五种药用植物内生真菌的分离纯化及其次生代谢产物生物活性研究

五种药用植物内生真菌的分离纯化及其次生代谢产物生物活性研究

作者:师大云端图书馆 时间:2016-07-27 分类:参考文献 喜欢:2354
师大云端图书馆

【摘要】近些年来的研究表明,药用植物内生真菌可以产生许多结构新颖的活性次级代谢物,并且已经成为发现新的具有天然活性物质的重要来源。因此,本论文选取五种药用植物作为材料,对其内生真菌、内生真菌次级代谢产物的生物活性以及化学成分等方面进行研究,研究内容和结果如下:1、运用组织块法,分别从药用植物荷叶(Nelumbonucifera)、雷公藤(Tripterygiumwilfordii)、钩藤(Uncariatomentosa)、止泻木(Holarrhenaantidysenterica)和大狼毒(Euphorbianematocypha)的植物组织中分离得到14株、12株、7株、5株、8株,共计46株内生真菌。对这46株内生真菌的发酵液和菌丝体进行提取,得到了发酵液乙酸乙酯萃取物和菌丝体乙醇提取物。2、运用酶标法,对内生真菌粗提物进行抗单胺氧化酶和抗乙酰胆碱酯酶活性的检测。抗单胺氧化酶活性显示,有24种内生真菌提取物具有单胺氧化酶抑制活性,在终浓度为167μg/mL下,抑制率在50%以上,其中有8种的抑制率在70%以上,以GT-7发酵液萃取物的抑酶活性最强,达92.53%。具有单胺氧化酶抑制活性的样品分别占各植物内生真菌总样品数的42.86%、58.33%、42.86%、40%、62.5%。抗乙酰胆碱酯酶活性显示,有2种内生真菌的提取物具有抑制乙酰胆碱酯酶活性,在终浓度为100μg/mL浓度下,其抑制率在50%以上,其中以ZXM-5发酵液萃取物的抑酶活性最强,达61.81%。3、运用多种现代色谱(硅胶柱色谱法,制备薄层色谱法,凝胶色谱,HPLC等)分离技术,对LGT-2、LGT-4、GT-5菌株发酵液的乙酸乙酯萃取物和LGT-4菌株菌丝体醇提物中的化合物进行分离纯化,并借助’H-NMR、13C-NMR、ESI-MS、HMBC、HSQC、1H-’HCOSY、NOESY、MS、IR等手段鉴定了23个化合物,分别被鉴定为:Citrinin(橘青霉素)(1)、4,6,8(14),22(23)-Tetraen-3-one-ergostane(4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷)(2)、2-Hydroxy-14-tricosenvicacid(2-羟基-14-二十三烯酸)(3)、Wortmannin(渥曼青霉素)(4)、Wortmannolone(5)、2,4-Dihydroxy-6-((R)-4-hydroxy-2-oxopentyl)-3-Methylbenzaldehyde(6)、(+)-BrefeldinA(布雷菲德菌素A,BFA)(7)、(22E,24R)-Ergosta-5,7,22-trien-3β-ol(8)、Epoxyvirone(9)、Secovironolide(10)、11-Desacetoxywortmannin-17β-ol(11)、Ergosta-7,22-dien-3(3,5a,6a-triol(cerevisterol)(12)、3-Dihydrovirone(13)、11-Desacetoxywortmannin(14)、Deacetylisowortmin(15)、Ergosterol(麦角甾醇)(16)、Campesterol(17)、Phenylalanine(苯丙氨酸)(18)、Physcion(大黄素甲醚)(19)、Chrysophanol(大黄酚)(20)、Rhein(大黄酸)、(21)Ergosterolperoxide(麦角甾醇过氧化物)(22)、Flufuran(23)。以上化合物中,化合物9、10为新化合物,其中10为virone类呋喃甾体在B环发生裂环重排后得到的一个新骨架化合物。4、对分离出来的23个化合物进行抗单胺氧化酶和抗乙酰胆碱酯酶活性检测,结果表明,化合物4、10、23显示了中等强度的单胺氧化酶抑制活性,在终浓度167μg/mL时其抑制率分别为78.40%、83.55%、88.67%,其IC50值分别为91.22μg/mL、40.17μg/mL、29.19μg/mL。化合物1显示了中等强度的乙酰胆碱酯酶抑制活性,在终浓度167μg/mL时其抑制率为56.37%,IC50值为147.74μg/mL。5、运用分子生物学手段,对菌株LGT-2、LGT-4和菌株GT-5的ITS区序列分析,在Blast上与其同源性较高的ITSrDNA序列进行比对,通过聚类分析,并结合菌落形态颜色及菌丝体、分生孢子梗的观察,鉴定菌株LGT-2和GT-5均为曲霉属(Aspergillussp.)真菌,菌株LGT-4为裸节菌属(Talaromycessp.)真菌。将菌株ITS序列提交到NCBI(TheNationalCenterforBiotechnologyInformation)数据库并收录,菌株LGT-2、LGT-4、GT-5录序列号分别为KF934203、KF850714、KF934202。
【作者】丁海娥;
【导师】杨中铎;
【作者基本信息】兰州理工大学,微生物与生化药学,2014,硕士
【关键词】内生真菌;次级代谢产物;分子生物学鉴定;生物活性;

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