芷辛方治疗癌痛及TLR-NF-Kappa B信号通路的机制研究

芷辛方治疗癌痛及TLR-NF-Kappa B信号通路的机制研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-09-04 分类:期刊论文 喜欢:2363
师大云端图书馆

【摘要】癌痛是临床晚期癌症患者最常见的症状之一,一半以上的癌症患者会经历剧烈且很难控制的疼痛,虽然吗啡等阿片类药物对癌痛的疗效显著,但是,伴随成瘾性、胃肠道反应等副作用。因此,缓解疼痛是临床医生面临的最大的难题。癌痛是一个复杂的病理学过程,同时也是临床上的一大难题。癌痛属于慢性疼痛的范畴,与炎症痛和神经病理性疼痛机制相比,有相似之处,也有其独特而复杂之处。所以建立合适的动物模型对于深入的研究癌痛机制就显得非常重要。自1999年Schwei首次报道了小鼠骨癌痛模型以来,其它癌痛动物模型也相继产生,这将对癌痛机制的深入探讨、寻找缓解癌痛新方法、筛选有效的镇痛药物提供极为有效的途径。为了给临床上癌痛的治疗提供更可靠、有效的方法,研究者通过构建适当的骨癌痛动物模型进行对癌痛的机制和治疗的基础研究。中药镇痛是祖国医学的伟大智慧结晶,因作用广、毒副作用小并而且经济简便而普遍被患者接受。国内外大量研究表明,中药对急性或者慢性疼痛都能起到一定的镇痛作用。临床实践表明,中药用于癌痛病人,不仅能够镇痛,还能通过调节癌症患者的免疫功能,从而达到提高癌症患者生活质量的治疗目的。但是长期以来,由于缺乏合适的癌痛实验动物模型,阻碍了对癌痛机理的研究,同时也影响了新型有效的癌痛治疗方法的研究,包括一些癌痛新药及针刺等非药物治疗的方法。相关实验数据表明,神经胶质细胞与慢性疼痛密切相关。胶质细胞(星形胶质细胞、小胶质细胞)在主要的痛觉传递物质中起着重要的作用。此外,胶质细胞释放出的致炎细胞因子(包括TNF-α、IL-1β、IL-6等)都是引起痛觉传递神经元敏化的主要因素,促进中枢敏化的形成。由此可见,胶质细胞在痛觉的初级传入和发展过程中至关重要,以及在痛觉调节特别是疼痛中枢敏化的形成与维持中举足轻重。芷辛方是河南省中医药研究院著名研究员张海岑50多年的临床经验方,芷辛方由白芷、细辛、川芎等药物组成,具有温经通络、活血化痹、祛风止痛的功效。经临床研究证实,芷辛方用于治疗包括骨癌痛在内的多种痛症,效果显著。综上所示,本论文开展以下研究:1.参照以往文献报道建立癌痛动物模型以寻找有效缓解疼痛的方法,并进一步探讨芷辛方的镇痛作用。通过对模型大鼠体重、胫骨病理、胫骨X光片、后肢热痛觉过敏、机械性痛觉超敏(触诱发痛)以及自发性疼痛的研究对模型进行综合评估。2.观察癌痛时大鼠脊髓内胶质细胞以及相关机制作用下指标的变化。1)用免疫组化对各组大鼠胫骨癌痛时脊髓星型胶质细胞标志蛋白GFAP(GlialFibrillaryAcidicProtein,胶质纤维酸性蛋白)进行检测;2)用WesternBlot对各组大鼠胫骨癌痛时脊髓NF-κB(Nuclearfactor-kappaB,核因子κB)和SIGIRR进行检测;3)用RT-PCR对脊髓小胶质细胞标志性蛋白CDllb和Toll受体2(TLR2)及4(TLR4)进行检测;4)用酶联免疫吸附法(ELISA)对各组大鼠胫骨癌痛时致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6进行检测。结果如下:1.骨癌痛模型的建立通过对大鼠左胫骨内接种含有3×103个Walker256嫁接的腹水瘤细胞液造模,实验结果所示,骨癌痛模型组与空白组体重显示非常显著性差异,且骨癌痛模型组的体重增加迟缓甚至呈下降趋势(P<0.01)。