β-淀粉样蛋白诱导的胞内效应分析

【摘要】阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease,AD）俗称老年痴呆，是一种与年龄有很大关系的退行性疾病。据调查65岁患有老年痴呆的比率是10%，而85岁以上患有老年痴呆病的比率增加到了50%。随着人们对AD致病机制的不断研究，人们发现β淀粉样蛋白在AD发生、发展过程中起着重要的作用，但是人们对β淀粉样蛋白所引起的细胞变化，尤其是在AD致病机制过程中发生变化的蛋白酶并不是完全清楚。整合素连接激酶相关磷酸酶（integrin-linkedkinase-associatedphosphatase,ILKAP）是近几年所发现的一种重要的蛋白磷酸酶。据有关文献报道，ILKAP在Integrin信号通路和JNK/MAPK信号通路中具有重要的作用。而Integrin信号通路中GSK3β和JNK等蛋白激酶在AD的致病机制中起到很重要的作用。我们课题组之前在研究ILKAP在Integrin信号通路中的作用时发现，palladin的存在对于介导ILKAP调节ILK-Integrinβ信号通路的过程具有重要作用。所以，为了进一步研究β淀粉样蛋白所引起细胞内效应的变化，本论文研究了当SH-SY5Y细胞外存在β淀粉样蛋白时，细胞中ILKAP和palladin表达水平的变化。首先我们制备了4种Aβ42的存在形式（Aβ42单体、Aβ42寡聚体、Aβ42原纤维和Aβ42纤维）。不同存在形式的Aβ42具有不同的神经毒性。其中Aβ42寡聚体和原纤维具有较强的神经毒性。然后我们选择4种不同浓度的Aβ42作为SH-SY5Y细胞的胞外基质分别作用细胞12h、36h和60h，并检测每个条件下细胞的存活率及细胞形态。我们发现随着Aβ42浓度的增加和作用时间的延长细胞的存活率不断降低，并且形态发生变化的细胞数量不断增加。为了进一步检测细胞中ILKAP和palladin发生了哪些变化，我们通过免疫荧光和westernblot的方法检测了细胞中ILKAP和palladin亚细胞分布及表达水平的变化。我们发现，随着细胞外Aβ42浓度的增加和作用时间的延长，palladin和ILKAP的表达水平逐渐发生变化，并且在靠近细胞膜处有一定的共亚细胞分布。随着加入Aβ42的浓度的增加，细胞中ILKAP和palladin的表达水平出现先增加后降低的现象。并且ILKAP和palladin的变化趋势相似。这说明ILKAP和palladin在Aβ42引起SH-SY5Y细胞神经毒性损伤的过程中起着一定的作用。目前已有文献报道ILKAP的表达水平与AD致病机制中起着重要作用的蛋白酶有着非常密切的关系。本论文的研究成果对β淀粉样蛋白引起细胞发生的效应变化有着进一步的补充，为更好的探索AD致病机理提供了理论基础。
【作者】孙源鸿；
【导师】张应玖；
【作者基本信息】吉林大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】β-amyloid；palladin；ILKAP；水平；亚细胞分布；变化；

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