首乌僵芪汤对胰岛素抵抗的PCOS临床观察及大鼠IRS-1、PI-3KP85α亚基表达的影响

【摘要】目的本研究采用临床方首乌僵芪汤治疗肾虚痰瘀型多囊卵巢综合征(polycysticovarysyndrome,PCOS)伴胰岛素抵抗(insulinresistance,IR)患者,客观评价患者治疗前后的临床症状、生殖激素水平、糖代谢指标的变化,并用实验的方法观察首乌僵芪汤对PCOS-IR大鼠肝脏、卵巢组织中胰岛素受体底物-1(insulinreceptorsubstrate-1,IRS-1)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide3-kinase,PI-3K)p85α亚基的mRNA及蛋白表达的影响,以及对胰岛素受体底物-1丝氨酸307(insulinreceptorsubstrate-1Ser307,IRS-1Ser307)磷酸化蛋白表达的影响。探讨首乌僵芪汤对肾虚痰瘀型PCOS-IR患者的疗效和机制,为首乌僵芪汤治疗PCOS-IR提供实验依据。方法1.临床部分收集符合本研究所制定标准病例99例,按随机的原则分为对照组(西药组)及观察组(对照组的基础上,加用首乌僵芪汤治疗),其中对照52例,观察组47例。测量患者的身高、体重、血清FSH、LH、T、FBG、FINS、HOMA指数、TG、TC,记录患者的月经情况、多毛及痤疮等临床症状,以及治疗后3个月内上述症状的改善情况,不孕患者同时观察受孕情况。2.实验部分使用硫酸普拉睾酮钠及HCG并联合高脂饮食,建立PCOS-IR模型大鼠。将成模大鼠随机分为模型组及治疗组,另设空白对照组。治疗组大鼠以首乌僵芪汤(高剂量组、中剂量组、低剂量组)及二甲双胍进行干预,正常对照组灌服等容量双蒸水,治疗组和模型组在治疗期间继续给造模药刺激并喂以高脂饲料,正常对照组喂以普通饲料,连续21天。干预第18天尾静脉采血行IGTT,血糖仪测空腹血糖。IGTT结束后3天将所有大鼠称重、采血,行放射免疫法检测血清FSH、LH、T,ELISA法测空腹胰岛素。后将大鼠处死、剖腹,取肝脏、双测卵巢及其周围脂肪组织,观察卵巢大体解剖情况,称取双侧卵巢及其周围脂肪湿重,光镜下观察卵巢组织形态。采用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)法检测各组大鼠肝脏、卵巢组织中IRS-1/PI3Kp85α亚基mRNA的表达,蛋白免疫印迹(Westernblotting)法检测各组大鼠肝脏、卵巢组织中IRS-1/IRS-1Ser307/PI3Kp85α亚基蛋白的表达。结果1.在改善中医症候方面,治疗组在改善患者月经不调、腰膝酸软、头晕耳鸣、神疲乏力、胸腹痞满、口腻痰多、小腹胀痛等症状疗效明显优于对照组(P<0.05)；在改善体征方面,治疗组及对照组在降低BMI及治疗多毛方面疗效相当(P>0.05);在治疗痤疮方面,治疗组优于对照组(P<0.01)；在不孕症患者妊娠率方面,治疗组疗效优于对照组(P<0.05)；治疗组临床总有效率明显优于对照组(P<0.05)；治疗组在降低血清LH值、LH/FSH比值、T值、FINS、HOMA指数方面,疗效均优于对照组(P<0.05)；两组在降低空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇方面疗效相当(P>0.05)。2.卵巢大体解剖观察结果：正常对照组大鼠卵巢色泽较红,模型对照组卵巢表面较苍白,体积增大。模型对照组卵巢重量与正常对照组比较显著增加(P<0.05)。3.卵巢光镜观察结果：正常对照组大鼠卵巢组织可见不同发育阶段的卵泡及多个黄体形成,成熟卵泡内颗粒细胞层排列整齐；模型对照组卵巢表面可见多个囊状扩张的卵泡,卵泡内卵母细胞或放射冠消失,颗粒细胞层数减少,较少有黄体形成。用药后大鼠卵巢组织囊性扩张卵泡减少,颗粒细胞层增厚,黄体增多,其中首乌僵芪汤高剂量组及二甲双胍组尤为明显。4.首乌僵芪汤高剂量组明显降低PCOS-IR大鼠血清T、FBG、FINS及HOMA指数(P<0.01)。5.模型组IRS-1、PI-3Kp85a亚基在肝脏、卵巢组织中mRNA及蛋白表达明显低于正常组(均P<0.01),治疗组中首乌僵芪汤高剂量组及二甲双胍组均显著高于模型组(P<0.01)。6.模型组IRS-1Ser307蛋白在肝脏、卵巢组织中的表达均明显高于正常组,治疗组中首乌僵芪汤高剂量组及二甲双胍组均显著低于模型组(P<0.01)。结论1.首乌僵芪汤在临床上能明显改善多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的症状,改善生殖激素和糖代谢水平,并提高妊娠率。2.本研究成功建立了硫酸普拉睾酮钠及HCG联合高脂饮食诱导的PCOS-IR大鼠病理模型,并从卵巢形态学、内分泌学等方面对该模型进行了研究。研究结果表明其病理形态和生殖激素、糖代谢指标等均与人类PCOS-IR非常相似,故认为本模型目前是一种比较理想的研究PCOS-IR的动物模型。3.实验发现首乌僵芪汤高剂量组能改善PCOS-IR大鼠卵巢多囊样变及排卵障碍,改善其生殖激素及糖代谢水平。首乌僵芪汤高剂量组可上调PCOS-IR大鼠肝脏、卵巢组织中IRS-1及PI3Kp85αmRNA和蛋白水平,也可下调其IRS-1Ser307磷酸化蛋白水平,改善胰岛素信号转导,这可能是其改善PCOS-IR的机制之一。
【作者】王利红；
【导师】王旭；
【作者基本信息】南京中医药大学，中西医结合临床，2013，博士
【关键词】多囊卵巢综合征；胰岛素抵抗；肾虚痰瘀型；首乌僵芪汤；

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