骨癌痛模型组比空白组动痛大鼠自发性运动呈现出非常显著性差异,且明显呈上升趋势(P<0.01)。和空白组相比较,机械痛觉超敏骨癌痛模型组与空白组相比呈现出非常显著性差异,且明显的下降趋势(P<0.01)。和空白组相比较,大鼠模型组手术侧胫骨的X线影像以及HE染色显示骨结构发生明显改变和破坏。2.大鼠胫骨癌痛时脊髓背角胶质细胞功能活动变化实验分为空白对照组、骨癌痛模型组、西药对照组(盐酸曲马多,10μg·kg-1)、中药对照组(五灵止痛胶囊,60『g·kg-1)、高剂量芷辛方治疗组、正常剂量芷辛方治疗组、低剂量芷辛方治疗组(芷辛方高、中、低水煎浓缩制剂分别为9g·kg-1、4.5g·kg-1、2.25g·kg-1生药/只),并于造模14d后开始灌胃,每日一次,连续7d。第21d,取各组大鼠血清、手术侧胫骨及其脊髓腰膨大段(L4-L6),并对其组织进行免疫组织化学、WesternBlot、RT-PCR等形态学及分子生物学技术检测。1)免疫组化检测骨癌痛模型组的髓内星形胶质细胞的标记蛋白GFAP,呈现明显升高,且明显多于空白组、芷辛正常剂量组和芷辛高剂量组。骨癌痛发生时,星形胶质细胞增生肥大,芷辛方对其具有抑制镇痛作用。2)PCR检测小胶质细胞标志性蛋白CD11b,骨癌痛模型组的CD11bmRNA明显高于芷辛正常剂量和芷辛高剂量(P<0.01)。表明骨癌痛时,小胶质细胞表现为增殖活化,芷辛方对其有抑制镇痛的作用。3)芷辛方干预治疗的骨癌痛组的中枢神经系统免疫活性重要因子TLR2、TLR4mRNA与骨癌痛模型组出现显著性差异(P<0.05)。骨癌痛模型组的NF-「B/GAPDH的蛋白水平与正常组和芷辛高剂量组的表达出现显著性差异(Y<0.05)。结果显示,中枢疼痛TLR-NF-κB信息通路被激活,芷辛方通过对TLR的抑制从而达到对其下游通路的抑制和治疗作用,进而达到止痛的效果。4)骨癌痛模型组髓内的SIGIRR(SingleIgIL-1-relatedreceptor,单一免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白)蛋白表达与芷辛高剂量组、芷辛正常剂量组的表达出现非常显著性差异(P<0.01),这与NF-κB的结果相反。实验发现,芷辛高剂量组的表达高于空白组,而芷辛正常剂量组的表达与西药组接近。提示着芷辛方通过对SIGIRR的活化从而达到对NF-κB的抑制作用,这可能是芷辛方降低和治疗癌痛的机制之一。5)大鼠胫骨癌痛时致炎因子TNF-α(TumorNecrosisFactor-α,肿瘤坏死因子-α)、IL-1β(Interleukin-1beta,白细胞介素-1beta)、IL-6(Interleukin-6,白细胞介素-6)的表达变化芷辛方高剂量治疗组、空白组的IL-1β表达低于骨癌痛模型组,存在非常显著性差异(P<0.01),而芷辛方正常剂量治疗组的IL-1β表达与骨癌痛模型组,存在明显的差异(P<0.05)。不仅如此,芷辛方高剂量治疗组、空白组的IL-6、TNF-α表达低于骨癌痛模型组,存在非常显著性差异(P<0.01);芷辛方正常剂量治疗组的的IL-6与骨癌痛模型组存在明显的差异(P<0.05)。结论:骨癌痛发生时,脊髓水平胶质细胞的增殖活化与TLR-NF-κB通道的激活是致痛机制之一;与此同时,SIGIRR表达的降低可能与骨癌痛的发生机制相关。芷辛方具有镇痛作用,通过对SIGIRR的活化增生,降低和抑制脊髓水平胶质细胞的增殖活化以及TLR-NF-κB信号通路的激活可能是其机制之一。
【作者】张斌;
