革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶与16S rRNA甲基化酶耐药基因研究

【摘要】目的检测长春地区部分医院革兰阴性杆菌对氨基糖苷类抗生素的药物敏感性，分析其氨基糖苷类修饰酶基因与16SrRNA甲基化酶基因的分布和类型，探讨革兰阴性杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药机制，为氨基糖苷类抗生素的合理应用提供依据。方法1.收集长春地区部分医院检验科非重复116株革兰阴性杆菌，包括33株大肠埃希菌、25株肺炎克雷伯菌、14株阴沟肠杆菌、15株鲍曼不动杆菌、19株铜绿假单胞菌和10株粘质沙雷菌。所有菌株均经法国生物梅里埃公司VITEK-32全自动微生物分析系统鉴定，并采用琼脂稀释法检测其对阿米卡星与庆大霉素的敏感性。2.通过聚合酶链式反应（PCR）检测所有菌株的氨基糖苷类修饰酶基因（aac(3)-I、aac(3)-II、aac(6’)-Ib、aac(6’)-II、ant(3″)-I和ant(2″)-I）与16SrRNA甲基化酶基因（armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA）。3.将PCR扩增出的耐药基因片段纯化后测序，并通过BLAST与GenBank中已知序列进行比较分析，确定其基因型。4.将116株革兰阴性杆菌耐药基因型与耐药表型进行对比分析，探讨其耐药基因与耐药表型之间的关系。结果1.116株革兰阴性杆菌对庆大霉素的耐药率高达75.0%，对阿米卡星耐药率为44.0%，对阿米卡星耐药的菌株均对庆大霉素耐药。2.有81株细菌检出氨基糖苷类修饰酶基因，检出的阳性率为69.8%(81/116)。具体的基因类型包括aac(3)-I（2.6%，3/116）、aac(3)-II（63.8%，74/116）、aac(6’)-Ib(28.4%,3/116）、ant(3″)-I(19.8%,23/116)和ant(2″)-I(9.5%,11/116)；而aac(6’)-II基因为阴性。经分析发现1株细菌同时携带4种AME基因，16株细菌同时携带3种基因，28株同时携带2种基因。3.46株呈16SrRNA甲基化酶基因阳性（39.7%，46/116)，armA和rmtB的检出率分别为12.1%(14/116)和31.0%(36/116)，4株菌同时携带armA和rmtB基因，而rmtA、rmtC、rmtD和npmA基因均为阴性。结论1.长春地区部分医院革兰阴性杆菌对氨基糖苷类抗生素阿米卡星和庆大霉素呈现较高的耐药率。2.116株革兰阴性杆菌的氨基糖苷类修饰酶基因共检出5种，按照检出率高低排列依次为aac(3)-II、aac(6’)-Ib、ant(3″)-I、ant(2″)-I和aac(3)-I。3.本地区革兰阴性杆菌携带16SrRNA甲基化酶基因主要以armA和rmtB2种类型。
【作者】周佳琦；
【导师】孙延波；
【作者基本信息】吉林大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】革兰阴性杆菌；氨基糖苷类修饰酶；16SrRNA；甲基化酶；耐药性；

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