达托霉素和克拉霉素共载药脂质体的研究

【摘要】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)引起的感染严重影响了公众的健康,甚至是已用某些抗生素治疗过MRSA引起的感染还会导致高的死亡率,随着病原体耐药防控难度的持续增大,除了不断研发新型抗生素之外,对已有抗生素进行新制剂创制与联合给药具有同等的重要性。本研究旨在评估达托霉素和克拉霉素联用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的协同作用效果。本文采用聚乙二醇修饰的脂质体作为载体,考察并系统评价经优化制备的达托霉素、克拉霉素共载药脂质体(PL[CD])抗耐甲氧西林金葡菌(MRSA252)全身感染。通过优化制备得到的达托霉素、克拉霉素共载药脂质体(PL[CD])平均粒径(98.2±2.21)nm,多分散系数为0.251,包封率分别为(92.94±1.21,94.71±1.37)%,载药量为(8.45±0.11,0.29±0.043)%,粒径大小均一,并具有良好的稳定性。在临床剂量下,体内外评价结果显示,达托霉素和克拉霉素共载药脂质体(PL[CD])与达托霉素脂质体及克拉霉素脂质体制剂相比,对MRSA252有更持久的抑制效果,并能显著提高耐甲氧西林金葡菌全身感染模型小鼠的存活率上述研究结果表明,达托霉素和克拉霉素共载药脂质体在体外能够显著增强对抗MRSA的活性,在体内能显著减少MRSA的定植量并能增加宿主的生存率。因此,可为今后临床应用提供相关的依据。本课题的主要研究内容如下：(1)达托霉素、克拉霉素体外协同优选方案通过棋盘法对达托霉素、克拉霉素在体外进行联合,通过计算,联合抑菌指数(FIC)为0.5,可初步判定达托霉素与克拉霉素体外联用有协同作用。(2)单药脂质体的制备及体外协同方案优化克拉霉素高效液相色谱法在45℃条件下,使用C18色谱分离柱,流速为0.7mL/min,流动相是含有0.1%三氟乙酸的乙腈与3.5mM的HC1调pH至3.5±0.2的0.033nol/LKH2PO4(40/60,v/v),检测波长为205nm；达托霉素的高效液相色谱法在35℃条件下,流速为1mL/min,流动相是乙腈与0.5%的NH4H2PO4(36/64,v/v),检测波长为221nrn。通过考察制备达托霉素长循环脂质体的几个影响因素：氢化卵磷脂(HSPC)与胆固醇的摩尔比、脂药质量比,最终得出制备达托霉素长循环脂质体的最优处方,就能得到稳定的脂质体剂型。在4℃的冰箱中保存2个月后几乎无泄漏、无沉淀现象发生。成功制备的克拉霉素、达托霉素单药脂质体联合抑菌指数主要采用棋盘法来测定,得到PL[C]与PL[D]最优化的比率为32：1,此比值用于后续制备共载药脂质体。(3)共载药脂质体的制备与评价通过优化制备得到的达托霉素、克拉霉素共载药脂质体平均粒径(98.2+2.21)nm,多分散系数为0.251,包封率分别为(92.94±1.21,94.71±1.37)%,载药量为(8.45±0.11,0.29±0.043)%,粒径大小均一,并具有良好的稳定性。体外抗耐甲氧西林金葡菌实验主要考察达托霉素三个制剂：克拉霉素脂质体(PL[C])、达托霉素脂质体(PL[D])、达托霉素、克拉霉素共载药脂质体(PL[CD])对MRSA252生长的影响,结果表明,PL[CD]对MRSA252的抑制效果更持久。生物膜的定性和定量结果的分析表明,PL(CD)比PL[C],PL[D]抑制MRSA的效果更强。通过比较PL[C]、PL[D]、PL[CD]对MRSA252致全身感染KM小鼠的治疗效果,结果显示,临床剂量下,达托霉素长循环脂质体能使感染KM小鼠的存活率在观察期(7天)提高到90%。安全性评价结果表明共载药脂质体未对KM小鼠没有明显毒性。
【作者】李艳红；
【导师】李竞；李翀；
【作者基本信息】西南大学，微生物与生化药学，2014，硕士
【关键词】达托霉素；克拉霉素；联合治疗；脂质体；严重感染；生物被膜；

【参考文献】
[1]温馨.师范院校思想政治教育实效性研究[D].内蒙古大学,马克思主义理论,2013,硕士.
[2]孙艺冰.都市农业与中国城市生态节地策略[D].天津大学,建筑设计及其理论,2013,硕士.
[3]陈晨.辽宁联通分组传送网的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.
[4]张勤,钱洁.促进社会组织参与公共危机治理的路径探析[J].中国行政管理,2010,06:88-92.
[5]林丽丽.中国钢铁上市公司的估值研究[D].上海交通大学,工商管理,2013,硕士.
[6]张岐.县域农村居民点整理现实潜力与时序研究[D].中国地质大学（北京）,土地资源管理,2013,硕士.
[7]张成峰.基于ArcGIS的松花江流域水质空间数据库系统的设计与应用[D].东北农业大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[8]李海龙.基于视觉/力传感器的机器人柔顺装配技术研究[D].燕山大学,机械电子工程,2014,硕士.
[9]邹珍.EXPRESS公司发展战略研究[D].苏州大学,工商管理学（专业学位）,2013,硕士.
