S100A13 在人骨肉瘤细胞生长侵袭中的作用及机制研究

【摘要】目的：探讨S100A13在人骨肉瘤细胞生长侵袭中的作用及机制。方法：1.随机选取骨肉瘤患者18例和正常骨组织18例,应用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测骨肉瘤组织和正常骨组织中S100A13mRNA的表达情况；Westernblot检测骨肉瘤组织和正常骨组织中S100A13蛋白的表达情况；分析S100A13.表达量和骨肉瘤患者临床分期、预后的关系。2.Westernblot检测多种骨肉瘤细胞系和人正常成骨细胞系中S100A13蛋白的表达情况,选取表达最高细胞系进行后续的实验；构建siRNA慢病毒干扰S100A13基因的表达,检测慢病毒转染效率及干扰效果；生长曲线实验及MTT实验检测干扰S100A13对骨肉瘤细胞系生长及增殖的影响；划痕实验、基质胶侵袭实验检测干扰S100A13对骨肉瘤细胞系细胞迁移、侵袭能力的影响；活体成像系统连续观察干扰S100A13对骨肉瘤细胞系裸鼠成瘤情况的影响。3.Western-blot及ELISA检测干扰S100A13后骨肉瘤细胞系合成分泌FGF-1的情况；Western-blot检测干扰S100A13后对MAPK信号通路激活的影响。结果：1.骨肉瘤组织中S100A13mRNA和蛋白的表达较正常骨组织中的表达明显增高；EnnekingⅡ期患者中S100A13mRNA的表达量较EnnekingⅠ期患者明显增高；低表达S100A13的骨肉瘤患者比高表达S100A13的患者具有更长的无病存活期和总存活期。2.S100A13蛋白在骨肉瘤细胞系MG-63、U2-OS、HOS、Saos-2中表达均很强,尤其是在U2-OS细胞系表达最强；而在人正常成骨细胞系中S100A13表达很弱；使用慢病毒感染U2-OS细胞效率高,2条序列的干扰效果都很好；生长曲线、实验MTT实验均表明干扰S100A13的表达后,可以抑制U2-OS细胞的生长增殖；划痕实验、基质胶侵袭实验表明,干扰S100A13表达组较对照组U2-OS细胞的迁移侵袭能力明显减弱；裸鼠成瘤结果显示比较对照组,干扰组肿瘤生长受到明显抑制。3.Western-blot及ELISA检测结果显示干扰S100A13蛋白后,U2-OS合成分泌的FGF-1减少；干扰S100A13蛋白表达可以明显抑制FGF受体的激活,使得磷酸化的成纤维细胞生长因子受体的表达大幅降低,FRS2-raf-MEK-ERK通路中FRS2/P-FRS2、P-c-raf、MEK1/2/P-MEK1/2、Erk1/2/P-Erk1/2蛋白的总蛋白量未发生显著变化,但这些蛋白被激活发挥作用的磷酸化蛋白的表达量出现了大幅下调。结论：1.骨肉瘤组织中S100A13mRNA以及蛋白的表达量均高于正常骨组织；骨肉瘤中S100A13的表达量与临床分期和预后相关。2.干扰骨肉瘤细胞中S100A13的表达抑制了骨肉瘤细胞的生长增殖、侵袭转移等恶性生物学行为以及裸鼠成瘤的能力。3.S100A13通过影响FGF-1的释放以及激活MAPK信号通路促进骨肉瘤细胞的生长侵袭。
【作者】凌林；
【导师】张湘生；
【作者基本信息】中南大学，临床医学，2014，博士
【关键词】骨肉瘤；S100A13；增殖生长；侵袭转移；FGF-1；MAPK信号通路；

【参考文献】
[1]杨天琦.基于QC-MDM平台的Mobile-Hotspot研究与实现[D].西安电子科技大学,电子与通信工程,2012,硕士.
[2]孙斌.基于关联规则的某银行网管系统中通信网告警相关性分析[D].电子科技大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[3]聂建国,朱力,樊健生,李法雄.钢-混凝土组合箱梁桥杆系模型的工程应用[J].中国公路学报,2014,09:32-40+89.
[4]张雨诗.缺陷产品召回民事法律问题研究[D].辽宁大学,法律,2012,硕士.
[5]乔莉莉.重庆中老年人对子女“啃老”的态度、应对方式和生活满意度的关系研究[D].西南大学,发展与教育心理学,2014,硕士.
[6]李晓,邱玉辉.基于MAS的Web用户数据预处理[J].广西师范大学学报(自然科学版),2003,01:160-163.
[7]任文莉.吉林省白山市农村商业寿险市场发展研究[D].中南林业科技大学,农村与区域发展,2013,硕士.
[8]杨鲁君.优良黄酒酵母菌株的筛选、鉴定和发酵特性研究[D].浙江工商大学,食品科学与工程,2013,硕士.
[9]杨人真.例谈思想政治课教学中的案例选择——以“人的认识从何而来”的教学为例[J].新课程(上),2014,05:66-67.
[10]林江.中华民族传统医药产业化发展问题研究[D].中央民族大学,2005.
[11]赵小兵.银行“后大集中”时代应用热点——渠道综合前置[J].现代商业银行,2005,12:60.
