HBV对ANG的体外调控作用及机制研究

【摘要】研究目的观察HBV对ANG的调控作用及其机制,并观察抑制ANG对细胞增殖的影响。研究方法利用HepG2.2.15细胞模型及质粒pcDNA3.1-HBx转染的HepG2细胞,通过Real-timePCR检测ANGmRNA及Elisa,WesternBlot检测ANG蛋白变化,观察HBV/HBx对ANG的调控作用。通过WesternBlot及Elisa检测HBV/HBx对IL-6的调控作用,并检测IL-6刺激及抗体封闭IL-6活性后ANG细胞内外蛋白含量的变化。WesternBlot检测HBV/HBx对HIF-1α的调控作用,并WesternBlot检测HIF-1αsiRNA沉默HIF-1α基因后,ANG蛋白表达的变化。采用免疫荧光方法检测HBV对ANG核转移的影响。通过ANGsiRNA(50nM)转染HepG2.2.15细胞及使用ANG核转移抑制剂neomycine,MTT检测细胞抑制率,并检测ANG基因沉默后核糖体RNA45SRNA的合成变化。研究结果Real-timePCR及Elisa,WesternBlot结果显示在HBV病毒稳定复制的HepG2.2.15细胞及转染X蛋白的HepG2-HBx细胞中,ANGmRNA及蛋白水平均高于对照组。Real-timePCR结果显示在HepG2-HBx细胞中ANG水平升高45SRNA转录水平升高,ANG基因沉默后其转录水平降低。WesternBlot结果显示,HepG2.2.15细胞及HepG-HBx细胞中IL-6及HIF-1α蛋白水平均高于对照组。Real-timePCR及Elisa结果显示IL-6刺激后ANGmRNA及蛋白水平均明显升高,抗体封闭IL-6活性后,ANG蛋白表达降低。WesternBlot及Elisa结果显示,HIF-1α基因沉默后,ANG蛋白表达降低。免疫荧光结果显示较于对照,2215细胞中核转移明显被促进。MTT结果显示,HepG2.2.15细胞中ANG基因沉默或加入核转移抑制剂后细胞增殖明显抑制。研究结论HBV/HBx可上调ANG,这种上调作用可能是通过其对IL-6及HIF-1α的上调实现；HBV可促进上调的ANG核转移；ANG活性被抑制后,可抑制细胞增殖。
【作者】周晓棠；
【导师】陈智；
【作者基本信息】浙江大学，内科学，2014，硕士
【关键词】乙型肝炎病毒；血管生成素；肝细胞肝癌；白介素-6；低氧诱导蛋白-1α；

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