新型磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂C96对多发性骨髓瘤治疗作用的研究

【摘要】研究背景和目的：多发性骨髓瘤(Multiplemyeloma,MM)是一种浆细胞异常增生引起的恶性肿瘤，而磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol3kinase,PI3K)/信号通路控制着MM的生长、增殖、迁移、血管生成等方面，是治疗MM的热点靶向之一。在前期研究中，我们利用计算机辅助药物筛选结合生物学方法，筛选出一种能够抑制PI3K生物活性的小分子抑制剂C96，本论文中，我们将阐明其对MM的实验性治疗作用，并揭示其相关机理。研究内容：(1)噻唑蓝（MTT）法检测C96对MM细胞增殖的影响。(2)流式细胞术检测C96对MM细胞凋亡率的影响；Westernblotting检测C96对凋亡相关蛋白的影响。(3)Westernblotting检测C96对Akt磷酸化水平的影响；免疫荧光染色法检测p-AKT蛋白的表达及定位；酶活性法分析C96对PI3K活性的影响。(4)Westernblotting检测C96对PI3K/AKT信号通路相关蛋白的影响。(5)动物实验：构建骨髓瘤的裸鼠异种移植瘤模型，检测C96对裸鼠肿瘤体积大小及裸鼠体重的影响，同时观察C96对裸鼠有无毒性作用。研究结果：(1)C96对多种MM细胞的增殖具有抑制作用。选用了7种MM细胞系，对细胞存活和增殖状况的分析表明，C96对这些细胞的增殖具有明显的抑制作用，并呈剂量依赖性关系。(2)C96诱导MM细胞的凋亡。通过AnnexinV-FITC和PI双染，流式细胞仪检测凋亡细胞所占的比例，发现随着药物浓度的升高凋亡率显著增加。Westernblotting检测结果表明，C96促进了Caspase3的裂解激活，并活化了PARP。另外，它下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，同时上调促凋亡蛋白p53的表达。(3)C96抑制了PI3K/AKT信号通路的激活。Westernblotting检测结果表明，C96可以抑制MM细胞中p-AKT的表达，进而阻断PI3K/AKT信号通路的激活。免疫荧光染色检测了OPM2细胞中p-AKT的表达和定位，同样证实C96对其有抑制作用，并阻止AKT向细胞膜的聚集。同时C96的酶活力检测实验结果显示C96具有抑制PI3K的能力。(4)C96抑制了PI3K/AKT信号通路下游信号mTOR、p70S6K、4E-BP1等蛋白的磷酸化水平。(5)C96延缓裸鼠体内MM的生长。用人MM细胞株JJN3构建裸鼠体内骨髓瘤的异种移植模型，通过16天连续灌胃给药，对其肿瘤体积大小和体重的监测表明，C96能显著抑制肿瘤的生长，而对其体重无明显影响。同时，Westernblotting检测结果表明C96也抑制了肿瘤组织中AKT、mTOR的激活。结论：我们通过计算机辅助药物筛选与生物技术相结合的方法筛选出PI3K的抑制剂C96，这种小分子抑制剂能够有效的抑制PI3K的活性，并且能够通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导MM细胞发生凋亡。
【作者】汤娟；
【导师】毛新良；
【作者基本信息】苏州大学，细胞生物学，2014，硕士
【关键词】C96；PI3K/AKT信号通路；多发性骨髓瘤；

【参考文献】
[1]关吉丽.FS-ActivinA在子宫内膜样腺癌中的表达[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[2]石敏惠.真空压力浸漆与干燥DCS系统研究[D].辽宁工程技术大学,控制理论与控制工程,2003,硕士.
[3]郁沙莎.295例宫颈上皮内瘤变患者中医证型与人乳头瘤病毒感染相关性研究[D].陕西中医学院,中西医结合临床（专业学位）,2013,硕士.
[4]朱承立.正泰三十而立立在哪儿(待续)从“电气”到“电站”华丽“转身”造就新能源领军企业[J].冶金自动化,2014,05:88-89.
[5]王梅.论社区银行作为解决中小企业融资问题的途径[D].厦门大学,政治经济学,2014,硕士.
[6]范昕宇.取回权制度在破产法上的运用[D].吉林大学,民商法学,2004,硕士.
[7]马丽丽.英语角对高中生英语口语能力的影响研究[D].内蒙古师范大学,学科教学（专业学位）,2012,硕士.
[8]江行舟.摩擦焊机静压泄漏流量离线测试系统设计[D].东北大学,机械电子工程,2010,硕士.
[9]李石平.金樱子根的化学成分研究[D].安徽大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[10]朱浩刚,孙煜鸥,戴伟辉.基于数据挖掘的移动通讯业客户流失管理[J].计算机工程与应用,2004,01:215-219.
[11]陈凯,张晓莉,曹崇育.城市轨道交通列车自动防护试验系统的建设[J].中国铁路.2002(04)
[12]叶祥熙.凝结势模型的建立与应用[D].复旦大学,原子与分子物理,2012,博士.
