重大疾病,给畜牧养殖业造成了巨大的经济损失。脂多糖(LPS)是E.coli胞外膜的主要成分,是引起临床型奶牛乳腺炎的的主要因素。利用中药防治乳腺炎,是当前的研究热点之一。本实验以中药单体紫云英苷为研究对象,通过体外、体内实验,利用LPS乳头管灌注建立小鼠乳腺炎模型,从抗炎角度研究紫云英苷对小鼠乳腺炎的保护作用,并初步探索其抗炎机制,为临床开发乳腺炎治疗药物提供实验依据。本实验首先通过体外实验研究紫云英苷的抗炎机制。通过体外培养小鼠巨噬细胞(RAW264.7),采用CCK-8法测定紫云英苷对细胞的毒性作用,ELISA法检测紫云英苷对LPS刺激的下游促炎性细胞因子TNF-、IL-1β和IL-6的蛋白表达影响,Westernblot法检测紫云英苷对LPS激活的炎性介质iNOS、COX-2蛋白表达及对相关信号通路NF-κB、MAPKs的影响。实验结果表明,在0-100μg/mL浓度范围内,紫云英苷对RAW264.7细胞没有毒性作用;紫云英苷能够显著抑制LPS刺激的下游炎性细胞因子TNF-、IL-1β和IL-6的表达;下调炎性介质iNOS和COX-2的表达;抑制相关通路蛋白P65、IκB以及P38、ERK的磷酸化水平。其次,本实验通过小鼠乳头管灌注LPS的方法建立小鼠乳腺炎模型,分别在LPS灌注前1h和灌注后12h腹腔注射紫云英苷;采取小鼠乳腺组织,通过制备病理切片,测定乳腺组织MPO活性,ELISA法检测促炎性细胞因子TNF-、IL-1β和IL-6的表达情况,来验证紫云英苷的抗炎效果。实验结果表明,紫云英苷显著减弱了小鼠乳腺组织炎性损伤程度,降低了MPO活性,抑制了促炎性细胞因子TNF-、IL-1β和IL-6的表达。最后,本实验通过胶原酶I/II和胰酶混合消化法体外分离培养小鼠乳腺上皮细胞,进一步紫云英苷的抗炎作用。采用CCK-8法测定紫云英苷对细胞的毒性作用,ELISA法检测紫云英苷对LPS刺激的下游促炎性细胞因子TNF-和IL-6的蛋白表达影响,Westernblot法检测紫云英苷LPS激活的炎性介质iNOS、COX-2蛋白表达及对相关信号通路NF-κB、MAPKs的影响。实验结果表明,在0-100μg/mL浓度范围内,紫云英苷对小鼠乳腺上皮细胞没有毒性作用;紫云英苷能够显著抑制LPS刺激的下游炎性细胞因子TNF-、IL-6的表达;下调炎性介质iNOS和COX-2的表达;抑制相关通路蛋白P65、IκB以及P38、ERK的磷酸化水平。以上实验结果表明,紫云英苷通过抑制NF-κB、MAPKs信号通路的激活,降低下游促炎性细胞因子TNF-、IL-1β和IL-6的表达,从而发挥抗炎作用,并对小鼠乳腺炎发挥保护作用。表明紫云英苷可以作为一种潜在的抗乳腺炎药物,具有一定的开发价值。
【作者】李丰阳;
【导师】张乃生;
【作者基本信息】吉林大学,临床兽医学,2014,硕士
【关键词】小鼠乳腺炎;脂多糖;紫云英苷;乳腺上皮细胞;细胞因子;NF-κB;MAPKs;

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