重庆市婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的检测及表型、基因型特征的研究

【摘要】1929年的一起婴儿败血症病例中首次分离出一种能产生黄色色素的致病菌,随后这种以日本微生物学家RiichiSakazakii命名的革兰氏阴性肠杆菌——阪崎肠杆菌便进入人们的视野,引发世界性关注。目前,阪崎肠杆菌已被国际食品微生物标准委员会(InternationalCommissionforMicrobiologicalSpecificationsforFoods,ICMSF)列入“对特定人群产生严重的生命危害、或产生慢性后遗症”的微生物,与肉毒梭菌(Clostridiumbotalinum)的A、B型毒素、单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)等具有同等危害。一旦感染该菌,会对婴幼儿的健康造成严重危害,可引发坏死性小肠结肠炎、菌血症和新生儿脑膜炎等疾病,甚至可能留下严重的神经系统后遗症,死亡率高达50%。随着对婴幼儿食品安全的广泛关注和高度重视,自2010年起,重庆市婴幼儿食品安全风险监测增设了对阪崎肠杆菌的定性检测项目,以确保婴幼儿食品的安全性。本文以重庆市2012～2013年市售婴幼儿食品为监测对象,参照国标方法对婴幼儿食品中的阪崎肠杆菌进行检测。结合API20E、全自动生化分析、药敏试验(KB法)、16SrRNAPCR技术和PFGE分型技术对17株阪崎肠杆菌(包括16株婴幼儿食品分离株和1株标准菌株)进行表型和基因型特征的全面分析。主要研究结果如下：(1)2012年200份样本中共检出7株阪崎肠杆菌,检出率为3.5%；2013年300份样本中共检出9株阪崎肠杆菌,检出率为3.0%。结合2010、2011年有关数据资料,婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的检出率逐年上升,至2013年略有下降。各类型婴幼儿食品中,营养米粉中检出的阪崎肠杆菌数量最多,污染较为严重,安全状况较差,其次为营养面条,且其检出率最高。(2)17株阪崎肠杆菌经API20E生化鉴定分为4种生化谱：I型(3305373),ODC+VP+GEL+INO+;Ⅱ型(3205373),ODC-VP+GEL+INO+;Ⅲ型(3304373),ODC+VP-GEL+INCH;IV(3305173),ODC+VP+GEL+INO-.VITEK2结果显示17株阪崎肠杆菌均具有95%以上的确定性,两种生化分析的结果基本一致。(3)ES.10温度耐受性最强,最高耐受温度高达70℃；其次为ES.15,最高耐受温度为65℃。温度耐受性试验结果提示为保证婴幼儿食品中污染的阪崎肠杆菌完全灭活至少需55℃加热30min以上,或60℃5min以上,或65℃1min以上,或70℃15s以上,75℃作用基本可以保证所有阪崎肠杆菌立即灭活。(4)试验菌株对碱的耐受性稍强于对酸的耐受性。标准菌株ATCC29544对酸的耐受性最强,pH1.0的条件下仍具有一定的活性,ES.09、ES.10和ES.16对酸的耐受性最差,经pH2.0的酸处理即可失活；标准菌株ATCC29544、ES.05和ES.06对碱的耐受性最强,pH13.0强碱处理后仍可存活,ES.07、ES.09、ES.16对碱的耐受性最差,pH12.0短时间作用即可失活。(5)17株阪崎肠杆菌对抗生素VA、PE、OXA均表现为耐药,对CXM等15种抗生素均表现为敏感。共可分为五种耐药谱：Ⅰ型耐药谱为VA-PEN-OXA,共1株；Ⅱ型(NA中介AMP敏感)耐药谱为VA-PEN-OXA-KF,共1株；Ⅲ型(NA中介AMP中介)耐药谱为VA-PEN-OXA-KF,共1株；Ⅳ型(NA敏感AMP中介)耐药谱为VA-PEN-OXA-KF,共3株；Ⅴ型(NA敏感AMP敏感)耐药谱为VA-PEN-OXA-KF,共11株。(6)通过BLAST搜索比对,16株阪崎肠杆菌食品分离株分别与12株标准菌株具有较高同源相似性,相似性均高达99%，可确定为阪崎肠杆菌。