RGD修饰的腺病毒介导ING4和PTEN双基因对人白血病细胞的抑制作用

【摘要】目的：研究经RGD修饰的腺病毒介导ING4或/和PTEN基因表达对人白血病细胞的感染效率及体内外抑制效应与分子机制。方法：在本实验室成功构建并保存的经RGD-4C修饰的腺病毒的基础上，体外检测对比未经修饰的空载体腺病毒和经RGD-4C修饰的空载体腺病毒对多种人白血病细胞系细胞的感染效率，并采用Real-TimePCR和Westernblot法检测多种人白血病细胞内腺病毒-柯萨奇病毒受体（CAR）和相关整合素的表达情况。将携带外源基因ING4的腺病毒Ad.RGD-ING4、携带外源基因PTEN的腺病毒Ad.RGD-PTEN、携带外源双基因ING4和PTEN的腺病毒Ad.RGD-ING4-PTEN体外感染MEG-01人白血病细胞，Westernblot法检测目的基因ING4或/和PTEN在MEG-01细胞中的表达，CCK-8法和AnnexinV-PE/7-AAD双染法检测携带外源基因的腺病毒体外抑制MEG-01细胞生长和诱导凋亡的效应，PI染色法检测外源基因导入后MEG-01细胞的细胞周期阻滞效应，Transwell法检测外源基因导入后对MEG-01细胞侵袭能力的影响。Westernblot法检测细胞凋亡和周期相关基因P53、Bax、Bad、Bcl-2、Bcl-xl、P21的表达情况。同时建立MEG-01人白血病裸鼠移植瘤模型，观察Ad.RGD-ING4-PTEN体内对裸鼠移植瘤的抑瘤增效作用。石蜡切片后免疫组化检测相关因子P53、Bax、Bad、Casepas-3、Bcl-2、Bcl-xl、P21表达情况。结果：与未经修饰的腺病毒比较，RGD-4C的修饰明显提高了腺病毒对部分人白血病细胞的感染能力。外源基因ING4或/和PTEN具有抑制MEG-01人白血病细胞生长、诱导凋亡、阻滞细胞周期于G2/M期和抑制细胞侵袭能力的作用，且双基因共表达具有协同增效作用。体内实验中皮下注射携带外源基因ING4或/和PTEN的腺病毒后，同样能明显抑制MEG-01人白血病裸鼠移植瘤的生长，且双基因共表达有协同抑瘤增效作用。分子机制检测结果表明：双基因共表达的Ad.RGD-ING4-PTEN能上调MEG-01细胞内P53、Bax、Bad、Casepas-3、P21的表达，下调Bcl-2、Bcl-xl的表达且其效应较表达单基因的Ad.RGD-ING4、Ad.RGD-PTEN更为显著。结论：1、经RGD修饰后的腺病毒载体较普通腺病毒载体，大大提高了对部分人白血病细胞系细胞的感染能力。2、不同人白血病细胞间相关整合素的表达差异可能是经RGD修饰后的腺病毒对各种白血病细胞系感染效率差异的原因。3、Ad.RGD-ING4-PTEN双基因共表达较ING4或PTEN单基因表达体外能更显著地抑制MEG-01人白血病细胞的生长、诱导细胞凋亡、产生G2/M期细胞周期阻滞和抑制细胞侵袭。4、Ad.RGD-ING4-PTEN双基因共表达较ING4或PTEN单基因表达体内对MEG-01人白血病细胞裸鼠移植瘤能产生更显著的抑瘤作用。5、Ad.RGD-ING4-PTEN双基因共表达较ING4或PTEN单基因表达能更显著地上调P53、Bax、Bad、Casepas-3、P21和下调Bcl-2、Bcl-xl等细胞凋亡和周期相关蛋白，这可能是双基因共表达较单基因表达在体内外抑制MEG-01人白血病细胞作用中具有协同抑制作用的重要机制之一。
【作者】黄晨；
【导师】缪竞诚；杨吉成；
【作者基本信息】苏州大学，免疫学，2014，硕士
【关键词】腺病毒；RGD；人白血病细胞；ING4；PTEN；

【参考文献】
[1]文涛.知识型员工的人格特征与激励因素研究[D].西安建筑科技大学,科学技术哲学,2004,硕士.
[2]胡觅.疾病状态与社会生活中的“半融入”[D].华中师范大学,社会学,2013,硕士.
[3]宋代风.建筑历史领域内的空间形式研究初探[D].浙江大学,建筑设计及其理论,2004,硕士.
[4]王宝仁,陈耀.重力地形改正的等效质线法[J].石油地球物理勘探,1991,05:617-624+672.
[5]补强,何方方,夏和生.石墨烯/橡胶纳米复合材料研究进展[J].高分子学报,2014,06:715-723.
[6]吴常艳.基于空间外溢效应的区域经济收敛研究[D].西北师范大学,人文地理学,2013,硕士.
[7]杜继永,张凤鸣,杨骥,吴虎胜.多UCAV协同任务分配模型及粒子群算法求解[J].控制与决策,2012,11:1751-1755.
[8]罗运虎,薛禹胜,GerardLEDWICH,刘华伟,胡伟.低电价与高赔偿2种可中断负荷的协调[J].电力系统自动化,2007,11:17-21.
[9]马珊.西安市城市社区全民健身活动及服务体系的研究[D].西安体育学院,体育教育训练学,2013,硕士.
[10]刘建丽,张文珂,张芳芳.中央国有企业投资管控效率对股东回报的影响——基于国有企业股权多元化目标的研究[J].中国工业经济,2014,08:109-121.
