药根碱对HepG2细胞和金黄地鼠的降血脂活性及机制研究

【摘要】随着人们生活水平的不断提高和饮食习惯的变化,高血脂的发病率在逐年增加。血脂异常是一种代谢絮乱,是体内总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)的一种或多种发生异常,它是心血管发病率和死亡率的主要危险因素。据统计,通过控制血清总胆固醇(TC)来干扰动脉粥样硬化,进而可以降低心血管的犯病率。现在医学证明,黄连具有抗菌,抗病毒,抗炎,降血糖和降血脂作用。药根碱是黄连的主要活性成分之一,同属于原小檗碱类生物碱。本实验研究中,探索药根碱对HepG2细胞和金黄地鼠的降血脂作用和机制研究。本研究的主要内容和结果：(1)初步研究黄连生物碱对HepG2细胞的降脂靶点的影响,结果表明黄连生物碱都具有潜在的降血脂活性,对HMGR,LDLR,CYP7A1和回肠中ASBT的mRNA表达和蛋白表达具有一定调节作用。(2)通过对黄连的分离纯化,成功获得药根碱,并且纯度达到98.5%。(3)根据对药根碱急性和亚慢性毒性实验的安全性评估发现,药根碱的LD50值约为5500mg/kg,并且发现在90天的长期喂养中,与对照组相比,药物组的临床体征,器官重量的变化,尿液分析和血液参数等没有显著差异,说明药根碱属于无毒化合物。(4)在探索药根碱对高脂模型金黄地鼠的降脂作用的实验中发现,高脂高胆固醇饮食可以诱导体重,TC,TG和LDL-c水平的增加和HDL-c的降低。给药4周后,药根碱表现出良好的降脂作用和改善体重变化的活性,并呈现剂量依赖关系。尤其药根碱在70.05mg/kg剂量上,可以改善体重变化,且分别显著降低TC,TG和LDL-c20%,43%和19%,升高HDL-c5%(P<0.01)。此外,药根碱显著降低总胆汁酸的含量,明显升高粪便中胆汁酸(TBA)排泄,效果高于同剂量的小檗碱。(5)通过实时荧光定量PCR,Westernbolt和ELISA检测参与胆固醇代谢基因的mRNA表达和蛋白表达。结果显示,与高脂模型组相比,药根碱能显著增加LDLR和CYP7A1的mRNA表达和蛋白表达,并在70.05mg/kg剂量上分别提高LDLRmRNA4倍,增加蛋白含量27%。总之,药根碱是一种潜在的安全降血脂药物,其作用机制是通过调节LDLR和CYP7A1的mRNA表达和蛋白表达来改善胆固醇的利用和排泄。
【作者】吴昊；
【导师】叶小利；
【作者基本信息】西南大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】黄连；药根碱；高脂血症；LDLR；CYP7A1；

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