单抗CD105-生物素—亲和素系统筛选滑膜间充质干细胞的实验研究

单抗CD105-生物素—亲和素系统筛选滑膜间充质干细胞的实验研究

作者:师大云端图书馆 时间:2016-01-25 分类:期刊论文 喜欢:1897
师大云端图书馆

【摘要】第一部分:CD105+SMSCs的分离与成软骨能力的评估目的:比较CD105+SMSCs与CD105-SMSCs的成软骨能力。方法:获取人滑膜组织,传代分离法得到滑膜间充质干细胞(SMSCs),通过流式细胞仪分选出CD105+SMSCs和CD105-SMSCs。而后将实验分为两组:CD105+SMSCs组、CD105-SMSCs组。将细胞分别种植于12孔板中,在种植后第3天、第7天和第14天进行细胞增殖能力检测(WST-1法);在种植后第14天进行Ⅱ型胶原染色,RT-qPCR检测两组细胞Ⅱ型胶原、aggrecan、SOX9的mRNA表达水平。结果:传代分离获取的SMSCs为纺锤形或卫星形。两组细胞在光镜下的形态相似。CD105-SMSCs组CD105免疫荧光染色大多数呈阴性表达,而CD105+SMSCs组细胞大多数呈阴性表达。CD105″SMSCs组细胞和CD105+SMSCs组细胞WST-1检测的od值分别为第3天0.329±0.0120VS0.376±0.012,第7天0.524±0.007VS0.581±0..009,第14天0.658±0.032VS0.702±0.099,三个时间点中两组数据之间均有统计学差异(P<0.05)。第14天时CD105+SMSCs组细胞Ⅱ型胶原染色比CD105-SMSCs组细胞深,RT-qPCR检测结果用2-△△CT值表示,colⅡ、SOX9、aggrecan的2-△△CT值CD105+SMSCs组分别是CD105-SMSCs组的2.937±0.899倍、10.676±2.276倍、4.282±0.463倍,三组数据均有统计学差异(P<0.05)。结论:通过FACS分选得到CD105+SMSCs,分选的过程对于CD105+SMSCs的成软骨能力无明显不良影响,CD105+SMSCs的成软骨能力较CD105-SMSCs强。第二部分:单抗CD105-ABBS筛选SMSCs的实验研究目的:评价单抗CD105-biotin-avidin系统(CD105-ABBS)对CD105+SMSCs的筛选价值和对SMSCs成软骨能力的影响。方法:实验分两组:ABBS组和CD105-ABBS组。在细胞爬片上分别构建ABBS和CD105-ABBS,再将构建好系统的两组爬片同时放入一个盛有SMSCs悬液的培养皿中,然后放入细胞培养箱中孵育。30min后将细胞爬片取出,震荡洗脱未黏附的细胞。计算两组爬片黏附的细胞数量,CD105免疫荧光检测两组黏附的细胞CD105表达的差异;将细胞爬片放入12孔板中,在加入软骨诱导液第3天、第7天、第14天行细胞增殖能力检测(WST-1法);第14天同时进行进行Ⅱ型胶原染色和RT-qPCR检测。结果:30min时ABBS组和CD105-ABBS组黏附细胞数量分别20.33±5.43VS40.67±7.54(个/100倍镜视野),两组数据有统计学差异(P<0.05);CD105+SMSCs所占比例为(47.67±7)%VS(72.33±11.93)%,数据有统计学差异(P<0.05)。成软骨诱导第14天时,Ⅱ型胶原染色ABBS组比CD105-ABBS组浅,RT-qPCR检测结果用2-△△CT值表示,colⅡ、sox9、aggrecan的2-△△CT值CD105-ABBS组分别是ABBS组的1.835±0.369倍、2.808±0.189倍、3.146±0.552倍,有统计学差异(P<0.05)。结论:CD105单抗快速、选择性的吸附增殖成软骨分化能力强的CD105+SMSCs,为体内软骨的原位再生提供了有效的技术手段,同时对于体外构建组织工程复合物也有一定的借鉴意义,其确切的修复效果有待于体内实验进一步研究。
【作者】刘嘉;
【导师】阎作勤;
【作者基本信息】复旦大学,临床医学,2013,博士
【关键词】滑膜间充质干细胞;CD105;组织工程软骨;ABBS;

