卵泡刺激素激活瞬时受体电位通道C3促进卵巢癌细胞增殖

【摘要】卵巢癌是妇科的三大恶性肿瘤之一,其中绝大多数为上皮性卵巢癌(ovarianepithelialcancer,OEC),虽然对它的研究不断地有新的发现,但其发生发展的机制仍不清楚。且由于缺乏足够有效的预防措施,目前OEC患者的预后仍未有明显改观,五年生存率在30%～40%左右。研究表明卵泡刺激素(Follicle-stimulatinghormone,FSH)是卵巢癌发生发展机制中的重要的影响因素,以往本课题组研究发现FSH可刺激体外培养的OEC细胞株增殖和侵袭能力增强,并增加血管内皮生长因子的表达。为了研究FSH的生物机理,本课题组进行了基因芯片的大规模筛查FSH刺激所产生的OEC细胞株转录水平的影响,观察到瞬时受体电位通道C3(transientreceptorpotentialchannel,TRPC3)蛋白的转录增加。TRPC是细胞膜定位的非选择性阳离子通道,在哺乳动物有7种亚型,主要介导钙离子内流。钙在细胞内参与多种细胞的生物学功能的调控,与细胞生长、分化和死亡过程均有密切的联系。以往本课题组研究观察到TRPC3与卵巢癌的活性有关,TRPC3表达被敲低后,细胞的增殖能力降低、细胞对TRPC通道的激动剂敏感度降低,并且抑制OEC细胞在裸鼠体内成瘤。本实验首先验证了基因芯片的结果,观察到FSH刺激可在转录水平和蛋白水平增加TRPC3的表达,存在剂量依赖效应和时间依赖效应。特异性siRNA抑制TRPC3的表达后,FSH刺激OEC细胞株所产生的生物学效应部分被削弱,包括增殖能力、细胞周期的运行以及抗顺铂凋亡作用。本实验进一步观察FSH与TRPC3之间的调控关系,观察到FSH刺激细胞株后,用免疫荧光方法标记TRPC3蛋白,并用荧光共聚焦显微镜检查,发现在基础荧光信号呈现不同程度增强的同时,细胞膜上的信号更为浓集,提示FSH可促进]PRPC3蛋白在细胞膜上定位。用钙离子的荧光标记物Fluo-3AM标记细胞后,经荧光共聚焦显微镜实时观察细胞内钙信号受TRPC特异性激动剂的影响,结果发现经FSH预处理的OEC细胞有明显的瞬间钙内流发生,其强度较无FSH刺激的细胞明显增强,而TRPC3的干扰可以显著降低FSH的促钙离子内流的效应。细胞信号转导的免疫印迹实验显示下调TRPC3表达后,可以降低FSH导致的Akt/PKB的磷酸化,进而降低survivin,缺氧诱导因子(HIFlα)以及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。实验结果证实TRPC3参与了OEC多种生物学活性的调节,并与FSH调控OEC细胞的机制有关。应用免疫组织化学技术观察了卵巢癌组织中TRPC3的表达情况并进行临床-病理资料的分析,结果显示以表达分数这一评判指标将TRPC3蛋白的表达水平分为高表达组和低表达组后,TRPC3蛋白的表达在不同组织学类型之间存在差异,并与浆液性癌的分化程度存在相关性。Cox回归模型分析术后复发出现时间的早晚这一预后指标与TRPC3表达以及其它临床-病理参数的关系显示出TRPC3蛋白、病理类型以及临床分期在预后的评判上有统计学意义,其中TRPC3高表达组与低表达组相比复发的风险性增加2.86倍。本实验的结果显示TRPC3是FSH影响卵巢癌生物活性的重要的调控分子,提示TRPC3成为OEC治疗靶点的可能。进一步的研究FSH与TRPC3之间的关系将可能带来新的防治OEC的方法并造福广大卵巢癌患者。
【作者】陶祥；
【导师】丰有吉；
【作者基本信息】复旦大学，妇产科学，2011，博士
【关键词】上皮性卵巢癌；瞬时受体电位通道C3；卵泡刺激素；增殖；凋亡；细胞周期；临床-病理分析；肿瘤预后；

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