低强度聚焦超声联合载阿霉素微泡—微球复合体靶向治疗兔VX2肝癌的实验研究

【摘要】第一部分载阿霉素微泡-微球复合体的制备及性能检测目的制备一种载阿霉素微泡-微球复合体（ADM-NMCs）并测定其一般特性。方法采用双乳化法制备载阿霉素PLGA纳米微球（ADM-NPs），并观察其形态，检测其粒径分布范围，电位，包封率和载药量等性质；采用机械振荡法制备带氨基的脂质微泡造影剂（NH2-MB），并对其进行形态，粒径，电位等性质检测；然后将ADM-NPs末端的羧基用活化剂EDC/NHS活化后，与NH2-MB末端的氨基反应后共价连接到脂质微泡的表面，制备成ADM-NPs-MBComplexes（ADM-NMCs），对其进行粒径分布及每个微泡的平均载药量等性质检测并对其进行了体外释药实验观察。结果ADM-NPs粒径分布均匀，平均粒径为249.8nm，包封率为86.1%，载药量为7.8%，Ztea电位为-0.82mv；NH2-MB平均粒径为1032nm，Ztea电位为0.7mv；ADM-NMCs的平均粒径为1721nm，每个微泡平均载阿霉素量为0.28ng，低强度超声辐照后释放的药物量明显高于未辐照组。结论本实验成功制备了载阿霉素微泡-微球复合体，粒径分布均匀，载药量较高，低强度聚焦超声辐照后可明显增强药物释放率，提示载阿霉素微泡-微球复合体可在实时超声监控下爆破体内定位释放药物，实现对肿瘤的区域的靶向治疗。第二部分低强度聚焦超声靶向破坏微泡的实验研究目的探讨低强度聚焦超声体外局部靶向爆破脂质微泡的能力；探讨低强度聚焦超声体内定位靶向爆破载阿霉素微泡-微球复合体并更精确地定位释放药物的能力。方法采用机械振荡法制备普通脂质微泡，将脂质微泡稀释后放入自制的乳胶水囊中，分别用同等强度的普通诊断超声和低强度聚焦超声辐照10s后，采用二维超声显影模式观察普通诊断超声和低强度聚焦超声靶向破坏微泡的范围；选取20只健康新西兰大白兔，将新型载阿霉素微泡经兔耳缘静脉注射后，在二维超声监控下，用低强度聚焦超声辐照肝脏60s，辐照结束后，处死兔子，取出肝脏组织，分别分离距焦域不同位置处的四块肝脏组织块，用反相高效液相色谱法测定不同距离处肝脏组织所含阿霉素的量。结果普通脂质微泡在超声辐照前的声像图呈均匀的高回声，用普通诊断超声辐照后，声场内的大部分微泡被爆破呈不均匀的低回声，而低强度聚焦超声辐照后在沿超声辐照方向的微泡爆破范围呈梭形的低回声区，在与低强度聚焦超声声束垂直方向的微泡爆破范围呈圆形的低回声区，且圆形低回声区的范围随着低强度聚焦超声的声强的增大而增大。低强度聚焦超声辐照载阿霉素微泡-微球复合体后，处于辐照中心区域的肝脏组织中阿霉素含量最高，距离辐照中心区域越远，肝脏组织的阿霉素含量越低。结论与普通诊断超声相比，低强度聚焦超声具有精确靶向爆破微泡且定位释放药物的能力，因而低强度聚焦超声可更精确地进行体内载药微泡定位爆破释放药物进行肿瘤靶向药物治疗。第三部分载阿霉素微泡-微球复合体体内外显影观察及其联合低强度聚焦超声对兔VX2肝癌的作用研究目的探讨载阿霉素微泡-微球复合体造影剂对兔肝癌的超声造影效果；探讨低强度聚焦超声靶向爆破载阿霉素微泡-微球复合体定位释放药物对兔肝癌的治疗效果。方法新西兰大白兔64只，采取瘤块种植法于肝左叶植入VX2肿瘤组织块，建立VX2肝癌模型。建模14天后，选取10只荷瘤兔，随机分为两组，分别为普通脂质微泡组（经耳缘静脉注射普通脂质微泡）和载阿霉素微泡-微球复合体组（经耳缘静脉注射载阿霉素微泡-微球复合体），进行超声造影，并采用DFY-Ⅱ型图像分析软件评价超声造影效果；建模14天后，取54只荷瘤兔，随机分为6组，分别为空白对照组（经耳缘静脉注射生理盐水），低强度聚焦超声联合载阿霉素纳米微球组（经耳缘静脉注射载阿霉素纳米微球，并用低强度聚焦超声辐照），低强度聚焦超声联合脂质微泡组（经耳缘静脉注射脂质微泡，并用低强度聚焦超声辐照），低强度聚焦超声联合脂质微泡和载阿霉素纳米微球混合组