大鼠心肌细胞氧化应激对热休克蛋白27表达影响的研究

【摘要】背景：热休克蛋白（HeatshockproteinsHsps）在应激环境下因其具有抑制细胞凋亡的作用，成为了近期国内外研究的热点。热休克蛋白具有高度的保守性，广泛存在于自然界中的各种生物中。根据其分子量大小及分子结构热休克蛋白分为七个家族：Hsp10，小热休克蛋白，Hsp60，Hsp70，Hsp40，Hsp90，Hsp100。热休克蛋白27(heatshockprotein27，Hsp27)，是小分子热休克蛋白家族的重要成员，其在正常细胞中含量低，但当细胞受到氧化应激损伤时，Hsp27表达水平增高并发挥其保护作用。目前有实验结果提示，Hsp27能够在心、脑、肾等器官的缺血-再灌注损伤中起到保护作用。另外有研究发现Hsp27主要功能有：(1)分子伴侣作用—帮助细胞中的蛋白质进行正确的折叠和去聚集。(2)在氧化应激环境下抑制细胞凋亡并增加细胞耐受性。(3)降低活性氧（ROS）水平，并通过调节细胞内谷胱甘肽水平以降低细胞内铁含量，提高细胞的应激能力。(4)参与细胞免疫应答，减少炎性因子浸润。在心血管疾病中，有研究发现低表达的Hsp27可能促进平滑肌生长及斑块的形成，因此认为维持正常的Hsp27水平以抑制动脉斑块形成可能成为一个干预性治疗方法。同时有人证实在动脉硬化病变中，斑块内部的Hsp27表达减少，而斑块相邻的正常动脉内Hsp27的表达增加。由此认为Hsp27是评估动脉硬化的潜在生物学标志物。但目前Hsp27表达水平能否有效评估心血管疾病仍然存在争议。本实验应用过氧化氢（H2O2）处理大鼠心肌细胞（H9C2细胞）造成氧化应激损伤，并通过改变氧化氢浓度及处理时间，造成不同的氧化损伤，通过RQ-PCR法测定Hsp27mRNA表达量，以此评价心肌细胞Hsp27表达量与细胞损伤程度是否存在相关性，并进一步证实Hsp27在心肌氧化损伤过程中的作用及其机制。目的：本实验通过使用H2O2处理H9C2细胞，造成不同氧化损伤，探讨Hsp27在氧化损伤过程中的表达变化及其作用机制。方法：1.MTT法检测H9C2细胞生存率；2.RQ-PCR法检测Hsp27mRNA，BaxmRNA表达变化；3.数据进行统计学分析。结果：1.MTT结果显示，不同浓度H2O（20.05mmol/l,0.1mmol/l,0.5mmol/l,1mmol/l,5mmol/l）处理H9C2细胞，能明显抑制细胞生存率，诱导细胞凋亡，与此同时，同一浓度H2O2作用不同时间（4h，12h），随着加药时间延长，H9C2细胞生存率明显降低。2.RQ-PCR检测相关基因表达发现：细胞氧化应激程度较轻时，与对照组相比，Hsp27mRNA表达明显增加（P＜0.05），而BaxmRNA表达略有减少（P＜0.05），损伤程度进一步增加时，Hsp27mRNA表达量开始出现减少（P＜0.05），而BaxmRNA表达明显增加（P＜0.05）。3.所得数据应用SPSS17.0检测，有统计学意义。结论：1.使用不同浓度H2O2处理H9C2细胞不同时间，可造成心肌细胞不同程度的氧化应激损伤。2．Hsp27表达情况与心肌细胞氧化应激程度有关，心肌细胞小程度氧化应激时Hsp27表达增加，具有抗氧化应激作用。心肌细胞氧化应激程度加大时，Hsp27表达量出现下降，不能抵抗氧化应激，触发了细胞凋亡程序。
【作者】闫杰；
【导师】刘斌；
【作者基本信息】吉林大学，临床医学，2014，硕士
【关键词】心肌细胞；氧化应激；细胞凋亡；Hsp27；

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