蛋白激酶A和钙蛋白酶参与调控血小板Sema4D切割的机制研究

【摘要】神经导向因子Semaphorin4D(Sema4D;CD100)已经证明在血小板上表达,并且通过接触依赖性方式加强胶原诱导的糖蛋白VI(GPVI)/FcRγ复合体信号通路中脾酪氨酸激酶(Syk)的活化来促进血栓形成。我们之前的研究已经证明血小板Sema4D胞外段可以被金属蛋白酶ADAM17切割,产生一个120kDa的具有生物学活性的大片段。并且,我们也鉴定到Sema4D胞内段部分序列与钙调蛋白结合,调节血小板Sema4D的胞外切割。但我们的进一步研究发现,还有其他的调控机制存在。首先,我们探索了蛋白激酶A(PKA)是否参与Sema4D胞外切割的调控。PKA是环腺苷酸(cAMP)依赖的蛋白激酶,PKA在血小板内起着负反馈作用,PKA的活化能够抑制刺激剂诱导的血小板活化,维持血小板在静息状态从而自由循环。抑制PKA的活性能够诱导金属蛋白酶介导的血小板GPIbα的切割。为了研究PKA是否也参与Sema4D胞外段切割,我们使用PKA抑制剂H89和PKA活化剂forskolin来进行一系列实验,结果表明抑制PKA能够诱导金属蛋白酶介导的Sema4D胞外切割,活化PKA能够抑制刺激剂诱导的Sema4D胞外切割。进一步研究发现抑制PKA导致的Sema4D胞外段切割是通过提高ADAM17酶活性引起的,而不是通过使钙调蛋白从Sema4D解离造成的。同时,我们注意到Sema4D也发生胞内段的切割,主要表现为在某些情况下,血小板Sema4D发生胞外切割后残余的28kDa胞内小片段会消失。但是,Sema4D的胞内水解切割的详细机制还不清楚。之前的研究已经证明钙调蛋白能够和Sema4D胞内段结合,并且与钙调蛋白结合的分子往往都是钙蛋白酶(calpain)的底物。这给我们带来新的启示：Sema4D胞内结构域可能被胞内钙离子依赖的半胱氨酸蛋白酶calpain切割。因此,我们对calpain调节Sema4D切割的作用进行了研究。结果表明：1)血小板Sema4D胞内切割主要是由非生理性刺激剂包括W7、A23187和dibucaine所介导。2)W7、A23187和dibucaine能够显著地提高calpain的活性,使calpain能够水解切割Sema4D胞内段。3)calpain参与调节Sema4D胞内段的切割并不依赖于ADAM17。4)calpain介导的血小板Sema4D胞内切割与血小板活化和凋亡有关。因此,我们的结果揭示了调节Sema4D胞内外切割的新机制,为研究与Sema4D切割相关的胞内蛋白和信号通路以及相关疾病提供了新的思路。
【作者】李强；
【导师】朱力；
【作者基本信息】苏州大学，细胞生物学，2014，硕士
【关键词】血小板；Sema4D；蛋白激酶A；钙蛋白酶；

【参考文献】
[1]王伟.具有故障检测功能的新型温度控制器研究[D].沈阳理工大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[2]张凯.人胚胎干细胞诱导分化为角膜内皮样细胞的实验研究[D].山东大学,眼科学,2014,博士.
[3]宫攀.基于缩比实验法的空心电抗器空间磁场研究[D].山东大学,高电压与绝缘技术,2013,硕士.
[4]石冰.琴曲《阳关三叠》流变研究[D].天津音乐学院,音乐表演,2014,硕士.
[5]姜曼.R_0-代数上的直觉模糊子代数和几类特殊的直觉模糊滤子[D].西北大学,基础数学,2013,硕士.
[6]路守栋.益生菌发酵在调理肉制品中的应用研究[D].河南科技学院,农产品加工及贮藏工程,2012,硕士.
[7]张三喜.双作用液压变矩器的理论研究[D].燕山大学,机械电子工程,2014,硕士.
[8]赵峰.党委领导干部问责制研究[D].南京师范大学,宪法学与行政法学,2013,博士.
[9]周涛.浮头式换热器失效分析与延寿技术[D].西安石油大学,机械工程,2011,硕士.
[10]代治国.论2000-2011年内蒙古少数民族作家生态小说创作[D].内蒙古师范大学,中国现当代文学,2012,硕士.
[11]翁晓蓉.利他动机对可持续创业决策的影响机制研究[D].浙江大学,创业管理,2014,硕士.
[12]程雪.缺血性脑卒中发病72小时内梗塞灶体积与证候的相关性及合并疾病对发病初始证候的影响[D].北京中医药大学,中医内科学,2014,硕士.