分离株的同源性相似百分比介于100%～96.01%,ES.07和ES.08的相似性最高为100%,ES.12和ES.16的相似性最低为96.01%。构建系统发育树将阪崎肠杆菌食品分离株和模式菌株分为4个基因群,其中ES.05独成一个分支,ES.02和ES.04成另一个分支,而ES.12、ES.13和ES.14与模式菌株可归为一个基因群,其余食品分离株共同组成一个基因群。(7)17株阪崎肠杆菌试验菌株经限制性内切酶XbaⅠ消化后共表现为13种PFGE条带模式,酶切图谱的条数范围为14～19条,酶切条带分子量大约在10～1200Kb范围内,多集中于30～700Kb。聚类分析得XbaⅠ酶切13株可分型阪崎肠杆菌间的相似度介于28.6%～85.7%。其中,ES.07与ES.10的相似性最高,ES.01与ES.12的相似度最低。经限制性内切酶SpeⅠ消化后亦获得13种PFGE条带模式,酶切图谱的条数范围为17～24条,酶切条带分子量大约在10～1200Kb范围内,多集中于30～400Kb。聚类分析得SpeⅠ酶切13株可分型阪崎肠杆菌间的相似度介于43.8%～87.2%。其中,ES.04与ES.08的相似性最高,ES.11与ES.12的相似度最低。
【作者】姜琛璐；
【导师】李林；
【作者基本信息】西南大学，食品科学，2014，硕士
【关键词】婴幼儿食品；阪崎肠杆菌；表型特征；基因型特征；

【参考文献】
[1]袁带秀.火鸡组织滴虫病及其虫体的体外培养的研究[D].湖南农业大学,临床兽医学,2004,硕士.
[2]岳根田.基于异质结和导电聚合物对电极的染料敏化太阳能电池研究[D].华侨大学,2013.
[3]夏火松.多Agent分布式的市场营销知识获取结构[J].计算机工程,2003,07:178-180.
[4]张洁.天线伺服系统结构与控制集成设计[D].西安电子科技大学,机械电子工程,2012,硕士.
[5]刘建国.高含水期油田注采结构调整研究[D].成都理工大学,油气田开发工程,2013,硕士.
[6]陈菊红.“国家—社会”视野下的流动人口自我管理研究[D].中共中央党校,科学社会主义,2014,博士.
[7]钟铮.基于BP神经网络的SBR污水测控技术研究[D].南昌大学,测试计量技术及仪器,2014,硕士.
[8]施卫明.基于ARM+Linux的指纹门禁系统设计与实现[D].浙江工业大学,2012.
[9]曹心宝.1943—1946年浙江大学在遵义的学生爱国民主运动述评[J].学理论,2014,24:96-98.
[10]盖博洋.企业微博营销：现实与可能[D].吉林大学,传播学,2014,硕士.
[11]王彪,孙国梁.爆炸法消除应力技术在压力容器制造中的应用[J].石油化工设备.1993(03)
[12]顾光斗.土工合成材料加筋黄土力学性能试验研究[D].武汉理工大学,道路与铁道工程,2013,硕士.
[13]刘勇.独立董事制度对公司治理结构的影响研究[D].北京交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[14]王冰清.A Case Study of the English Version of Moyan’s Honggaoliang Jiazu: a Functionalist Approach[D].西安外国语大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[15]靳琳琳.黑社会性质组织犯罪研究[D].河南大学,刑法学,2004,硕士.
[16]朱广毓.基于矩阵掩模的结构化LDPC码构造研究[D].西安电子科技大学,计算机系统结构,2011,硕士.
[17]张帆.钻井风险管理知识集成与智能决策研究[D].西安石油大学,油气井工程,2012,硕士.
[18]原红丽.基于D-S证据理论与Markov模型的安全仪表系统可靠性研究[D].西南大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[19]国家统计局服务业调查中心课题组.企业调查与信息管理系统研究[J].统计研究,2005,10:14-18.
