拟南芥ABI5基因启动子的克隆与遗传转化载体构建

拟南芥ABI5基因启动子的克隆与遗传转化载体构建

作者:师大云端图书馆 时间:2016-07-22 分类:参考文献 喜欢:2086
师大云端图书馆

【摘要】植物启动子序列含有多种顺势作用元件,能在转录水平上参与调控下游基因相应基因的表达过程,从而使植物能对外界环境做出响应的调节,分析植物某一基因的启动子,能为其下游基因激活表达的机理提供相应的实验依据。脱落酸(abscisicacid,ABA)是植物体内一种重要的激素,它不仅参与植物体内多种生理过程,而且能调控植物细胞内的新陈代谢,以此来调节植物适应环境。ABI5(ABAinsensitive5)是一个在种子和营养器官中响应ABA信号的亮氨酸拉链蛋白。它能激活一系列受ABA调控的基因的表达,在ABA信号传递、相关基因表达以及胚胎发育等方面起着重要的作用,以此来调节植物生长发育以及适应各种变化的环境。由于拟南芥全基因组已经测序完成,本论文直接从NCBI基因数据库中获得拟南芥ABI5启动子序列。通过对该段启动子序列进行生物信息学分析,发现该段序列中含有大量可能与根和花定位相关的序列以及大量响应ABA信号、应答干旱、盐碱和光信号的顺势作用元件,这些可能的序列会对ABI5基因的表达起到相应的调控作用。而且在转录起始位点之前的不翻译区有一段782bp的内含子序列,可能会对启动子的转录活性造成影响。为了全面了解该启动子序列调控下游基因表达的时空特异性,我们设计了一对能特异扩增出包含整个ABI5基因启动子区以及不翻译区(包括内含子)的引物,然后通过常规PCR扩增得到了ABI5转录起始位点(ATG)之前的1820bp片段,并进行测序检验。随后将这段序列与经过双酶切的pCAMBIA1031质粒构建成ABI5promter::GUS重组质粒。最后通过根瘤农杆菌介导的花序浸染法,对拟南芥进行了遗传转化,转基因拟南芥正在进一步筛选鉴定中。
【作者】党智笙;
【导师】马建忠;
【作者基本信息】兰州理工大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士
【关键词】拟南芥;启动子克隆;ABI5;花序浸染法;

【参考文献】
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