猪源乙脑病毒分离株的细胞传代及其全基因组序列分析

【摘要】日本乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus,JEV)隶属黄病毒科、黄病毒属，可在人、蚊子与动物之间循环传播，是一种重要的人兽共患传染病病原。该病在临床上可简称为乙脑（Japaneseencephalitis,JE)，具有病致死率较高，感染发病后大多留有神经性后遗症的特点。全球有超过十亿人生活居住在乙脑流行区域里，并且流行区域近年来仍在在不断扩大之中，已成为全球关注的公共卫生问题。亚洲是乙脑的主要流行区域，目前还没有特效药可于治疗该病，主要依靠疫苗免疫进行预防。通过对JEV全基因组序列分析能够有效获得该病毒的遗传信息。JEV的病毒基因组全长大约11kb，属于正链RNA病毒。其基因组5’端存在一个I型帽子结构，CU－OH结尾多出现在3’端，没有polyA尾。JEV基因组编码一个单独的开放性阅读框（96-10394位点之间），能够编码一个多聚蛋白前体（共计3432个氨基酸），经过蛋白酶剪切作用后可产生3个结构蛋白（C、M、E）与7个非结构蛋白（NS1-NS5）。其中结构蛋白E是JEV最为重要的结构蛋白，有多个抗原表位，在病毒入侵宿主过程发挥重要作用。E蛋白氨基酸的改变可能影响到病毒的毒力，其中最重要的是E176、E138等位点，其他位点的改变（如E177、E279、NS2b-63等）也将直接或间接的改变病毒的毒力。目前，国内已完成130个JEV分离株的全基因组测序工作，其中有63个基因组序列在NCBIGenBank上公布，但是猪源的分离株仅有5个，其余多是蚊源和人源分离株。为了解猪源JEV在细胞内连续传代后的基因组分子特征，本研究将两个猪源河南分离株BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3在BHK-21细胞上进行连续传代，并首先分析了传代中多个代次病毒的E基因序列，以期观察病毒E基因的稳定性与关键核苷酸和氨基酸位点变化情况。然后对两个细胞传代株BSF.ZZ-1-p60与BSF.ZZ-3-p60进行了全基因组序列测定，并对两个毒株的核苷酸与氨基酸序列进行了比对分析。通过对E基因序列分析表明，经连续传代60次后病毒E基因趋于稳定，BSF.ZZ-1毒株E蛋白氨基酸位点E21(A→V)、E200(T→A)、E244(G→E)、E279(M→K)和E426(G→D)，BSF.ZZ-3毒株的E蛋白氨基酸位点E244(G→E)、E255(F→L)、E285(M→L)、E368(L→S)和E497(N→S)传代后发生稳定点突变；通过对全基因组序列测定表明，BSF.ZZ-1-p60和BSF.ZZ-3-p60全基因组长度都由10977nt组成。BSF.ZZ-1-p60和BSF.ZZ-3-p60与SA14-14-2同源性较高，核苷酸同源性为99.6%和95.9%；氨基酸同源性为96.8%和85.0%。研究显示这些位点大多与弱毒株SA14-14-2一致，与强毒株SA14不一致。
【作者】胡博；
【导师】张改平；
【作者基本信息】吉林大学，预防兽医学，2014，硕士
【关键词】乙脑病毒；E基因；全基因组；进化分析；

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