人工合成聚合物传递shRNA-IGF1R特异性抑制兔平滑肌细胞增殖迁移的体内外实验研究

【摘要】目的：评价聚合物作为基因载体介导小发夹结构RNA(shRNA)对兔平滑肌细胞体内外增殖和迁移的抑制作用。方法：检索IGF-1R的基因序列,依照此序列构建同时表达绿色荧光蛋白基因(GFP)和特异性针对兔平滑肌细胞胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)基因的shRNA的质粒pGFPshlGF-1R,用聚合物作为载体,将质粒pGFPshlGF-1R转染进平滑肌细胞,评价人工合成聚合物的转染效率；根据上述得到转染条件,将质粒pGFPshlGF-1R以聚合物作为载体转染进兔平滑肌细胞,同时与单纯的脂质体转染方法相比较,通过westernblot检测两种转染方法对平滑肌细胞中IGF-1R蛋白表达下调情况；在新西兰大兔的颈静脉间位移植模型中,局部应用质粒pGFPshlGF-1R与聚合物的复合物,分子水平用westernblot检测聚合物载体体内转染24h、48h、72h后,颈静脉桥组织中IGF-1R蛋白表达受抑情况；4周后,将兔子处死,取静脉桥标本,10%甲醛固定,石蜡包埋做HE染色,宏观上计算内膜增厚程度和静脉桥管腔面积,评价聚合物质粒pGFPshlGF-1R体内抑制平滑肌细胞增殖和内膜增厚,以及对静脉桥再狭窄的预防效果。结果：不论脂质体转染还是应用聚合物转染方式,都可以将质粒pGFPshlGF-1R转染进平滑肌细胞内。相对于空白对照组和脂质体转染,聚合物作为载体展现了较高的效率。流式细胞结果表明,绿色荧光蛋白基因(GFP)阳性的细胞数占38.1±1.0%,而在脂质体转染组绿色荧光蛋白基因(GFP)阳性的细胞数只有11.0±4.1%。shRNA能明显的抑制IGF-1R的蛋白表达(p<0.01),相比对照组,干扰率达10.4±0.5%(脂质体转染组)和49±2.0%(聚合物转染组)；在体内,聚合物转染组24h、48h、72h干扰效率差异性无统计学意义(p>0.05),分别达77.0±3.6%,65.6±4.9%,和78.0±4.3%。聚合物基因转染显著减少静脉桥厚度(未处理组：0.7±0.1mm2,shIGF1R组：0.48±0.15mm2,P<0.02),表明聚合物基因转染可以作为一种有效可行的用于静脉桥移植术后再狭窄预防措施。体内抑制IGF-1R的表达,显著减低细胞凋亡增殖相关细胞通路信号蛋白如ERK1/1,AKT的磷酸化。结论：人工合成聚合物作为基因载体的转染可能会成为靶向静脉桥再狭窄预防及治疗的重要的安全的转染方法。
【作者】李学彪；
【导师】董爱强；
【作者基本信息】浙江大学，心胸外科，2014，硕士
【关键词】聚合物；平滑肌细胞；基因治疗；静脉桥再狭窄；胰岛素样生长因子1受体；

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