[12]魏延莉.西安市免费文化场所管理研究[D].长安大学,行政管理,2013,硕士.
[13]王丝雨.吉林省固定资产投资供需实证分析及预测[D].东北师范大学,金融学,2012,硕士.
[14]刘雪.中药复方对胃粘膜细胞癌变的抑制与逆转作用研究[D].青岛大学,药物化学,2013,硕士.
[15]张荣晓.无线传感器网络路由算法研究[D].南京邮电大学,电子与通信工程（专业学位）,2013,硕士.
[16]何光辉.多层高维频繁序列挖掘算法研究[D].重庆大学,2004.
[17]金华锋,叶红兵,凌昉,朱晓彤,郑玉平.复用通道误码和延时对线路纵差保护的影响[J].电力系统自动化,2005,21:67-70+88.
[18]穆静静.高等职业教育对天津市经济增长贡献率的实证研究[D].天津职业技术师范大学,高等教育学,2013,硕士.
[19]王建伟.高技术产业化及其对策研究[J].科技导报.1999(03)
[20]徐美多.身份融合·诗艺寻美[D].黑龙江大学,中国现当代文学,2013,硕士.
[21]陆美艳.卡马西平缓释微球的制备和体外释药性能研究[D].东北大学,生物化工,2009,硕士.
[22]王薇.国产青春偶像剧研究[D].河北大学,文艺学,2014,硕士.
[23]周永春.nHA涂层BCP多孔陶瓷构建骨组织工程支架的实验研究[D].中南大学,临床医学,2014,博士.
[24]董成龙.大型汽轮机的隔板刚度特性研究[D].大连理工大学,流体机械及工程,2013,硕士.
[25]陈伍文.省管县体制下县级政府治理模式的研究[D].西北大学,公共管理（专业学位）,2012,硕士.
[26]廖小琴,孙建军,郑彦宁,潘云涛.高校微博互链网络的核心-边缘结构分析——链接结构和信息分布视角[J].情报科学,2014,01:119-123+149.
[27]张静,郑晓玲,田永乐.以功能化石墨烯为基质选择性分析富集多巴胺[A].中国化学会、国家自然科学基金委员会.中国化学会首届全国质谱分析学术研讨会会议论文集[C].中国化学会、国家自然科学基金委员会:,2014:1.
[28]邓芳.基于任务型教学模式的高中英语阅读教学研究[D].湖南师范大学,课程与教学论,2014,硕士.
[29]周凤华.地方治道变革中的居民参与[D].华中师范大学,行政管理,2003,硕士.
[30]曹雪明.黄连素预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的机制研究[D].南方医科大学,内科学,2014,博士.
[31]马国兰.飞蝗血蓝蛋白基因对其胚胎发育的影响[D].云南农业大学,农业昆虫与害虫防治,2014,硕士.
[32]陈莉,钟麦英.奇异模糊系统基于等价空间的故障检测[J].控制与决策,2011,02:182-186.
[33]张青川.膀胱癌顺铂耐药与其基因甲基化相关性研究[D].苏州大学,外科学,2013,博士.
[34]宗柳,李扬,王蓓蓓.计及需求响应的多维度用电特征精细挖掘[J].电力系统自动化,2012,20:54-58.
[35]舒红平,游志胜,王运锋,费向东.空中交通管理系统中航迹发散判据及抑制处理[J].控制与决策,2005,03:345-348+352.
[36]张佳.稻壳基二氧化硅材料的制备[D].吉林大学,物理化学,2014,硕士.
[37]王娟.光敏色素蛋白的克隆表达和藻红蓝蛋白α亚基的特性分析[D].湖北师范学院,分析化学,2013,硕士.
[38]胡玲玲.信用证与基础合同独立性问题研究[D].江西财经大学,国际贸易学,2013,硕士.
[39]曾国里.风咳停方联合阿斯美胶囊治疗感染后咳嗽临床观察[D].湖北中医药大学,中医内科学（专业学位）,2013,硕士.
[40]刘玉婕.洋金花治疗银屑病有效部位的质量标准研究[D].黑龙江中医药大学,中药学,2004,硕士.
[41]宋文龙.基于说话人自适应训练的统计参数语音合成的研究[D].西北师范大学,电子与通信工程,2013,硕士.
[42]郭丹.中国特色的女性主义翻译理论[D].首都师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[43]孙玉香.0.18um CMOS工艺下分别应用于高性能和低功耗的混频器的设计[D].复旦大学,集成电路工程,2012,硕士.
[44]刘斌.油画风景写生和油画风景创作的关系研究[D].广西师范大学,美术学,2013,硕士.
[45]任虎存.建筑垃圾回收处理技术及破碎装备的设计研究[D].山东大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[46]王蕾.北京会展经济发展的问题及对策研究[D].北京交通大学,2013.
[47]由佳.基于.Net的战略—计划管理系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2013,硕士.
[48]李佳.~(18)F -FDG PET/CT在非霍奇金淋巴瘤诊断及治疗中的意义[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.
[49]王洋.稀土元素在生物体内的积累及遗传毒理研究[D].安徽师范大学,动物学,2004,硕士.
[50]赵侠.鲆鲽鱼类养殖网箱性能优化的试验研究[D].中国海洋大学,渔业资源,2014,硕士.