姜黄素和阿魏酸抑制朊病毒复制作用的研究

【摘要】朊病毒（PrPSc）是由正常的朊蛋白（PrPC）发生错误折叠后形成的富含β折叠和具有抗蛋白酶水解特性的异常朊蛋白，两者具有相同的一级结构，且由同一个基因Prnp编码。目前研究显示，朊病毒病对于抗生素和干扰素都不敏感，也无明显的免疫反应，故不能通过传统的抗生素和干扰素治愈，而且传统的方法也无法对污染了朊病毒的物品进行消毒。因此，针对朊病毒的扩散和复制机制，可选用药物来减少朊病毒的聚集、抑制朊蛋白构型变化、破坏病原性蛋白质的β结构等方法，以达到预防和治疗神经退化的目的。大量的研究表明，姜黄素和阿魏酸对阿尔茨海默病、帕金森疾病等朊病毒病类似的神经退行性疾病具有潜在的治疗作用，但是到目前为止，针对这两种中药对朊病毒病是否有治疗作用的研究较少。本实验建立感染朊病毒（ScN2a）细胞模型，并利用此模型研究单体姜黄素和阿魏酸抑制朊病毒的复制作用，并初步探讨姜黄素和阿魏酸抑制朊病毒复制的分子机制，为进一步探索预防和治疗朊病毒病奠定基础。结果表明，0.1、0.5、1、5μg/mL的姜黄素都能够极显著地抑制了ScN2a细胞中PrPC和PrPSc蛋白总量的表达（P<0.01），而且当ScN2a细胞总蛋白经过PK酶消化后，姜黄素对ScN2a细胞中PrPSc蛋白的表达也有明显的抑制作用；阿魏酸在浓度为0.5、1、5μg/mL时都能够极显著地抑制ScN2a细胞中PrPC和PrPSc蛋白总量的表达（P<0.01），但是，当ScN2a细胞总蛋白经过PK酶消化后，阿魏酸对PrPSc蛋白的表达并没有明显的改变。因此在后期的试验中，我们只对单体姜黄素是否对朊病毒复制起抑制作用做了进一步的研究。利用实时荧光定量技术发现，姜黄素对ScN2a细胞中朊蛋白mRNA表达水平没有影响。另外，通过对细胞超微结构的观察发现，N2a细胞接种朊病毒毒株后，高尔基体、内质网、线粒体等细胞器都有不同程度地变化，其中线粒体的变化最为明显，ScN2a细胞中线粒体嵴几乎消失。当用5μg/mL的姜黄素作用ScN2a细胞后，线粒体嵴有明显恢复的迹象。以上的研究结果显示，单体姜黄素能够一定程度地抑制朊病毒的复制，发挥其抗类淀粉样蛋白聚集沉淀的特性。利用双向凝胶电泳技术，分析了单体姜黄素作用于ScN2a细胞后，细胞蛋白表达水平变化情况。结果表明，与对照组相比，姜黄素作用细胞后，有大量蛋白的表达水平发生了变化。通过对SDS-PAGE凝胶电泳图分析，我们找到了表达水平相对差异较大的蛋白点，其中6个蛋白点表达水平上调，14个表达水平下调。通过质谱分析，我们得到了这20个差异蛋白点的信息。利用Westernblot方法进一步验证了其中较其它蛋白点差异明显且与朊病毒有一定联系的2个蛋白，即泛素C末端水解酶L1（UCHL1）和异柠檬酸脱氢酶3（IDH3A）蛋白。检测结果同双向凝胶电泳结果一致，即姜黄素作用细胞后，与对照组相比这两个蛋白的表达水平都上调，而且UCHL1蛋白表达水平显著上调（P<0.05）。UCHL1蛋白是研究神经退行性疾病的一个关键蛋白点，且同疾病的发生呈负相关。这同本实验的研究结果相一致，因此我们认为该蛋白也可能会是研究朊病毒病的一个关键蛋白。
【作者】白换力；
【导师】申海清；
【作者基本信息】吉林大学，临床兽医学，2014，硕士
【关键词】姜黄素；阿魏酸；朊病毒；ScN2a细胞；PrPSc复制；

【参考文献】
[1]杨光.护校生职业兴趣、自我价值感和专业承诺的关系研究[D].河北师范大学,心理健康教育,2014,硕士.
[2]齐晓冉.家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）功能基因组研究[D].西南大学,微生物学,2014,硕士.
[3]王琼.基于对立价值构架理论的医院文化建设研究[D].山西医科大学,护理学,2013,硕士.
[4]彭留永.基于B/S架构文档递送系统设计与实现[D].郑州大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[5]刘红.山东半岛蓝色经济区投资环境优化研究[D].河北经贸大学,区域经济学,2013,硕士.
[6]刘毅.犬瘟热、犬细小病毒二重实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[D].河南科技大学,兽医（专业学位）,2014,硕士.
[7]刘应国.四川县域优势产业发展的对策研究[D].西南交通大学,区域经济学,2014,硕士.
[8]马立新.轧机油膜轴承试验台系统性能优化研究[D].太原科技大学,机械电子工程,2014,硕士.
[9]黄振鸣.国产30万千瓦汽轮机调节系统的故障处理[J].发电设备.1989(12)
[10]佟柏.黑龙江省同江市农村职业教育发展问题研究[D].吉林大学,农业推广,2012,硕士.