（经耳缘静脉注射脂质微泡和载阿霉素纳米微球，并用低强度聚焦超声辐照），普通诊断超声联合载阿霉素微泡-微球复合体组（经耳缘静脉注射载阿霉素微泡-微球复合体，并用普通诊断超声辐照），低强度聚焦超声联合载阿霉素微泡-微球复合体组（经耳缘静脉注射载阿霉素微泡-微球复合体，并用低强度聚焦超声辐照），治疗前后用诊断超声观察肿瘤生长情况，并测量其最长径和最短径，计算各组肿瘤抑瘤率，采用免疫组化法检测肿瘤组织PCNA表达情况；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况，记录各组兔子中位生存期，比较各组存活情况。结果在超声造影模式下，普通脂质微泡和载阿霉素微泡-微球复合体经静脉注射后，肝癌区域均可见回声增强，且二者的达峰时间，峰值和体内清除时间均相似。免疫组化结果显示，低强度聚焦超声联合载阿霉素微泡-微球复合体组的肿瘤抑瘤率显著高于其它各组，肿瘤增殖明显受到抑制，增殖指数显著低于其它各组（P<0.05），细胞凋亡指数显著高于其它各组（P<0.05），动物存活时间显著长于其它各组。结论载阿霉素微泡-微球复合体具有显著的造影效果，可在二维超声的监控下靶向爆破定位释放药物。低强度聚焦超声联合载阿霉素微泡-微球复合体能显著抑制VX2肝癌的增殖，促进VX2肝癌细胞凋亡，对VX2肝癌具有显著的抑瘤效果，有望为临床肿瘤治疗提供一种安全无创的治疗方式。
【作者】宫玉萍；
【导师】王志刚；
【作者基本信息】重庆医科大学，影像医学与核医学，2014，博士
【关键词】阿霉素；脂质微泡；纳米微球；低强度聚焦超声；载阿霉素微泡-微球复合体；普通诊断超声；VX2肝癌；

【参考文献】
[1]邹雄.面试准备及显、隐性测量对结构化面试结果有效性影响的实验研究[D].重庆大学,应用心理学,2014,硕士.
[2]林西.蓝莓果干粉制备工艺和以花青素为主的化学组分研究[D].北京林业大学,农产品加工与贮藏,2013,硕士.
[3]李宁.基于绿色物流思想的配送问题研究[D].大连海事大学,交通运输规划与管理,2004,硕士.
[4]吕坤志,刘媛媛,李杰,高尚,胡来凤,蒋露露,李方实.肟菌酯关键中间体的合成[J].精细化工,2014,11:1394-1397.
[5]郦建强,李静,刘国纬,沈福新,沈国昌.我国暴雨和洪水的主要特征及其在防洪工作中应注意的问题[J].水利规划与设计.2003(04)
[6]王敬丽.两个独本菊品种氮磷钾营养研究[D].北京林业大学,园林植物与观赏园艺,2013,硕士.
[7]梁锦华.高强钢变截面辊弯成形插补控制算法优化[D].北方工业大学,机械工程,2014,硕士.
[8]徐光波.头台油田扶余油层油水分布规律与主控因素研究[D].东北石油大学,矿产普查与勘探,2013,硕士.
[9]韩迪.双相纳米镍钴合金的制备及其力学研究[D].吉林大学,材料学,2014,硕士.
[10]盖慧敏.DF公司管理信息系统改进方案研究[D].西北大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[11]万晶.建筑太阳能热水技术的经济评价研究[D].武汉理工大学,土木工程建造与管理,2012,硕士.
[12]徐子鹰.从联盟约束角度看美日同盟的走向[D].外交学院,国际关系,2014,硕士.
[13]孙海瑞.建构主义视野下我国英语教师专业发展的研究[D].华中师范大学,英语语言文学,2013,硕士.
[14]罗雪艳.探析拉赫玛尼诺夫《第二钢琴奏鸣曲》[D].西南大学,音乐学,2014,硕士.
[15]何柳.2013年美国洛杉矶皮尔斯管乐团中国巡演口译实践报告[D].河北师范大学,翻译,2014,硕士.
[16]叶力.镍和镓锰砷中的反常霍尔效应[D].复旦大学,凝聚态物理,2010,博士.
[17]马彦.两营养不良型大疱表皮松解症家系基因突变的研究[D].山西医科大学,皮肤病与性病学,2002,硕士.