【导师】周春祥;
【作者基本信息】南京中医药大学,中医临床基础,2014,博士
【关键词】骨癌痛;芷辛方;胶质原纤维酸性蛋白;星形胶质细胞;小胶质细胞;Toll样受体;核因子κB;SIGIRR;

【参考文献】
[1]王丽晖.血镁水平与2型糖尿病及糖尿病肾病相关性研究[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[2]李志辉.公路建设项目造价管理成熟度模型研究[D].重庆交通大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[3]卢悦.从C-R-A模式角度分析言语幽默[D].中南民族大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[4]张微.非耦合、弱耦合正倒向随机微分方程的高阶数值方法及误差估计[D].山东大学,概率论与数理统计,2014,博士.
[5]白杰.φ850mm轧辊断裂分析[J].钢铁.2003(01)
[6]李阳.人本主义心理咨询理论在高校思想政治教育中的运用[D].吉林大学,思想政治教育,2013,硕士.
[7]杨朝辉,杨秀军,汪雪林,佟庆彬,RennoDavid.容积减影成像计算机自动化技术与实现[J].现代生物医学进展,2014,09:1751-1755.
[8]钟慧.中国保险业寿险营销员管理模式研究[D].云南大学,工商管理,2012,硕士.
[9]贾林滋.论《鹿鼎记》英译本中的变译现象[D].河北大学,英语语言文学,2014,硕士.
[10]王研.新视角下的我国住宿业上市公司业绩评价研究[D].苏州大学,旅游管理,2014,硕士.
[11]胡如雪,储向峰,白林山,董永平.水热法制备石墨烯-SnO_2复合材料的甲醛与乙醇敏感性能的研究[J].安徽工业大学学报(自然科学版),2014,04:384-389+404.
[12]张兴儒.PYN透明电光陶瓷光学特性及光放大机制的研究[D].哈尔滨工业大学,光学,2013,硕士.
[13]马帅.基于浮动圆锥法的三道庄露天矿境界优化[D].西安建筑科技大学,采矿工程,2013,硕士.
[14]高明辉.国有商业银行监管问题研究[D].吉林大学,公共管理,2004,硕士.
[15]杨凝.认知视阈下《围城》的概念隐喻及其英译研究[D].浙江财经学院,英语语言文学,2012,硕士.
[16]赵纪青.商业银行社会责任评价指标体系探讨[D].华东理工大学,会计(专业学位),2014,硕士.
[17]申宁.基于软件体系结构思想的Web服务组合建模工具设计与实现[D].北方工业大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[18]朱秀亮.对蒙牛与伊利网络公关案中水军现象的法律思考[D].兰州大学,行政法(专业学位),2013,硕士.
[19]苍松.求恩巡礼骚乱研究[D].东北师范大学,世界史,2014,博士.
[20]陈友三.大学生创新实践管理WEB平台实现与研究[D].华南理工大学,计算机技术,2012,硕士.
[21]陈雯霆.允许原则—恩格尔哈特生命伦理学思想研究[D].湖北大学,伦理学,2012,硕士.
[22]张天佐.白宫发言人新闻发布会外交辞令中语言模糊现象的研究—礼貌及合作原则视角分析[D].西南交通大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[23]李秀婷.学校社会工作视角下的留守儿童厌学分析[D].内蒙古师范大学,社会工作(专业学位),2013,硕士.