【参考文献】
[1]金淼.上市国企高管薪酬与企业绩效关系的实证研究[D].石家庄经济学院,会计学,2013,硕士.
[2]王璐.新疆瓦吉里塔格地区钠质煌斑岩的矿物学、地球化学特征及源区[D].中国地质大学(北京),矿物学、岩石学、矿床学,2014,硕士.
[3]徐敏.基于Pro/E和VERICUT的虚拟数车床建模与仿真应用[D].浙江工业大学,2012.
[4]晏秀妹.可溶性纳米二氧化钛及其复合物的制备与表征研究[D].上海大学,2011.
[5]宣练中.PLC及其网络在鞍钢11~#高炉上料系统中的应用[J].冶金自动化,1992,01:6-10+63.
[6]赵军峰.马克思的利益思想及其当代价值[D].湖北大学,马克思主义基本原理,2011,硕士.
[7]张冬.基于游客感知价值视角下的旅游景区服务适配性研究[D].湖北大学,旅游管理,2011,硕士.
[8]宋志强.Mn-Fe基磁制冷材料的批量制备工艺与性能研究[D].内蒙古师范大学,凝聚态物理,2013,硕士.
[9]何旭.梁端开孔的RC框架梁补强后抗震性能的试验研究[D].中国矿业大学,结构工程,2014,硕士.
[10]龚斌.基于超节点与B+树的动态分层P2P系统研究[D].湖南大学,软件工程,2011,硕士.
[11]梁海福.不同结构甘蔗高产群体生长动态及生理研究[D].广西大学,作物栽培与耕作学,2004,硕士.
[12]张瑞.致密气砂岩气水相渗特征研究[D].西北大学,矿产普查与勘探,2014,硕士.
[13]钟伟清.基于ORACLE的烤烟种植空间数据库性能优化[D].西南大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[14]黄子荣,刘应亮,黄浪欢,马艳芳.钛配合物/氧化石墨烯复合储氢材料的制备及其性能研究[J].广东化工,2015,08:40-41+39.
[15]曹程.《人民日报》(海外版)台港澳侨专版有关台湾报道的研究[D].湖北大学,传播学,2012,硕士.
[16]陈可可.旅游体验要素与游客感知旅行社服务质量关系研究[D].天津商业大学,旅游管理,2013,硕士.
[17]尤文钰,包希梅,李景豪,杨铁金.聚硫堇/石墨烯修饰玻碳电极测定壬基酚[J].广州化工,2015,11:124-126.
[18]张智博.从自然存在到社会存在[D].沈阳师范大学,马克思主义哲学,2013,硕士.
[19]陈维杰.我国上市公司经理人股票期权激励效应实证研究[D].山东财经大学,企业管理,2012,硕士.
[20]孙艳,王万良,赵燕伟,刘肖健.产品研发中面向用户意象的交互式遗传算法评价模式[J].计算机集成制造系统,2012,02:276-281.
[21]刘月丽.习惯法与国家法冲突的解决路径[D].北方工业大学,法学理论,2013,硕士.
[22]韩小后.高速走丝电火花线切割加工多次切割工艺数据智选系统研究[D].安徽工程大学,机械制造及其自动化,2012,硕士.
[23]刘允波.智能称重技术在电厂中的应用研究[D].山东大学,电气工程(专业学位),2013,硕士.
[24]黄琛鸿.混合炸药机械感度理论预测研究[D].中北大学,军事化学与烟火技术,2013,硕士.
[25]李唐卉.一种可溶性PPV的合成方法的优化及其应用[D].合肥工业大学,材料学,2013,硕士.
[26]吴莉爽.中医药联合贝伐单抗治疗眼底新生血管疗效研究[D].广州中医药大学,中医五官科学(专业学位),2013,硕士.
[27]龚元军.语音压缩编码G.723.1标准的研究和DSP实现设计[D].华中师范大学,电子与通信工程,2013,硕士.
[28]汪超.石墨烯复合材料研究进展[J].广州化工,2013,08:40-41+118.
[29]张志君.仿棉型织物及其仿棉效果评价的研究[D].苏州大学,纺织材料与纺织品设计,2014,硕士.
[30]吴迪.大跨径连续梁—连续刚构桥施工阶段抗震分析研究[D].吉林大学,桥梁与隧道工程,2014,硕士.
[31]刘应禄.祁韵士《西陲要略》研究[D].新疆大学,历史文献学,2013,硕士.
[32]田秀丽.抑郁症患者前额叶、海马质子波谱特点与认知功能改变的相关研究[D].新乡医学院,精神病与精神卫生学,2012,硕士.
[33]资坚.湖南湘邮科技股份有限公司软件市场营销战略研究[D].湖南大学,工商管理,2011,硕士.
[34]杨静.春晓及其英译文的纯理功能分析[D].华中师范大学,英语语言文学,2014,硕士.
[35]杨晨.服务贸易规则重构下我国建筑服务部门开放利益研究[D].中国社会科学院研究生院,国际贸易学,2014,硕士.
[36]申广庆,付保军,郭章庆,靳玲英.退火炉换向控制系统的PLC改造[J].冶金自动化,2006,05:45.
[37]倪洁红.我国城市居民社区人民调解制度研究[D].华侨大学,法律,2013,硕士.
[38]王晶晶.多金属氧酸盐在显色免疫检测方面的研究[D].东北师范大学,无机化学,2012,硕士.
[39]王亚楠.对外汉语初级综合教材用图研究[D].广东外语外贸大学,汉语国际教育,2013,硕士.
[40]吴克贤.基于分类的文本内容判别方法研究[D].中国地质大学(北京),计算机技术,2013,硕士.
[41]熊双丽.不同阴阳离子水平的日粮对过渡期奶牛钙利用及健康状况的影响[D].甘肃农业大学,动物营养与饲料科学,2003,硕士.
[42]姜华.现代思潮与新闻文化[D].复旦大学,新闻学,2013,博士.
[43]胡雄晖.电力缴费终端的研究与应用[D].武汉纺织大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[44]李慧鹏.依法治校进程中的大学生权益保护问题研究[D].河北师范大学,马克思主义基本原理,2012,硕士.
[45]范福强.基于改进Habedank电弧模型的弓网离线过电压研究[D].西南交通大学,电力系统及其自动化,2014,硕士.
[46]杨兴廷.无人机增益调参飞行控制律设计[D].南昌航空大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[47]李艳涛.几类对称图的分类与计数[D].北京交通大学,2010.
[48]闫云鹏.基于加速度计的海底地震数据采集系统研制[D].杭州电子科技大学,电路与系统,2014,硕士.
[49]段宇锋.网络链接分析与网站评价研究[D].武汉大学,2004.
[50]耿琳.深部采场采空区基本顶来压规律研究[D].辽宁工程技术大学,固体力学,2011,硕士.

相关推荐
更多