[11]杨雪.我国农村小产权房的行政法规制研究[D].辽宁大学,宪法与行政法学,2012,硕士.
[12]王明波.氧化锆陶瓷生坯的微细切削加工研究[D].大连理工大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[13]夏新顺.卷取机的直接张力闭环控制系统[J].冶金自动化,1981,02:34-41.
[14]罗伯特M·奥蒂斯,罗伯特B·史密斯.用于地震资料反褶积的同态系统[J].石油地球物理勘探,1976,S1:21.
[15]饶志华.机械结构装调计算实验技术研究[D].国防科学技术大学,机械工程,2012,硕士.
[16]崔红梅.基于LabVIEW & LabWindows/CVI平台的虚拟测试与分析仪的研究与开发[D].内蒙古农业大学,农业机械化工程,2004,硕士.
[17]陈志强.县级电力局营销辅助决策系统的应用研究[D].华北电力大学（河北）,电气工程,2004,硕士.
[18]胡剑波.关于非线性时滞系统的鲁棒稳定性条件的讨论[J].自动化学报,2000,06:853-854.
[19]胡楠.一部请求的历史考察与现实定位[D].苏州大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[20]常艳兵,冯亚娟,何琼.合金纳米材料修饰的葡萄糖传感器的研究进展[J].曲靖师范学院学报,2014,03:41-46.
[21]樊计昌,王夫运,刘明军,海燕.小波尺度域和空间域倾角扫描高阶相关去噪技术[J].石油地球物理勘探,2008,05:514-517+482.
[22]康惠骏,谢七月,郑芳博.混合励磁电机系统输入输出解耦和线性化[J].控制与决策,2007,05:487-493.
[23]肖迪.长春市青少年心理健康社会教育研究[D].吉林大学,思想政治教育,2014,硕士.
[24]杜月.房地产投资信托基金在中国保障性住房融资中的运用研究[D].辽宁大学,投资经济学,2012,硕士.
[25]陈惠民.大型火电站选购给水泵应考虑的问题[J].上海电力.1997(02)
[26]赖建云.论WTO环保例外权[D].湘潭大学,国际关系,2003,硕士.
[27]陈佳.地方政府行政成本控制的制度分析[D].云南财经大学,政治经济学,2014,硕士.
[28]苏周媛.《大宋宣和遗事》述补结构研究[D].扬州大学,语言学及应用语言学,2012,硕士.
[29]雷莹莹.亲环蛋白A对PRRSV增殖的影响及其作用机制研究[D].华中农业大学,预防兽医学,2014,硕士.
[30]桂林,王祥珩,孙宇光,王维俭.大型汽轮发电机新型中性点引出方式的研究[J].电力系统自动化,2006,01:56-59.
[31]朱青.基于改进的证据推理方法的电力系统风险评估研究[D].合肥工业大学,信息管理与信息系统,2013,硕士.
[32]张玉洁.城乡养老保险制度结构的仿真研究[D].上海工程技术大学,社会保障,2013,硕士.
[33]何薇.1927-1937年金融环境变化与上海钱庄业的变迁[D].上海社会科学院,经济史,2012,硕士.
[34]刘佑华.湖南省导游职业培训体系的优化与运行保障研究[D].湖南师范大学,旅游管理,2013,硕士.
[35]李琳琪.一类图像处理算法的可重构研究[D].西北工业大学,计算机系统结构,2004,硕士.
[36]汪爽.黄山短尾猴雄性攻击支持对交配行为的影响[D].安徽大学,生态学,2013,硕士.
[37]ElizavetaKazachinina.中国与俄罗斯高等教育合作研究[D].厦门大学,亚太国际关系,2014,硕士.
[38]魏曼.基于信息论和粗糙集的遥感影像分类不确定性多尺度评价研究[D].西安科技大学,大地测量学与测量工程,2013,硕士.
[39]吴楠.夫妻财产约定制度研究[D].内蒙古大学,法律,2013,硕士.
[40]罗娴.双关语中幽默效果的分析[D].西南交通大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[41]刘欣欣,印兴耀,张峰,张秀颀.双相各向异性介质地震波传播特征[J].石油地球物理勘探,2014,01:132-142+304.
[42]包帆.带延迟上电复位双路输出LDO芯片设计[D].电子科技大学,集成电路工程（专业学位）,2012,硕士.
[43]谭宝成,杨成.激光雷达动态障碍物检测[J].西安工业大学学报,2015,03:205-209.
[44]何勇福.UHF频段RFID读写器天线研究与设计[D].南昌大学,电子通信工程（专业学位）,2012,硕士.
[45]朱毅,张涛,宋靖雁.未知环境下势场法路径规划的局部极小问题研究[J].自动化学报,2010,08:1122-1130.
[46]刘润.基于STM32精密程控电压源系统的研究与设计[D].苏州大学,电子与通信工程（专业学位）,2013,硕士.
[47]李健.25—（OH）维生素D与癌因性疲乏的相关性分析及临床意义[D].山东大学,肿瘤学（专业学位）,2013,硕士.
[48]王斌.高脂膳食对淋巴细胞亚群的影响及白藜芦醇的干预作用[D].江南大学,食品营养与安全,2014,博士.
[49]赵强.急性胰腺炎胰周血管受累的MRI表现[D].川北医学院,医学影像学与核医学,2014,硕士.
[50]宋振河.土的量化记忆模型参数确定与应用研究[D].大连理工大学,防灾减灾工程及防护工程,2003,硕士.