[10]艾克拜尔·艾力.新疆维吾尔、汉族脂联素基因表达与胆囊胆固醇结石发病因素的研究[D].新疆医科大学,外科学（专业学位）,2013,博士.
[11]高菲.中学区域地理自主式导学案的编写策略研究[D].东北师范大学,学科教学（专业学位）,2012,硕士.
[12]徐彬超.广西高校本科体育教育专业教育实习现状调查分析[D].广西民族大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[13]张善志,曹晨华,刘忠厚.关于微、喷灌施肥装置新技术的探讨[J].水利规划与设计.2005(03)
[14]宁明月.我国反垄断损害赔偿司法认定研究[D].苏州大学,经济法,2014,硕士.
[15]孙忠伟.安徽省土地财政状况及影响因素的研究[D].南京财经大学,财政学,2012,硕士.
[16]王天昊.股票价格与汇率的非线性因果关系研究[D].吉林大学,金融学,2014,硕士.
[17]李睿.自旋量子比特的退相干，调控和可控耦合[D].复旦大学,理论物理学,2013,博士.
[18]李欣.美国实施对华贸易救济的成因与效应分析[D].宁波大学,国际贸易学,2013,硕士.
[19]周源.Hadoop作业调度的研究与应用[D].兰州大学,计算机软件与理论,2013,硕士.
[20]陈悦.解读格非“江南三部曲”中的现代桃花源[D].吉林大学,中国现当代文学,2014,硕士.
[21]陈骥.企业级应用中软件复用技术的研究[D].西北工业大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[22]唐燕.基于磁耦合共振无线供电的汽车胎压监测系统[D].华中科技大学,微电子学与固体电子学,2013,硕士.
[23]何文霖.新科SVD330型超级VCD视盘机简析[J].电子天府.1999(01)
[24]费敏锐,陈伯时.专家模糊控制方法[J].控制与决策,1996,02:256-260+271.
[25]蒲书祥.基于粒子滤波的个人导航系统算法研究[D].厦门大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[26]胡红宇.Ad Hoc网络中的群组密钥协商协议研究[D].湖南大学,计算机科学与技术,2010,硕士.
[27]王兆永.肝癌细胞特异性环状结合肽的筛选及鉴定[D].吉林大学,外科学,2014,硕士.
[28]琚小琳.JL研究所仪器设备采购管理中的问题分析与对策研究[D].河北工业大学,工商管理,2013,硕士.
[29]王进,雷启能,周长春,顾仁勇.蕨菜袋装保脆保鲜工艺的研究[J].食品与发酵工业.2002(01)
[30]孙德谦.吲哚类生物碱(+)-Decursivine全合成和一些多氮化合物研究[D].中国科学技术大学,有机化学,2011,博士.
[31]商鹏.基于PCI总线的ISA-PCI转接卡的开发[D].西安电子科技大学,软件工程,2011,硕士.
[32]夏洪瑞.在GS-6410机上实现地震剖面彩色显示[J].石油地球物理勘探,1985,02:204-210.
[33]陈雪梅.家蚕核型多角体病毒ORF79基因（bm79）的结构和蛋白互作分析[D].西南大学,细胞生物学,2013,硕士.
[34]闫博.通癃软结汤治疗良性前列腺增生症临床观察[D].北京中医药大学,中医外科学,2014,硕士.
[35]钟林仁.渤海湾环境中多环芳烃及其代谢产物污染水平研究[D].河北师范大学,有机化学,2012,硕士.
[36]元林,李美清.思想政治教育网络传播过程管理的困境与破解研究[J].思想理论教育导刊,2010,06:80-84.
[37]刘建荣,张涛,王英瑞.BJP位置控制器传动间隙补偿方法[J].一重技术.2002(01)
[38]张文波.高中英语复习课自主学习学案的研究[D].山东师范大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[39]文超.基于故障录波数据的继电保护分析系统[D].湖南大学,电力系统及其自动化,2012,硕士.
[40]李红仙.西湖流场和浓度场对引水工程响应的数值模拟研究[D].浙江大学,2006.
[41]刘伊娜.下意识行为在产品设计中的运用研究[D].景德镇陶瓷学院,设计艺术学,2014,硕士.
[42]苑芳.提高我国私有制经济中劳动者报酬研究[D].南京财经大学,政治经济学,2012,硕士.
[43]代洪强.基于EtherCAT协议的高速工业以太网系统性能研究[D].哈尔滨工业大学,信息与通信工程,2013,硕士.
[44]孙贤.猪圆环病毒2型的流行病学调查与综合防控措施研究[D].南京农业大学,兽医,2012,硕士.
[45]梁国宝.隧道连续皮带机设计及动态分析研究[D].西南交通大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[46]刘引弟.基于单片机的鸡舍环境智能控制器的设计[D].内蒙古农业大学,农业工程,2013,硕士.
[47]李清斌,李怀远,赵志国.武钢1号高炉大修开炉操作实践[J].炼铁.2001(S2)
[48]盛小惠.陶瓷电子商务系统的分析与设计[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[49]杨杰,董全力,江兆潭,张杰.自旋轨道耦合作用对碳纳米管电子能带结构的影响[J].物理学报,2011,07:479-486.
[50]谈红卫.南京造币有限公司发展战略的研究[D].南京理工大学,工商管理,2013,硕士.