[11]焉妍.人正畸牙龈沟液中MMP-13和DPP表达变化及与牙根吸收关系的研究[D].滨州医学院,口腔临床医学,2011,硕士.
[12]何金孝.肺动脉胰岛素敏感性降低促发低氧性肺动脉高压及分子机制[D].第四军医大学,儿科学（专业学位）,2014,硕士.
[13]胡仁统.眼镜蛇毒神经生长因子对HSC-T6细胞增殖、凋亡及蛋白质组表达的影响[D].广西医科大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[14]朱凡.荒漠草原区增雨处理对地表植被和节肢动物群落结构的影响[D].宁夏大学,草业科学,2014,硕士.
[15]杨武昌.论民间文学艺术的知识产权保护[D].郑州大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[16]石玉霞.以财务报告为目的的评估应用研究[D].河北大学,资产评估（专业学位）,2014,硕士.
[17]李志武,贾建援,叶尚辉.串行加工系统Petri网控制器的形式化设计方法[J].自动化学报,1997,02:71-77.
[18]孙磊青.经皮室间隔化学消融治疗肥厚型梗阻性心肌病的临床研究[D].苏州大学,临床医学,2014,硕士.
[19]王娟.二十世纪二十年代历史小说的现代性[D].南京师范大学,中国现当代文学,2011,硕士.
[20]裴利华.“对话—生成”：学校心理教育模式的构建与实施[D].湖南师范大学,教育,2004,硕士.
[21]曹志浩.平地机冷却系统一维仿真分析与优化[D].吉林大学,动力机械及工程,2014,硕士.
[22]刘爱彬.稻草与煤共热解及共气化特性研究[D].华东理工大学,热能工程,2014,硕士.
[23]韩炼.平安深发展银行异构信用卡系统整合设计与实现[D].上海交通大学,软件工程,2013,硕士.
[24]韩秋霞.以Keggin结构多金属氧酸盐为基块的有机—无机复合物的合成、晶体结构与性质研究[D].河南大学,无机化学,2004,硕士.
[25]许青林,覃国民,姜文超,谢燕丽.敏感数据自主可控的云存储平台元数据管理[J].广东工业大学学报,2014,04:46-53.
[26]龚贻娇.从翻译伦理视角看《夏洛的网》的两个中译本[D].华中师范大学,英语语言文学,2014,硕士.
[27]陈忠.基于贝叶斯理论的图像复原算法研究[D].武汉理工大学,应用数学,2012,硕士.
[28]记者江海苹.市领导会见诺贝尔物理学奖获得者[N].厦门日报,2014-02-21A01.
[29]黄愈.A黄金集团公司财务管控机制研究[D].北京交通大学,2014.
[30]高春霞,陈光伟,董宝田,张文塔,岳雪梅.铁路信息安全保障体系研究[J].中国铁路,2015,03:37-41.
[31]阮越平.房地产市场发展现状及对策研究[D].北京交通大学,工程与项目管理,2013,硕士.
[32]张佳佳.语文阅读策略教学对学生学习动机及阅读成绩的影响[D].首都师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[33]王丽珍,周丽华,陈红梅.基于概念层次树的例外挖掘方法研究[J].计算机工程与应用,2002,11:70-74+86.
[34]许鸣超.云南省城乡收入差距影响因素分析[D].云南财经大学,应用统计学（专业学位）,2014,硕士.
[35]包萨础拉.额尔敦陶克陶及其编辑出版活动之探析[D].内蒙古大学,新闻学,2014,硕士.
[36]李明金.水田搅浆机平地装置的设计与试验研究[D].黑龙江八一农垦大学,农业机械化,2014,硕士.
[37]刘秀梅,聂俊华,王庆仁.6种植物对Pb的吸收与耐性研究[J].植物生态学报,2002,05:533-537.
[38]胡宝峰.富水覆岩特厚煤层综放开采导水裂隙带高度研究[D].西安科技大学,采矿工程,2013,硕士.
[39]康国辉.背部腧穴拔罐治疗小儿痰湿阻肺型咳嗽的疗效观察[D].河北医科大学,针灸推拿学（专业学位）,2013,硕士.
[40]张坤.农户非农就业对耕地流转的影响研究[D].南京农业大学,土地资源管理,2013,硕士.
[41]马中帆.飞机水上漂浮特性的数值分析[D].武汉理工大学,固体力学,2013,硕士.
[42]胡婷婷.基于金银中空纳米结构的局域表面等离子体共振传感器[D].苏州大学,分析化学,2013,硕士.
[43]王琰.关联规则增量挖掘算法研究及应用[D].安徽大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[44]付娟娟.山西省义务教育阶段师资均衡配置研究[D].山西财经大学,教育经济与管理,2013,硕士.
[45]王涛,王立德,周洁琼,申萍.基于交换式以太网的列车通信网络实时性研究[J].铁道学报,2015,04:39-45.
[46]李世建,屠叶明.浅析农机化结构与农业结构的同步调整[J].中国农机化.2002(03)
[47]罗德艳.D-半乳糖诱导的拟老化大鼠内耳线粒体转录因子B1、B2的作用[D].华中科技大学,耳鼻咽喉头颈外科学,2013,硕士.
[48]赵昕.高时空分辨单颗粒光谱显微成像[D].湖南师范大学,分析化学,2014,硕士.
[49]林晋.J2EE架构下通用网管平台中工具CAF的研究与设计实现[D].华北电力大学（北京）,计算机应用技术,2003,硕士.
[50]常卫华.T形截面带暗支撑短肢剪力墙抗震性能试验及分析[D].北京工业大学,结构工程,2004,硕士.