[18]张媛艺,杨添翼.非洲宪法的概念与法系分析[J].哈尔滨师范大学社会科学学报,2014,05:32-34.
[19]徐龙.基于MBD的检验方法研究[D].西南交通大学,机械工程,2014,硕士.
[20]王磊.新课程促进中学化学教师专业发展研究[D].河北师范大学,学科教学,2014,硕士.
[21]王碧璇.磁性纳米材料的制备及其对水体中微量污染物的吸附性能研究[D].南昌航空大学,环境工程,2013,硕士.
[22]蔡为茂.农村改革与农村治理结构重构——永安农村建设的探索[J].探索与争鸣.2006(01)
[23]李丽丽,ZhenhaiXia,杨延清,韩明.SiC纳米纤维/C/SiC复合材料拉伸行为的分子动力学研究[J].物理学报.
[24]顾慧杰,谢俊,柳焕章,张德泉,李银红.基于调度数据网的定值单管理系统[J].电力系统自动化,2009,09:52-56.
[25]黄兆丰.中国电信绍兴分公司后付费用户话费监控系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[26]李杨.跨国通信设备公司横向并购效果研究[D].首都经济贸易大学,企业管理,2013,硕士.
[27]杨唐文1,2十,高立宁1,阮秋琦1,韩建达2.移动双臂机械手系统协调操作的视觉伺服技术[J].控制理论与应用,2015,01:.
[28]栾海燕.张明雪教授运用丹溪学派理论治疗中医心病研究[D].辽宁中医药大学,中医内科学（专业学位）,2012,硕士.
[29]陈建勋,乔雄,王梦恕.黄土隧道锚杆受力与作用机制[J].岩石力学与工程学报,2011,08:1690-1697.
[30]徐忠磊.成吉思汗草原生态园游人行为与园林环境研究[D].内蒙古农业大学,园林植物与观赏园艺,2013,硕士.
[31]姜鹏博.头皮针刺配合体针治疗肝郁化火型慢性失眠症的临床研究[D].黑龙江中医药大学,针灸推拿学（专业学位）,2014,硕士.
[32]冯勤为.第四届国际交流与直流输电会议概况[J].电力电容器.1986(01)
[33]刘张栋.石斛属植物C3/CAM代谢转换中形态结构及生理生化转变研究[D].华中农业大学,园林植物与观赏园艺,2014,硕士.
[34]范阳.Dicer在肾透明细胞癌中的表达及其功能学研究[D].中国人民解放军医学院,外科学,2013,硕士.
[35]龙琼.一类浅水波方程解的适定性问题[D].重庆大学,应用数学,2014,硕士.
[36]吴鹏,王志坚,王晓峻,周晓峰.等值线标准软件实现的研究[J].微型电脑应用,2001,07:37-39+3.
[37]王翠华,何光明,朱敏,王平.相对振幅保持技术在三维连片地震资料处理中的应用[J].石油地球物理勘探,2008,S1:12-18+195+5.
[38]杨治平.公司治理结构中的多重委托—代理关系分析[D].湖南大学,政治经济学,2003,硕士.
[39]谢丽娜.后股改时代上市公司股权激励效果研究[D].山东财经大学,会计学,2012,硕士.
[40]王丽.温阳益气法治疗阳虚寒凝型膝骨关节炎的临床疗效观察[D].广州中医药大学,中医骨伤科学（专业学位）,2013,硕士.
[41]陈永正.耳蜗正逆向驱动传声效率的实验研究和数值模拟[D].复旦大学,耳鼻咽喉科学,2013,博士.
[42]李建.n个斑块间具有路途感染的疾病传播模型[D].西南大学,应用数学,2013,硕士.
[43]岳桂军.论我国反腐网络举报的两种模式及其规范[D].中国社会科学院研究生院,公共管理（专业学位）,2014,硕士.
[44]石利娟.所得税改革对企业投资方向的影响研究[D].山东大学,会计学,2013,硕士.
[45]王科.HPM视角下数学归纳法教学的设计研究[D].华东师范大学,学科教育,2014,博士.
[46]李笑婷.石化企业生产事故应急能力评价研究[D].北京交通大学,2008.
[47]吴松.吲哚菁绿荧光血管造影在颅内动脉瘤夹闭术中的应用[D].广西医科大学,神经外科（专业学位）,2013,硕士.
[48]郝秀红.DKDP晶体的全方位生长及其光学均匀性研究[D].北京工业大学,材料学,2004,硕士.
[49]高升.论驰名商标的特殊保护[D].湘潭大学,法律,2003,硕士.
[50]李艳君.初级汉语综合课课堂练习研究[D].华中师范大学,汉语国际教育,2013,硕士.