IL-18,IL-33对Th1,Th2细胞因子的表达调控在原发免疫性血小板减少症发病中的作用

【摘要】研究目的和背景：原发免疫性血小板减少症(ITP)是一个以自身免疫为主的疾病：主要特征为抗体介导的血小板破坏,巨核细胞血.小板生成不足,T细胞功能失调等。我们研究的主要目的是对ITP患者血清的细胞因子水平做全面的评估和检测,并且就ITP不同病程如初发、缓解、复发的情况跟踪细胞因子的变化。材料和方法：我们的标本来自10位健康人作为对照(作为“Contro1”组),共23位ITP患者,其中17位未经治疗前(作为’NewITP”组),这17位患者经过地塞米松治疗后均获得完全缓解(作为“Response”组),这17位患者中的4位患者与另外6位患者治疗缓解后复发(作为“Relapse”组)。应用细胞因子定量蛋白芯片ELISA技术检测血清中各细胞因子的水平。结果：与正常人相比,Th2相关的细胞因子IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等在初发和复发的ITP患者中显著降低,而Th1相关的细胞因子IFN-γ、TNF-α显著降低而IL-2在ITP患者中没有明显变化。经过地塞米松治疗缓解后,Thl相关细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α和Th2相关细胞因子IL-5、IL-6、IL-10,均不同程度地较患者各自治疗前的水平明显上升。结论：我们细胞因子定量蛋白芯片结果显示：初发ITP患者的勺Th1相关细胞因子显著降低,Th2相关细胞因子也显著降低。经过治疗后完全缓解的ITP患者Th1、Th2相关细胞因子较治疗前均有不同程度的回升。第二部分IL-18,IL-33通过T-bet,GATA3调节CD4+T细胞功能和细胞因子的分泌在原发免疫性血小板减少症(ITP)发病中的作用摘要研究目的和背景：为了检测Thl,Th2失衡在原发免疫性血小板减少症(ITP)当中的作用,我们进行了CD4+T细胞的体外培养,观察其在ITP患者中功能的改变以及地塞米松治疗后的变化；以及探索白介素-18(1L-18)和白介素-33(IL-33)的功能和信号转导在ITP发病机制中的作用。材料和方法：我们采集了共15个样本来自5位健康人作为对照(作为”ControI”组),采集了9个样本来自3位初发ITP患者(作为“NewITP’’组),而另外采集了9个样本来自于3位经过地塞米松治疗后完全缓解的患者(作为”Response”组.),每位受试者分别采集三个样本。将其外周血进行分离,磁珠分选纯化后,培养CD4+T细胞,每个受试者的三个样本随机分组,分别给予10ng/mL的IL-18、100ng/mL的IL-33和不加刺激的不同条件下培养4天。在笫0、1、4天搜集细胞,并用流式细胞仪检测其CD4,IL-13,T-bet,GATA3等指标。细胞的mRNA采集自第0、1、3、4天,运用qRT-PCR的方法检测E4BP4,IL-5,IL-10,IL-18Ra,GATA3,ST2L,和T-bet的值。于第0、1、3、4天搜集细胞培养的上清液并且用流式细胞珠子阵列分析(CBA)方法检测IL-5,IL-10,IL-13,TNF-a,和IFN-γ的水平结果：体外CD4+T细胞培养研究显示初发和缓解ITP患者在研究各时点均有细胞内流式T-bet水平的高表达,IL-13和GATA3在第0和第1天时高表达,但第4天时低表达。细胞内mRNA的E4BP4,T-bet,IL-10的表达有明显升高,同样也观察到了缓解组中IL-10,GATA3,ST2L的明显升高。初发和缓解ITP患者,细胞外CBA检测IL-5,IL-10,IL-13,TNF-α和IFN-γ的水平在各个时点与正常对照相比均明显减低。而对于加入IL-18,IL-33或不加刺激的各组,上述的细胞内流式检测、mRNA、细胞外游离细胞因子均没有显著性差异。总体上经过地塞米松治疗缓解的患者在细胞因子的表达和分泌的过程中与初发ITP患者相比没有显著性差异。结论：ITP患者Th1、Th2相关细胞外游离细胞因子IL-5、IL-10、IL-13、TNF-α、IFN-γ浓度降低与定量蛋白芯片的结果相吻合；ITP患者细胞内Th1相关细胞因子T-bet高表达,细胞内Th2相关细胞因子GATA3与IL-13表达在培养早期升高培养后期减低,为我们揭示了ITP发病可能存在新的原因：即Th1/Th2相关细胞因子可能在转录后调控、翻译后调控和蛋白表达分泌等多层次多级别有调控。体外培养经过IL-18和IL-33的刺激并未观察到健康人或ITP患者的CD4+T细胞功能对于其刺激的显著性差异,我们认为和IL-18,IL-33主要在Th0细胞分化前期而非已经定向分化的Th1/Th2起作用有关。
【作者】陈力航；
【导师】程韵枫；
【作者基本信息】复旦大学，临床医学（专业学位），2013，博士
【关键词】原发免疫性血小板减少症(ITP)；辅助性T细胞1(Th1)；辅助性T纠胞2(Th2)；细胞因子；辅助性T细胞2(Th2)；GATA3；T-bet；IL-18；IL-33；

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