食品中氟喹诺酮类抗生素酶联免疫吸附分析法及苯乙醇胺A免疫亲和色谱法的研究

【摘要】“民以食为天，食以安为先”，食品安全与人民生活息息相关。近几年，我国频发的食品安全事件，使食品安全问题成为社会关注的热点。快速、简便、准确，可靠的检测方法的建立是保障食品安全的关键所在。本研究建立了测定食品中氟喹诺酮类抗生素的间接竞争酶联免疫吸附分析法和新型瘦肉精苯乙醇胺A的免疫亲和色谱法。氟喹诺酮类抗生素种类繁多，属于化学合成抗菌药物，在临床上广泛应用。具有抗菌谱广，抗菌活性强，与其它抗菌药物无交叉耐药性等特点，也被用作食品添加剂广泛用于动物和人类的多种感染性疾病的预防和治疗。但过量或不当使用会导致动物性食品中喹诺酮类抗生素残留过量，除了其本身的毒副作用对人体造成直接危害外，更为严重的是人类长期食用含较低浓度的氟喹诺酮类抗生素的动物性食品，容易诱导耐药性的传递，从而影响该类药物的临床疗效。因此喹诺酮类抗生素残留问题越来越引起人们的关注。建立能同时检测多种氟喹诺酮类抗生素的高灵敏度、快速、简便、可靠的检测方法十分重要。在本文研究中，为了能检测更多种类的氟喹诺酮类抗生素且增强检测的灵敏度，合成了两种不同的免疫原和四种不同的包被原，制备得到两种多克隆抗体。Ⅰ号抗血清在最优的条件下，环丙沙星的灵敏度IC50和检出限LOD分别为1.82-2.67ngmL1与0.089-0.22ngmL1。Ⅳ号抗血清对诺氟沙星的灵敏度IC50和检出限LOD分别为0.61-0.93ngmL1与0.031-0.067ngmL1。Ⅰ号抗血清与恩诺沙星等9种氟喹诺酮类抗生素的交叉反应率大于5%，Ⅳ号抗血清与培氟沙星、洛美沙星等7种氟喹诺酮类抗生素的交叉反应率大于10%。说明建立的ELISA法可同时检测多种氟喹诺酮抗生素且具有ngg-1级高灵敏度的优势。本实验选择了奶粉，猪肉样品作为加标回收实验样品，分别考查了恩诺沙星、诺氟沙星的加标回收用于ELISA测定，回收率在86.16–118.25%之间，批内变异系数为3.92–16.07%(n=3)，批间变异系数为1.66-14.7%(n=3)，与HPLC实验结果相关系数均大于0.9，相关性好。基于二者方法的一致性，因而本文建立的ELISA法是一种可靠的检测食品中氟喹诺酮类抗生素的分析方法。苯乙醇胺A是近几年在我国发现的一种在饲料中非法添加的新型瘦肉精。研究发现人食用含苯乙醇胺A的猪肉后，可出现恶心、头晕、四肢无力等中毒症状，对心脏病、高血压患者危害更大。长期食用则有可能导致染色体畸变，会诱发恶性肿瘤。因此，建立快速、准确检测食品样品中苯乙醇胺A的方法迫在眉睫。采用免疫亲和柱和液相色谱联用技术不仅简化样品处理步骤，缩短样品分析时间，且运用色谱法检测结果准确可靠。本研究建立了能特异性萃取猪饲料、猪肉和猪肝样品中苯乙醇胺A的免疫亲和色谱法。免疫亲和柱的制备是将高特异性的苯乙醇胺A抗体偶联在活化的Sepharose4B上制成。优化了上样、淋洗、洗脱等实验条件。在最优的条件下，对免疫亲和柱进行了最大柱容量、选择性、萃取回收率以及稳定性的表征。测得亲和柱的最大柱容量为239.4ng，且具有高特异性，常见几种β-激动剂均不干扰测定。当苯乙醇胺A的上样量分别为10，50，100ng时，萃取回收率在96.47%-101.98%之间。在实际样品加标回收实验中，猪饲料、猪肉、猪肝的加标量为1.0-20ngg-1，由HPLC检测得到回收率为89.48%-104.86%，相对标准偏差为3.68%-13.16%，均在合理范围内。且柱子的稳定性良好，同一根亲和柱在重复使用35次之后，保留了60%的最大柱容量，还可继续使用。本文建立的苯乙醇胺A免疫亲和亲和色谱法具有高的柱容量，选择性，萃取效率和稳定性，是一种可以从复杂基质样品中萃取苯乙醇胺A的可行方法。
【作者】梅丽芸；
【导师】邓安平；
【作者基本信息】苏州大学，分析化学，2014，硕士
【关键词】氟喹诺酮类抗生素；酶联免疫吸附分析法；苯乙醇胺A；免疫亲和色谱法；

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