[13]王红霞.客户关系管理在邮政行业的应用研究[D].哈尔滨工程大学,2003.
[14]金冠一.太岳山不同林分密度油松人工林土壤呼吸特征[D].北京林业大学,生态学,2013,硕士.
[15]刘勇.珍奥集团上海公司营销策略研究[D].大连理工大学,2005.
[16]董杰.公司股东知情权研究[D].扬州大学,民商法学,2012,硕士.
[17]张乐乐.价值链视角的国产动漫产业经营模式研究[D].广西师范大学,企业管理,2013,硕士.
[18]张金凤.提升云南民族传统体育文化“软实力”的途径与对策研究[D].西北师范大学,运动训练,2013,硕士.
[19]李武.泰阳证券深证100ETF基金营销策略研究[D].湖南大学,工商管理,2011,硕士.
[20]李春女.小剂量地塞米松预处理的抗颞叶癫痫和脑保护作用[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[21]李迎辉.基于象限划分的多元投融资主体建设协同管理研究[D].重庆交通大学,技术经济及管理,2011,硕士.
[22]胡际平.现代地下采矿方法典型实例(四)——分段空场采矿法[J].国外金属矿山.1990(05)
[23]刘承军.首钢矿业烧结厂粉尘监测防治实现电子化管理与控制[J].冶金自动化,2008,03:69.
[24]李元实.面向被动式传感器网络的多目标定位跟踪研究与系统设计[D].浙江大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[25]李锦荣.安徽“省直管县”体制改革试点研究[D].安徽大学,公共管理,2014,硕士.
[26]李晓华.硝酸甘油口腔崩解片的研究[D].天津医科大学,药物分析学,2008,硕士.
[27]记者戴丽昕.浦东应组建石墨烯产业联盟[N].上海科技报,2013-07-24002.
[28]范晓.《华尔街日报》与《中国日报》关于马航失联客机报道框架对比分析[D].北京外国语大学,新闻学,2014,硕士.
[29]刘凯锐.深水巨厚粘土地区桩筏复合地基受力特性研究[D].西南交通大学,岩土工程,2014,硕士.
[30]张瑞.基于CUDA的工业CT图像分割算法的设计与实现[D].首都师范大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[31]蒋卡林.字符方程初探[J].自动化学报,1981,02:107-114.
[32]王尧.莫泊桑中短篇小说中女性人物形象分析[D].上海外国语大学,法语语言文学,2013,硕士.
[33]李敏.湘南地区瑶族传统民居群落研究[D].中南林业科技大学,设计艺术学,2013,硕士.
[34]石雪娇.稀土合金滤料去除饮用水中氟离子的性能研究[D].辽宁大学,分析化学,2012,硕士.
[35]汪培培.电子化政府中公务员行政责任问题研究[D].南京大学,行政管理,2013,硕士.
[36]陆涛.绵阳市涪城区基层信访工作困境与对策研究[D].西南交通大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[37]朱豪科.片基带数控分切机的设计及研究[D].浙江工业大学,机械设计及理论,2012,硕士.
[38]常鑫.基于集宁师范学院的图书管理系统的设计与实现[D].内蒙古大学,软件工程,2013,硕士.
[39]杨海东.基于人工智能的城市交通信号控制研究[D].浙江工业大学,2007.
[40]鞠一方.违约损害赔偿中的可预见性规则[D].大连海事大学,民商法,2014,硕士.
[41]滕晓波.氧化石墨烯改性聚硫密封胶性能的研究[D].浙江大学,材料工程（专业学位）,2013,硕士.
[42]彭露.制造过程变异分析技术研究[D].重庆大学,机械制造及其自动化,2014,硕士.
[43]李计广.欧盟贸易政策体系及其决策机制研究[D].对外经济贸易大学,国际贸易学,2004,硕士.
[44]汪涛.网络环境下数字化期刊的研究[D].河北农业大学,农业机械化工程,2004,硕士.
[45]李嘉.健脾活血祛湿方对肝硬化腹水大鼠肝AQP8、9和线粒体的影响[D].广州中医药大学,中医内科学,2014,博士.
[46]崔文娟.基于.NET的牙科诊所信息管理系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2012,硕士.
[47]周龙.GPON高速差分接口的硬件设计[D].北京交通大学,电子与通信工程（专业学位）,2013,硕士.
[48]王莉.基于改进模糊认知图的入侵检测方法研究[D].天津理工大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[49]王瑛.近代晋中商人的新式教育研究（1903-1937）[D].山西师范大学,中国近现代史,2014,硕士.
[50]金磊.贵金属基底与瓷结合的界面研究[D].第四军医大学,口腔临床医学,2004,硕士.