[20]吴枫,仲妍,吴泉源.基于时间衰减模型的数据流频繁模式挖掘[J].自动化学报,2010,05:674-684.
[21]曹文海.凤凰山隧道浅埋软弱围岩与支护结构的相互作用研究[D].长安大学,岩土工程,2013,硕士.
[22]景琳浪.混合动力重型商用车动力系统建模与仿真[D].长安大学,车辆工程（专业学位）,2013,硕士.
[23]罗智燕.杰拉尔德之死的自身心理学研究[D].湖南师范大学,英语语言文学,2013,硕士.
[24]李新凯.我国利用外商直接投资的产业与区域研究[D].首都经济贸易大学,产业经济学,2004,硕士.
[25]卢鹤.员工满意度的实证研究[D].河北经贸大学,行政管理,2012,硕士.
[26]王宏波.KJ公司员工绩效管理方案优化设计[D].河北工业大学,工商管理,2013,硕士.
[27]王玉洁.基于物理层加密的调制方式及数据保护算法[D].西北大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[28]王磊.基于FPGA+LabVIEW的1553B总线监测系统的设计[D].成都理工大学,电路与系统,2013,硕士.
[29]畅会珏.中国银行证券混业经营制度变迁研究[D].华东师范大学,金融学,2002,硕士.
[30]张瑞雪.配电网三相潮流计算和网络重构算法的研究[D].北京交通大学,2013.
[31]魏朝颖.三类生态模型解的渐近性态及一类脉冲微分方程的振动性[D].陕西师范大学,应用数学,2004,硕士.
[32]王静.硬脆材料YG3和TN85的超精密磨削工艺研究[D].湖南大学,机械制造及其自动化,2012,硕士.
[33]额尔敦其木格.巴金在俄罗斯的传播与接受研究[D].内蒙古大学,中国现当代文学,2014,硕士.
[34]李杰.上市公司高管薪酬与企业绩效敏感性研究[D].海南大学,企业管理,2014,硕士.
[35]苗晓鹏.谐振接地系统单相接地故障残流有功分量补偿的研究[D].中国矿业大学,电力系统及其自动化,2014,硕士.
[36]高景萍.高速公路动态收费对物流车辆出行选择影响研究[D].北京交通大学,物流工程（专业学位）,2013,硕士.
[37]李阳,任鹏刚,许勐璠.隔离结构石墨烯-多壁碳纳米管/超高分子量聚乙烯导电复合材料阻温特性[J].化工新型材料,2015,03:58-60+99.
[38]万敏.收入分配与个人所得税政策研究[D].贵州财经大学,财政学,2013,硕士.
[39]徐广巍.双城堡旗人群体研究[D].黑龙江大学,中国古代史,2012,硕士.
[40]李志军.基于Delta变换器的UPS电源及其控制研究—串联部分[D].燕山大学,电气工程,2014,硕士.
[41]李郑发.形状记忆聚合物及其复合结构热力学性质研究[D].北京交通大学,2011.
[42]马捷.联机手写签名识别问题中降低误拒率的研究[D].吉林大学,软件工程,2004,硕士.
[43]方建平.肿瘤多药耐药逆转制剂的筛选和紫草素抗MDR肿瘤活性的研究[D].浙江大学,生物化工,2004,硕士.
[44]于英政.QR二维码相关技术的研究[D].北京交通大学,2014.
[45]宋陆军.白钦先新金融观研究[D].辽宁大学,金融学,2014,博士.
[46]李西娟.重症监护室患者ICU综合征发生的相关因素分析及护理对策[D].吉林大学,护理学,2014,硕士.
[47]沈财余.面向地质目标的地震采集设计优化方法[J].石油地球物理勘探,2008,05:493-507+481.
[48]杨荣光.建筑工程项目质量管理分析[D].西南交通大学,工商管理,2013,硕士.
[49]皮鹏.智能搜索引擎系统的研究[D].哈尔滨工程大学,2002.
[50]方吉六.哈尔滨电表仪器厂电度表产品概况及其发展[J].电测与仪表.1985(01)