转染microRNA-330-5p对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

【摘要】目的研究miR-330-5p表达对肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力等生物学行为的影响,探讨miR-330-5p在肺癌发生发展中的作用。预测miR-330-5p的靶基因,揭示miR-33O-5p发挥作用的可能机制。方法分析不同迁移能力肺癌细胞系(低转移性肺癌细胞95C和高转移性肺癌细胞95D)miR-330-5p于miRNA表达谱芯片结果中的表达情况。应用多种靶基因预测软件(TargetScan、miRanda、miTarget和PicTar)预测microRNA靶基因。转染miR-330-5p类似物(mimics)至高转移性肺癌细胞(95D)、转染miR-330-5p抑制剂(inhibitor)至低转移性肺癌细胞(95C)中,应用CCK-8法、transwell小室法、划痕愈合实验检测miR-330-5p对肺癌细胞的增殖、侵袭迁移等生物学行为的影响。应用Westernblotting法检测miR-330-5p表达变化对肺癌细胞中的mTOR蛋白表达水平的影响。结果miRNA表达谱芯片结果显示,miR-330-5p在高转移性肺癌细胞95D中表达明显低于低转移性肺癌细胞95C。CCK-8法检测结果显示,转染miR-330-5pmimics的肺癌95D细胞增殖能力显著降低、而miR-330-5pinhibitor能使肺癌95C细胞的增殖能力明显增强。Transwell小室实验结果显示miR-330-5pmimics转染的95D细胞(mimic组)24h的侵袭穿膜细胞数明显低于对照组p=0.00,P<0.01),而miR-330-5pinhibitor转染的95C细胞24h的侵袭穿膜细胞数较对照组也有明显增加(P=0.00,P<0.01)；同样,上调miR-330-5p后的95D细胞的划痕修复率降低,而下调miR-330-5p可以明显提高95C细胞的划痕修复率。通过miRNA靶mRNA预测软件,我们发现mTORmRNA3’UTR与miR-330-5p5’端的种子序列存在互补关系,亦即：mTORmRNA可能是miR-330-5p的调控靶基因。通过westernblot证实在miR-330-5p转染的95D细胞中mTOR蛋白表达明显降低,而miR-330-5pinhibitor转染同样明显升高了mTOR蛋白表达水平。结论miR-330-5p在高转移的肺癌细胞株中表达显著降低。提高：miR-330-5p表达能够明显抑制肺癌细胞的增殖、侵袭与迁移，且mTOR可能是其重要的靶基因。该结果为研究肺癌分子转移机制的精确通路提供了一条新的依据,并为miR-330-5p以后可能成为新的治疗靶点提供了理论依据。
【作者】张晓敏；
【导师】陈清勇；
【作者基本信息】浙江中医药大学，内科学，2014，硕士
【关键词】miR-330-5p；mTOR；肺癌细胞；转移；抑制；

【参考文献】
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