[24]邹心遥,姚若河.小子样统计理论及IC可靠性评估[J].控制与决策,2008,03:241-245+250.
[25]谢从华,沈钧毅,宋余庆,常晋义.一种图像数据库聚类与归类方法研究[J].控制与决策,2008,06:701-704.
[26]王晋,李德全,冯登国.一种基于Agent的自适应的分布式入侵检测系统[J].计算机研究与发展,2005,11:1934-1939.
[27]黄红梅.兰考县政府在市场管理工作中存在的问题研究[D].郑州大学,公共管理(专业学位),2013,硕士.
[28]谭芳.船舶动力定位系统建模与自适应模糊控制[D].广东工业大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[29]张士喜.论何其芳诗歌的意象艺术[D].华中师范大学,中国现当代文学,2003,硕士.
[30]朱路雨.共生菌Wolbachia和Cardinium对中国截形叶螨和皮氏叶螨生殖调控作用的研究[D].南京农业大学,农业昆虫与害虫防治,2012,硕士.
[31]张笑星.PPTL模型检测器的改进及应用[D].西安电子科技大学,计算机软件与理论,2011,硕士.
[32]修鑫鑫.茶多酚对紫外线诱导大鼠晶状体上皮细胞中Caveolin-1、MMP-2表达的影响[D].辽宁医学院,眼科学,2012,硕士.
[33]熊志强.医院信息化盛宴中的隐忧与对策[J].现代医学仪器与应用.2006(03)
[34]白雪.语言文化学视角下的俄语数字及其语义阐释[D].沈阳师范大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[35]胡志超.加强荞麦脱壳加工设备研究开发促进荞麦加工产业化发展[J].中国农机化.2004(03)
[36]秦铭雪.高档饭店品牌体验、品牌关系对品牌忠诚的影响研究[D].浙江大学,2010.
[37]赵熙儒.壳聚糖修饰的羟基磷灰石纳米粒载体介导BMP-2转染成骨细胞及对其增殖、分化的影响[D].佳木斯大学,口腔临床医学,2012,硕士.
[38]沈有信,刘文耀,崔建武.滇中喀斯特森林土壤种子库的种-面积关系[J].植物生态学报,2007,01:50-55.
[39]马宇洁.金融发展、FDI与经济增长关系研究[D].吉林大学,国际贸易学,2013,硕士.
[40]陈洪亮,王树林,夏立珍.石墨烯-氧化锌纳米棒复合材料的超声法制备及其光催化性能[J].功能材料,2014,06:6097-6101.
[41]喻昊.同时性结直肠癌肝转移的临床病理学特点与预后因素研究及Twist2在结直肠癌中的表达与预后价值研究[D].第二军医大学,外科学(专业学位),2013,硕士.
[42]周桦.电梯PLC控制系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程(专业学位),2012,硕士.
[43]封常秀.论幼儿教师实践智慧的生成[D].山东师范大学,学前教育学,2013,硕士.
[44]陈聪慧.混合体细胞滋养层对牛IVF胚胎培养的影响[D].河南科技大学,农业推广,2013,硕士.
[45]张恋,李忠水,黄小妹,叶灵婷,林深.Pt/PEI-GN/PW_(12)_n复合膜的制备及其对甲醇氧化的电催化性能[J].功能材料,2014,07:7084-7088.
[46]买买提江玉山.基于C++的人脸识别系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2011,硕士.
[47]任彬.益气补肾通络散结法治疗慢性肾小球肾炎30例临床观察[D].北京中医药大学,中医内科学,2014,硕士.
[48]翟孟源.基于时序NDVI的长江中下游冬闲田监测方法[D].南京农业大学,土壤学,2012,硕士.
[49]沈奇真.PVA/钢混杂纤维增强水泥混凝土力学性能研究[D].长安大学,材料学,2013,硕士.
[50]李睿.基于GIS与WSN技术的沼液自动灌溉系统[D].湖南师范大学,软件理论,2013,硕士.

相关推荐
更多