[13]王相峰.浇筑式沥青混凝土心墙堆石坝的应力与变形分析[D].新疆农业大学,水工结构工程,2012,硕士.
[14]张静.西南地区生态旅游资源的法律保护[D].长安大学,经济法学,2013,硕士.
[15]王雪.“绿色话语”的生态批评性分析[D].曲阜师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[16]吴林玲.我国金融犯罪立法完善研究[D].安徽大学,法律,2014,硕士.
[17]李剑锋.基于地貌环境特色的延安城市新区空间形态研究[D].西安建筑科技大学,城市规划与设计,2013,硕士.
[18]柳青.湖北省土地利用的碳排放测算研究[D].湖北大学,人文地理学,2012,硕士.
[19]翟小康.独立董事民事责任制度研究[D].安徽大学,经济法学,2013,硕士.
[20]周若铨.珠江三角洲盐业物流配送中心建设及网络规划[D].华南理工大学,物流工程,2011,硕士.
[21]宋伟杰.基于开关变换器的蓄电池模拟系统研究[D].哈尔滨工业大学,电气工程,2013,硕士.
[22]孙鑫.基于Minex软件的露天煤矿三维地质模型的建立及应用研究[D].辽宁工程技术大学,采矿工程,2012,硕士.
[23]商淑娟.平乐正骨医术传承与发展中人才培养特色的研究[D].湖南中医药大学,中医医史文献,2014,硕士.
[24]鹿小明.文本挖掘及其在信息检索中的应用[J].情报资料工作,2004,06:26-28.
[25]丁俊华.中国特色社会主义农业合作社发展研究[D].河南大学,政治经济学,2014,博士.
[26]金梅.蒙古族传统家庭教育融入现代家庭教育的内容研究[D].内蒙古农业大学,思想政治教育,2013,硕士.
[27]曹小兵.河南省临颍县农民养老保障问题研究[D].西南交通大学,公共管理,2013,硕士.
[28]张赤军.GPS—重力法在高精度物探中的应用[J].石油地球物理勘探,1995,06:828-832+848.
[29]王玲.化学研究性学习的理论和实践探索[D].苏州大学,课程与教学论,2003,硕士.
[30]尹旭.历史新课程实施中存在的问题及对策研究[D].东北师范大学,教育,2003,硕士.
[31]吴剑,张承慧,崔纳新.基于粒子群优化的并联式混合动力汽车模糊能量管理策略研究[J].控制与决策,2008,01:46-50.
[32]周林.济南市农村乡镇卫生院传染病报告质量影响因素分析[D].山东大学,公共卫生（专业学位）,2013,硕士.
[33]蔡顺顺.不同紫苏品系在各海拔条件下丰产性能及质量性状研究[D].西南大学,药用植物栽培学,2013,硕士.
[34]陈晨.农药残留混合污染联合毒性效应研究[D].中国农业科学院,农产品质量与食物安全,2014,博士.
[35]孙斌.快速电磁操动机构的优化设计与动态特性分析[D].山东大学,高电压与绝缘技术,2013,硕士.
[36]杨智勇.复杂背景下的文本提取技术[D].江西师范大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[37]郑洪立,张齐,马小琛,纪晓俊,金平,黄和.产生物柴油微藻培养研究进展[J].中国生物工程杂志,2009,03:110-116.
[38]刘贵敏.武汉基督教控诉运动研究（1951-1955）[D].华中师范大学,中国近现代史,2014,硕士.
[39]姚黎明,姚建铭,余增亮.XML在分子生物学中的应用[J].计算机应用研究,2004,05:105-108.
[40]宁争志.中兴通讯ZXITV系统[J].世界电信.2005(02)
[41]郭唐兵.我国农田水利供给的有效性研究[D].云南财经大学,国民经济学,2013,硕士.
[42]谈俊.N、B、P掺杂碳纳米管的制备及其催化环己烷氧化性能研究[D].华南理工大学,2011.
[43]刘赞.明清仕女画之柔弱风研究[D].湖南师范大学,设计艺术学,2013,硕士.
[44]欧洁,林守勋,李锦涛.数字图书馆中的个性化信息检索[J].微电子学与计算机,2002,07:1-4.
[45]罗媛.In Pursuit of the Real–A Study of Flaubert’s Parrot[D].苏州大学,英语语言文学,2003,硕士.
[46]赵琳.伊乐藻—氮循环菌共同作用对太湖氮循环的影响[D].南京大学,环境工程,2013,硕士.
[47]吴迪.基于船舶纵摇短期预报的主机转速控制方法研究[D].大连海事大学,控制工程,2014,硕士.
[48]刘一鸣.木薯吸附剂的改性及吸附性能研究[D].天津大学,化学工程,2013,硕士.
[49]李瑞峰,曾琳.能源革命下的煤炭需求峰值及供应能力预测[J].煤炭工程,2014,10:6-10.
[50]李治淼.压裂管柱及关键部件弹塑性接触非线性力学研究[D].东北石油大学,油气田地面工程,2014,博士.